I C S 备案号： 21202- 2007 青 海 省 地 方 标 准 D B 63 D B 63 D B 63 D B 63 D B 6 3 / T 6 6 9 — 2 0 0 7 实验 室冬虫 夏草子 囊孢子 采集、 净化、 保存 技术规 程 2 0 0 7 - 0 9 - 1 1 发布 2 0 0 7 - 1 1 - 0 1 实施 青 海 省 质 量 监 督 局 发 布 发 布 发 布 发 布 D B 63/ T 669 — 2007 I 目 次 前言 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . II 1 范围 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 2 采集工具 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 3 土壤浸出液制作 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 4 采集方式 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 5 子囊孢子的净化 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 6 保存 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 D B 63/ T 669 — 2007 I I 前 言 本规程依据 GB/T1.1-2000 《标准化工作导则》 ， 在 参阅有关资料， 结合多年来的实践经验， 本着 科 学、实用、先进的原则特制定青海省冬虫夏草子囊孢子采集、净化、保存技术规程。 本规程由青海省畜牧兽医科学院提出并归口 本规程由青海省畜牧兽医科学院草原所负责起草 本规程起草人 : 李玉玲、马少丽、徐海峰、张宗豪、刘兆红、索昂文江、杨青英、蒋卫平、王晓燕 本规程自 2007 年 11 月 1 日起实施。 D B 63/ T 669 — 2007 1 实验室冬虫夏草 子囊孢 子采集 、净化 、 保存技术规程 1 范围 本规程规定了实验室冬虫夏草子囊孢子的采集、净化和保存技术措施。 本规程适用于实验室冬虫夏草人工培养研究中子囊孢子采集、净化和保存时应用。 2 采集工具 2.1 采集箱的规格 采集箱一般大小为 600 mm × 400 mm ，也可以根据具体的情况适当更改箱体的体积。 2.2 采集箱内栽植方式 每箱内平均栽种 30 支子座充分发育的冬虫夏草，栽植的冬虫夏草株行距不得少于 100 mm 。 2.3 采集袋 采集袋通常采用 70 mm × 40 mm 硫酸纸。 3 土壤浸出液制作 取虫草产地的土壤 1000 g ， 加 蒸馏水 1000 ml ， 煮沸 5min ， 过滤 。 滤液 经 115 ℃ 、 30min 消毒， 即 为 1 ： 1 的土壤浸出液，用蒸馏水稀释为 1 ： 10 即得。 4 采集方式 4.1 野外采集 在冬虫夏草产区放置木箱或质地较硬的纸箱，填土至箱体的 2/3 处，土壤应为冬虫夏草产区的腐殖 土， 土壤含水量为 40% ～ 60% 。 将虫体部分埋入土中， 露 出子座部分， 每日喷洒经高压消毒的蒸馏水， 保 持土壤湿润，达到 10% ～ 20% ，待子囊开始弹射孢子时进行套袋采集。 4.2 室内采集 4.2.1 箱内采集：在洁净、通风良好的室内放置采集箱，放置地点应有太阳直射光的照射，等子囊开 始弹射孢子时进行套袋采集，每日观察记录室内自然温度和湿度，保持箱内土壤湿润而不泥泞。 4.2.2 孢子采集器：自制子囊孢子玻璃采集器，容积为 30mm × 10mm × 20 mm ，内放 30mm × 10mm × 10 mm 的海绵，在海绵中加入 1 ： 10 的土壤浸出液，然后将虫草虫体部分插入低密度大孔隙海绵中，套好 子囊孢子采集袋，最后用纱布夹药棉将采集器顶部封严。放置地点应有太阳直射光的照射。 5 子囊孢子的净化 将采集、 保 存的子囊孢子连同纸袋一起浸孢在 1 ： 10 的土壤浸出液中， 在 1000 转 / 分钟离心机上离 心 10min ， 依次用 10% 、 20% 的蔗糖溶液分别洗涤后离心 2 次， 再用 50% 蔗糖溶液离心 30min ， 弃上清液后， 采 集浮于液面的子囊孢子，放置 -8 ℃ ～ -12 ℃ 的冰箱中。 6 保存 6.1 冷冻： 将采集的子囊孢子连同纸袋一起剪下，放入冰箱的冷冻室内（ -8 ℃ ～ -12 ℃ ）保存， 6 个 月以上应每隔 30 天做一次萌发试验，观察萌发率的变化，萌发率低于 30% 时应及时转管复活。