ICS 11.120.01 CCS B38 43 湖南省 地方 标准 DB 43/T 2582—2023 多花黄精组织培养育苗技术规程 Code of practice for propogation via tissue culture of Polygonatum cyrtonema Hua 2023 - 04 - 10发布 2023 - 07 - 10实施 湖南省市场监督管理局 发布 DB 43/T 2582 —2023 I 目次 前言............................................................................... III 1 范围 .............................................................................. 1 2 规范性引用文件 .................................................................... 1 3 术语和定义 ........................................................................ 1 4 组培室消毒处理 .................................................................... 1 5 外植体采集 ........................................................................ 1 6 外植体处理 ........................................................................ 1 7 培养基制备 ........................................................................ 2 8 组织培养 .......................................................................... 2 9 移栽 .............................................................................. 2 10 出苗 ............................................................................. 3 11 包装、标志、运输 ................................................................. 3 12 档案管理 ......................................................................... 4 附录A（资料性） 组织培养配方 ........................................................ 5 附录B（资料性） 生产档案 ............................................................ 6 DB 43/T 2582 —2023 III 前言 本文件按照 GB/T 1.1 —2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由湖南省农业农村厅提出。 本文件由湖南省农业标准化技术委员会归口。 本文件起草单位：湖南农业大学、湖南岳麓山中药材创新中心有限公司、湖南省农业环境生态研究 所、湘西土家族苗族自治州农业科学研究院、湖南省棉花科学研究所、湖南省中药材产业协会、新化县 中药材协会、湖南银鸿农业发展有限公司、新化县天龙山农林科技发展有限公司、湖南华夏湘众药业饮 片有限公司、新化县颐朴源黄精科技有限公司、安化中源农业发展有限公司、株洲济世农业发展有限公 司。 本文件主要起草人：严蓓、曾建国、南小航、宋荣、雷艳、贺璐、李庠、熊绍军、孙梦珊、周利、 朱校奇、杨子墨、蒋双辉、王秋娇、周伊昀、刘智、邹辉、蒋丰登、王伯求。 DB 43/T 2582 —2023 1 多花黄精组织培养育苗技术规程 1 范围 本文件规定了多花黄精组织培养育苗过程中组培室消毒处理、外植体采集、外植体处理、培养基制 备、组织培养、炼苗与移栽、出苗、包装运输、档案管理等技术要求。 本文件适用于湖南省多花黄精组织培养育苗。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB 4285 农药安全使用标准 GB/T 8321 农药合理使用准则（所有部分） LY/T 1882 林木组织培养育苗技术规程 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 多花黄精 Polygonatum cyr tonema Hua 百合科黄精属的多年生草本植物，中药材黄精基源植物之一。根状茎肥厚，少有近圆柱形，茎高可 达100 cm ，叶互生，椭圆形、卵状披针形至矩圆状披针形，伞形花序，花被黄绿色，浆果黑色， 5月～ 6月开花， 8月～10月结果。 4 组培室消毒处理 组培室用 1000 倍液 84消毒液或 75%乙醇喷洒地面，保持室内清洁。超净工作台用紫外灯照射 30 min，随后关闭紫外灯通风 20 min 以上，用湿拖把轻轻打扫超净工作台四周，降低尘埃，接着用 75％ 乙醇擦拭台面操作区域。 5 外植体采集 取种子萌发形成的幼芽，用解剖刀从芽的萌发的基部切下； 取无病害，无腐烂，根系发达的多花黄精根状茎健壮芽头，在芽点以下 2 cm～3 cm 处，用解剖刀 切下。 6 外植体处理 清洗 DB 43/T 2582 —2023 2 放入器皿中用洗衣粉等清洁剂清洗后用自来水流水冲洗 1 h～2 h。 消毒 清洗好的外植体转入超净工作台进行操作，将芽块放入灭菌后的烧杯内，用 75%酒精清洗 30 s，无 菌水冲洗 3次～5次， 5%次氯酸钠溶液浸泡 12 min～15 min，最后用无菌水冲洗5 次～6次。 7 培养基制备 培养基配方 初代培养基、继代培养基、生根培养基的配方见附录 A。 培养基配置、灭菌与保存 参照LY/T 1882 执行。 8 组织培养 培养条件 培养室培养温度 25℃±2℃，光照时间 12 h/d，光照强度 1500 lx～2000 lx。 初代培养 黄精芽块灭菌后在接种盘中切掉芽块下部，只留取 0.5 cm～1 cm大小的芽点，迅速接种到初代培养 基中，培养 30 d～50 d，分化产生4 个～6 个丛生芽时，转入继代培养基中进行培养。 继代培养 切取其丛生芽转入继代培养基中进行增殖培养，反复接种继代培养 4次～5次后，转入生根培养基中 进行生根培养。继代培养的时间以 30 d～45 d为宜，增殖率为4 倍～7倍，继代次数不超过 15次。 生根培养 将诱导形成的大小相近的继代苗， 在超净工作台上切割为单株， 接种到生根培养基中培养， 培养 25 d～30 d，当根系铺满培养瓶 底部即可进行炼苗移栽。 炼苗 8.5.1 炼苗标准 当试管苗拥有 1个以上的健壮根状茎，生长 4条～5条根时，可进行炼苗处理。 8.5.2 驯化 将装试管苗的培养瓶从培养架上取下，转移到20 ℃～25℃温室中，自然散射光下炼苗， 封口炼苗 3 d～5 d，开瓶炼苗1 d ～2 d后即可移栽。 9 移栽