ICS 65.020.01 CCS B16 15 内 蒙 古 自 治 区 地 方 标 准 DB15/T 2559—2022 油菜抗黑胫病室内鉴定技术规程 Technical code of practice for indoor resistance evaluation of canola against leptosphaeria biglobosa 2022-05-25 发布 2022-06-25 实施 内蒙古自治区市场监督管理局 发 布 DB15/T 2559—2022 前 言 本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件由内蒙古自治区农牧厅提出。 本文件由内蒙古自治区农业标准化技术委员会（SAM/TC 20）归口。 本文件起草单位：内蒙古自治区农牧业科学院、特泥河农牧场有限公司。 本文件主要起草人：宋培玲、李子钦、杨永青、燕孟娇、皇甫海燕、贾晓清、皇甫九茹、郭晨、赵 丽丽、史志丹。 I DB15/T 2559—2022 油菜抗黑胫病室内鉴定技术规程 1 范围 本文件规定了油菜黑胫病的室内鉴定技术中孢子悬浮液制备、接种方法、病情调查及抗病性评价和 鉴定的方法。 本文件适用于内蒙古油菜生产品种、新育成品-种、区域试验品种、亲本及育种中间材料的黑胫病 抗性鉴定和抗性评价。 2 规范性引用文件 本文件没有规范性引用文件。 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 油菜黑胫病 phoma stem canker 小球腔菌属 Leptosphaeria biglobosa 侵染引起的油菜病害。 L.biglobosa侵染叶片后，形成具有黄色外缘的典型病斑，病斑内含有黑色分生孢子器。患病茎秆， 在茎上部形成灰白色病斑，其上有黑色分生孢子器，病斑具有黑色边界。 4 病原菌 病原菌来源 病原菌从内蒙古油菜地中发病植株上分离获得，结合形态学和分子水平鉴定为（L.biglobosa）， 中等致病力。 病原菌的培养及孢子悬浮液的制备 将低温保存的黑胫病菌菌丝体接种在PDA平板上，置于25 ℃恒温培养箱中活化培养。培养14 d后， 将3 ml～5 mL无菌水加在已产孢的 L．biglobosa平板内，静置10 min，无菌载玻片轻刮平板表面，使 分生孢子充分释放并悬浮于无菌水中，2 层无菌纱布过滤获得孢子悬浮液，利用血球计数板计数并将浓 7 度调整为1×10 个/mL，备用。 5 鉴定品种幼苗培养 将供试材料的种子播种在装有无菌土的营养钵（13 cm×13 cm）中，每个品种播种3钵，每钵播10 粒，置于25 ℃、16 h/8 h（光照/黑暗）条件下，待油菜长出两片子叶时，用于接种。 1 DB15/T 2559—2022 6 抗病性鉴定 子叶穿刺接种 7 油菜子叶期，用无菌针在子叶中央轻刺一下，伤口处接种10 μL 1×10 个/mL黑胫病菌孢子悬浮 液，同时以接种等量无菌水为对照。接种后，套上内部湿润的塑料袋，21 ℃下黑暗保湿培养48 h以 上。 病情调查 接种10 d后，根据油菜黑胫病子叶接种鉴定病情分级标准（表1）对接种叶片进行调查，并计算病 情指数。 表1 油菜黑胫病子叶接种鉴定病情分级标准 病级 症状 0 接种点周围无症状可见 1 接种点周围呈轻微黑色，有黄色晕圈 3 接种点周围出现 1.5-3.0 mm 坏死斑，或有黄色晕圈，有的产生孢子 5 接种点周围出现 3.0-6.0 mm 坏死斑，有的坏死组织有明显的边缘 7 组织灰绿色萎蔫，3.0-6.0 mm 坏死斑，有明显的边缘，有的形成分生孢子器 9 病斑腐烂，叶片枯死，上面有大量的分生孢子器 病情指数（ID）计算公式： ………………（1） 式中： ID ——病情指数； i ——病害级别，i=0,1,3,.....，n（0——健株级别；n——最严重病害级别）； Xi——第i级的病株数（i= 0时，X0为0级健株数）； ∑——求和号，∑表示对它后面的变量（i×Xi）求和，即从第一个（i=1）累加到最后一个（n）； n ∑ Xi 一一调查总株数（病株和健株）。 i=1 品种抗性水平划分 依据病情指数计算公式计算病情指数，根据表2进行油菜抗黑胫病等级划分。 2 DB15/T 2559—2022 表2 油菜黑胫病抗性分级标准 抗病性 病情指数 抗病性 病情指数 高抗( HＲ) DI=0 低感(LS) 40 ＜ DI≤60 中抗( MＲ) 0 ＜ DI≤20 中感(MS) 60 ＜ DI≤80 低抗( LＲ) 20 ＜ DI≤40 高感(HS) DI ＞ 80 3 DB15/T 2559—2022 参 考 文 献 [1] 李欣洲,宋培玲,郝丽芬等.油菜黑胫病菌( Leptosphaeria biglobosa)侵染条件研究[J].华北 农学报.2013，28(2):235-238. [2] Delwiche PA．Genetic aspects of blackleg(Leptosphaeria maculans) resistance in rapeseed(Brassica napus)[D]. Madison: University of Wisconsin，1980，144． [3] Somda I，Renard M，Brun H． Seedling and adult plant reactions of Brassica napusB．juncea recombinant lines towards A and B group isolates of Leptosphaeria maculans [J]． Annals of Applied Biology，1998，132:187-196． 4