65.020.01 CCS B 05 ICS DB21 辽 宁 省 地 方 标 准 DB21/T 3610—2022 紫叶稠李组培技术规程 Technical regulation on tissue culture of Padus virginiana 2022 - 07 - 30 发布 辽宁省市场监督管理局 2022 - 08 - 30 实施 发 布 DB21/T 3610—2022 目 次 前言 ................................................................................ II 1 范围 ............................................................................... 1 2 规范性引用文件 ..................................................................... 1 3 术语和定义 ......................................................................... 1 4 外植体采集与处理 ................................................................... 2 5 培养基配制 ......................................................................... 2 6 外植体消毒 ......................................................................... 3 7 培养条件 ........................................................................... 3 8 组织培养 ........................................................................... 3 9 温室炼苗与驯化 ..................................................................... 3 10 定植 .............................................................................. 4 11 档案管理 .......................................................................... 4 附 录 A （资料性） 紫叶稠李生物学特性 .............................................. 5 附 录 B （资料性） 常用植物生长调节物质配制方法 .................................... 6 I DB21/T 3610—2022 前 言 本文件依据GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件得结构和起草规则》给出的规 则编写。 本文件由辽宁省林业和草原局提出并归口管理。 本文件起草单位：辽宁省沙地治理与利用研究所。 本文件主要起草人：王斯彤、曹宇、王曼、成文博、金星、迟琳琳、王帝沣、张柏习、王浩、刘淑 玲、李红、艾婷婷、陈江燕、白雪峰、刘建华、安宇宁、石亮、张日升、韩辉、王贺秋、尚健。 本文件发布实施后，任何单位和个人如有问题和意见建议，均可以通过来电和来函等方式进行反馈， 我们将及时答复并认真处理，根据实际情况依法进行评估及复审。 归口管理部门通讯地址：辽宁省林业和草原局（沈阳市和平区太原北街 2号），联系电话： 024-23448927。 文件起草单位通讯地址：辽宁省沙地治理与利用研究所（阜新市细河区中华路东段55号），联系电 话：0418-3996169。 DB21/T 3610—2022 紫叶稠李组培快繁技术规程 1 范围 本文件规定了紫叶稠李（Padus virginiana）组织培养快速繁殖技术方法，具体包括外植体的采集与 处理、培养基的配制、组织培养程序等技术和要求。 本文件适用于辽宁省范围内紫叶稠李的组培快繁育苗。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件，不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 6001-1985 育苗技术规程 LY/T 1000-2013 容器育苗技术 LY/T 1882-2010 林木组织培养育苗技术规程 NY/T 2306-2013 花卉种苗组培快繁技术规程 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 紫叶稠李 Padus virginiana 为蔷薇科（Rosaceae）稠李属（Padus）落叶乔木。生物学特性参见附录 A。 3.2 外植体 explant 用于植物组织培养的离体植物器官、组织、细胞以及原生质体。 