ICS65.020.20 B05 T/SDYY 团体标准 T/SDYY117—2022 葡萄生单轴霜霉菌引起的霜霉病抗 性鉴定技术规程 TechnicalProceduresforresistanceidentification ofgrapevinedownymildewcausedbyPlasmoparaviticola 2022-10-20发布 2022-11-20实施 山东园艺学会发布 全国团体标准信息平台 目次 前  言.............................................................................................................................................1 1范围...................................................................................................................................................2 2术语和定义.......................................................................................................................................2 3接种体制备.......................................................................................................................................2 4田间抗性评价...................................................................................................................................2 5离体抗性鉴定与评价.......................................................................................................................3 全国团体标准信息平台 1前  言 本标准按GB/T1.1-2020给出的规则起草。 本标准由青岛农业大学提出。 本标准由山东省园艺学会归口。 本标准起草单位：青岛农业大学、上海交通大学、北京市农林科学院林业果树研究所、南京农业大学、山 东省葡萄研究院、青岛中农智慧控股集团有限公司、山东青大种苗有限公司、山东志昌农业科技发展股份有 限公司、莱西市良种繁育场。 本标准起草人：冷翔鹏、傅佩宁、卢江、李勃、孙磊、房经贵、王晨、刘更森、孟庆福、慕茜、季兴龙、 任怡然、战良、张志昌、崔振华、吕智敏 ¡£ 全国团体标准信息平台 2葡萄生单轴霜霉菌引起的霜霉病抗性鉴定技术规程 1范围 本标准规定了葡萄霜霉病抗性鉴定的术语和定义、接种体制备、田间抗性评价和离体抗性鉴定与评价标 准。 本标准适用于各种葡萄资源对葡萄霜霉病抗性的鉴定及评价。 2术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 2.1葡萄霜霉病 由葡萄生单轴霜霉菌[Plasmoparaviticola（Berk.&Curtis.）BerletdeToni]所引起病害。该病害在葡萄叶片、 新梢、卷须、花序、幼果等绿色组织均可发生，以叶片发病为主；发病前期叶片正面及其它发病组织出现淡 黄色水渍状斑点；发病后期叶片背面及其它发病组织出现白色霜状霉层；发病严重的组织逐渐变褐、枯萎， 最后死亡。 2.2病情指数 通过对植物个体发病程度（病情级别）数值的计算所获得的数值化描述形式。 3接种体制备 3.1病原物采集 从田间采集新鲜的葡萄霜霉病病叶，在流水下用毛笔刷除病斑上的霜霉菌霉层，用干净的吸水纸将叶背 表面的水分吸干，叶背朝上放置在底部铺有湿润滤纸的培养皿内，用保鲜膜密封后，放置于人工气候培养箱 中，在22℃，相对湿度（RH）90%，12h周期交替黑暗、光照条件下保湿培养。待长出白色霜状霉层后，用 无菌水冲洗霜状霉层，获得分离物。分离物经鉴定确定为葡萄生单轴霜霉菌后，稀释至1×105个/mL孢子囊浓 度用于接种。 3.2病原物繁殖 取新鲜干净的感病葡萄品种叶片，无菌水冲洗后用干净的吸水纸擦干。将其叶背朝上放置在底部铺有湿 润滤纸的培养皿内，取1×105个/mL浓度的孢子囊悬浮液接种在叶背表面。将接种完成、密封后的培养皿放置 于人工气候培养箱中，在22℃，相对湿度（RH）90%，12h周期交替黑暗、光照条件下培养。 3.3病原物保存 3.3.1活体保存 在适宜环境条件下，定期将葡萄生单轴霜霉菌人工接种于感病葡萄品种叶片上并保存在人工气候箱中。 3.3.2离体保存 收集已发病葡萄叶片表面的霜霉菌孢子囊，保存至5%的DMSO溶液中，密封后放置于-80℃的冰箱中。 4田间抗性评价 4.1鉴定设计 选择葡萄霜霉病发病高峰的夏季作为鉴定时期，在同一试验田中统计不同葡萄品种感染霜霉病的情况。 从每株葡萄上部、中部和下部各抽取30片叶进行调查。每个品种选择3株，每株重复3次。 SDYY 全国团体标准信息平台 34.2抗病等级鉴定 叶片发病程度按照病斑占叶片面积比例定义，数据以目测法结合Photoshop软件分析法统计，标准如下： 0级：完全不发病 1级：病斑面积占叶面积5%以下（含5%，下同）； 2级：病斑面积占叶面积5%～25%； 3级：病斑面积占叶面积25%～50%； 4级：病斑面积占叶面积50%～75%； 5级：病斑面积占叶面积75%以上或叶片枯死。 利用叶片发病程度计算整株病情指数：病情指数=[∑（受害级别×该级叶片数）／总叶数×5]×100。 整株抗病等级评价按照病情指数大小进行划分，标准如下： 1级：病情指数高于19.0。 3级：病情指数位于11.0～19.0之间； 5级：病情指数位于5.0～11.0之间； 7级：病情指数位于0.1～5.00之间； 9级：病情指数0-0.1之间； 5离体抗性鉴定与评价 5.1鉴定室条件 离体接种鉴定室应避风、洁净，且远离其他实验材料以避免霜霉菌扩散、污染。 5.2鉴定对照品种 鉴定时可选用汤普森无核等感病品种作为感病对照，以确保本次鉴定霜霉菌生长正常。 5.3鉴定设计 离体葡萄霜霉病抗性按照如下步骤进行鉴定： （1）在10叶期（一般5月上中旬），采集新梢第5或第6片完全展开的嫩叶； （2）叶片取回后用无菌水冲洗3～5遍，将叶表面杂质洗净； （3）用打孔器将洗净后的叶片分离成直径1cm的叶盘； （4）将灭过菌的滤纸平铺到一次性无菌培养皿上，并用无菌水打湿； （5）每个单株采集16个叶盘，并将叶盘背面朝上摆放在盛有湿润滤纸的培养皿上，然后用无菌滤纸将叶 盘背面水分吸净； （6）将生长健壮的霜霉菌孢子囊浓度调成1×105个/mL； （7）用20μL量程的移液器在每个叶盘中心滴20μL菌液； （8）在22℃，12h/12h光周期条件下培养； （9）培养24h后用无菌滤纸将叶盘表面菌液吸净； （10）继续在22℃，12h/12h光周期条件下培养，一般接菌后第4天可观察到明显的霜霉菌菌斑； （11）在接菌后第4～6天分别对叶盘拍照，用于后续霜霉菌抗性的评价。 SDYY 全国团体标准信息平台 45.4离体抗病等级评价 依照OIV452-1法评价霜霉病抗性 OIV452-1表示国际葡萄与葡萄酒组织（TheInternationalOrganisationofVineandWine，OIV）提 出的葡萄表型评价标准中第452-1个评价标准，主要用来分析霜霉菌在叶盘上生长状况及叶片反应的总体指标。 所有叶盘抗性被分成5个等级（1、3、5、7及9）： 1级：孢子囊密度非常高，透过长菌部位完全无法看到叶片； 3级：孢子囊密度很高，但透过长菌部位隐约能看到一点叶片； 5级：孢子囊密度中等，透过长菌部位能清晰的看到叶片，同时在霜霉菌侵染区域有坏死表型； 7级：孢子囊密度很低，在叶片上只有零零散散几个地方有菌，同时菌侵染区域叶片有明显坏死表型； 9级：孢子囊密度极低或者没有孢子囊，同时，叶片只有少量坏死或者完全没有反应。 SDYY 全国团体标准信息平台