3.3 母液 stock solution 按照培养基配方将培养基的成分配制成一定浓度和比例的溶液或混合溶液。 3.4 初代培养 primary culture 将经灭菌处理的外植体接种于琼脂培养基上，诱导出愈伤组织或芽的培养过程。 1 DB21/T 3610—2022 3.5 继代培养 subculture 外植体经初代培养后，再次以及以后各次接种于新培养基继续培养的过程。 3.6 生根培养 rooting culture 诱导无根试管苗产生根的过程。 4 外植体采集与处理 4.1 外植体采集 外植体的采集一般在 6 月中旬，选择优良母树当年生茎段作为外植体，采集宜在晴天进行，宜随采 随用，若需长途运输，需将外植体保存在装有冰块放入保鲜盒中。 4.2 外植体处理 将采集的外植体枝条进行如下处理：剪除枝条上的叶片，并将其剪成长约2 cm～3 cm的带腋芽（顶 芽）茎段，放入烧杯中用洗衣粉或洗洁精浸泡5 min，流水冲洗2 h～3 h，再用蒸馏水冲洗2次，转至超 净工作台上备用。 5 培养基配制 5.1 MS 培养基母液配制 MS 培养基母液配制注意如下事项。 a) 母液配制使用蒸馏水。 b) 配制大量元素母液时，每个组分单独溶解，避免沉淀发生。 c) 配制后的母液应置于 4℃冰箱中冷藏保存，微量元素母液用棕色瓶盛装保存，母液配制后应贴好标 签，注明名称、配制日期并及时使用，贮存时间不宜超过 3 个月，发现有沉淀或絮状物出现应停止 使用。 5.2 植物生长调节物剂母液配制 植物生长调节物质母液的配制浓度为 0.1 mg/mL～1.0 mg/mL，其配制方法参见附录 B。母液配制好 后贴好标签并置于 4℃冰箱中冷藏，保存期不超过 3 个月。 5.3 培养基制作 培养基的制作按LY/T 1882中4.2中执行。培养基配制参考用量见附录B。 5.4 培养基灭菌 培养基灭菌按 LY/T 1882 中 4.2 执行 5.5 培养基保存 DB21/T 3610—2022 灭菌后的培养基应注明编号及配制日期，同时按培养基种类、配制先后顺序分别储存于接种室或培 养室。存储时间不宜超过2周。 5.6 培养基配方 初代培养：MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.05 mg/L 或 MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA0.1 mg/L；继代培养：MS+6-BA 0.8 mg/L+NAA0.08 mg/L；生根培养：MS+NAA0.5 mg/L。 6 外植体消毒 在超净工作台上，用 0.1%的 Hgcl2 消毒液浸泡顶芽部分 1 min～3 min，腋芽部分 2 min～5 min， 用无菌水冲洗 5 次~7 次，再用无菌滤纸吸干水分后，最后剪成 1.5 cm~2.5 cm 的单芽茎段备用。 7 培养条件 培养室内温度为25±2℃，光照强度为2000 Lx，光照时间为每天12 h～16 h。 8 组织培养 8.1 初代培养 将已消毒的外植体接种在初代培养基上，接种操作参照NY/T 2306中10.5执行。用记号笔在培养瓶 上注明接种日期、编号或名称，放至培养室进行培养。10 d～15 d后芽开始萌发，20 d左右茎尖变绿并 伸长生长，茎段腋芽萌发新芽，诱导30 d左右可获得1cm～2 cm的新芽。 8.2 继代培养 将初代培养诱导形成的幼芽或丛生芽，接种到增殖培养基上进行培养。增殖培养周期为30 d～40 d。 8.3 生根培养 选取壮苗高2 cm～3 cm的幼苗，接种于生根培养基中进行生根培养。 9 温室炼苗与驯化 9.1 炼苗 生根培养2～3周后，选取叶片绿色、株高大于3 cm，根长1.5 cm～2.5 cm，须根柔软且不少于3条 的无菌苗，将组培苗置于温室自然散射光下，封口炼苗2 d～3 d，温度范围在 18℃～28℃。 9.2 驯化 驯化基质为细河沙、珍珠岩与草炭土比例为1:1:1，并加入0.5 g/L的多菌灵搅拌均匀，然后装入穴 盘中压紧待用。将无菌苗从培养容器中取出，将根部粘附的琼脂用清水（或用0.01%高锰酸钾）清洗干 净，移到营养钵中，用基质将根埋好，浇水，覆膜，在膜上扎几个透气小孔。每天用细雾喷壶喷水，使 环境湿度保持在90%左右。外面用遮阳网罩着，避免阳光直射。当发现小苗基部或基质上出现白色絮状 菌丝时，用多菌灵液喷洒基质。驯化时间为2周～3周。 3 DB21/T 3610—2022 9.3 移栽 经过驯化后，当苗木表现为叶色深绿、叶片增大、有新叶长出时，将苗木移栽至12 cm×12 cm相同 基质的营养钵中培养。 9.4 苗期管理 a) 水肥管理 移栽后，每天向叶面喷水1次，在遮阴且通风条件下培养。1周后，撤掉遮荫，注意通风。施肥管理 参照GB/T 6001执行。 b) 病虫害防治 当发生红蜘蛛危害时，可喷施500倍～1000倍的乐果稀释液防治。 10 定植 翌年春季移栽至圃地。容器苗的定植参考LY/T 1000执行。 11 档案管理 每批移栽驯化的苗木都要配有标签，并建立管理档案，按LY/T 1000执行。 DB21/T 3610—2022 AA 附 录 A （资料性） 紫叶稠李生物学特性 紫叶稠李（Padus virginiana）为蔷薇科落叶乔木，树高可达 7 m。树皮灰褐色，小枝紫红色，有光 泽。单叶互生，叶缘有锯齿，近叶片基部有 2 腺体。叶质地较厚