ICS11.220 CCS B 43 DB 62 甘肃 省地 方标准 DB62/T2686—2023 代替DB62/T2686-2016 羊巴氏杆菌病防治技术规范 Technical specification for prevention and treatment of Ovis pasteurellosis 地方标准信息服务平台 2023-08-23发布 2023-09-25实施 甘肃省市场监督管理局 发布 地方标准信息服务平台 DB62/T2686—2023 前言 本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起 草。 本文件代替DB62/T2686-2016《羊巴氏杆菌病防治技术规范》，与DB62/T2686-2016相比，除结构 调整和编辑性改动外，主要技术变化如下： a）删除了引言； b) 更改了规范性引用文件； 增加了实验室诊断中的PCR鉴定；增加了PCR鉴定所需的引物序列；增加了种属PCR及分 型鉴定； d) 增加了结果判定； e）修改了药物治疗。 本文件由甘肃省农业农村厅提出并监督实施， 本文件由甘肃省动物卫生标准化技术委员会归口。 本文件起草单位：甘肃农业大学、甘肃省动物疫病预防控制中心、甘肃省畜牧技术推广总站、碌曲 县动物疫病预防控制中心、甘肃省绵羊繁育技术推广总站、静宁县畜牧兽医中心雷大蓄牧兽医站、渭源 县庆坪镇畜牧兽医站、碌曲县玛艾镇畜牧兽医工作站、临泽县农业农村局、定西市岷县禾驮镇畜牧兽医 工作站、临泽县蓼泉镇畜牧兽医工作站、临泽县新华镇畜牧兽医工作站、山丹县动物疫病预防控制中心、 山丹县东乐镇农业农村综合服务中心。 本文件主要起草人：王文莉、李岩、马胡赛、王鹏程、黄耀华、戴雄雄、张芳玲、索南卓玛、王耀 东、包苏琴、崔家仁、马吉军、杨明国、程博、马应举、王新武、张宝林。 本文件所代替文件的历次版本发布情况为： 2016年首次发布为DB62/T2686-2016，本次为第一次修订。 本文件由甘肃省动物疫病预防控制中心解释。 标准信息服务平台 1 地方标准信息服务平台 DB62/T2686—2023 羊巴氏杆菌病防治技术规范 1范围 本文件规定了羊巴氏杆菌病的诊断、结果判定、预防、治疗的技术要求。 本文件适用于羊巴氏杆菌病的防治。 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 文件。 GB/T27530牛出血性败血病诊断技术 NY/T5030无公害农产品兽药使用准则 中华人民共和国兽药典（2020年版） 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 羊巴氏杆菌病 由多杀性巴氏杆菌引起以败血症和和炎性出血过程为主要特征的一种羊的传染病。 地方标准 4诊断 4.1流行特点 4.1.1易感动物 4.1.2传染源 患病动物和耐过动物是主要传染源。多杀性巴氏杆菌存在于患病动物全身各组织、体液、分泌物及 排泄物里。健康羊的上呼吸道也可能带菌。 4.1.3传播途径 多杀性巴氏杆菌随患病动物分泌物和排泄物排出体外，主要经消化道感染，也可经呼吸道感染（飞 沫传播），皮肤、黏膜伤口也可感染。在牧区，吸血昆虫叮咬也是传播疾病的重要途径。健康带菌羊在 受寒、长途运输、饲养管理不当等情况导致抵抗力降低时，可发生内源性感染，出现临床症状。 4.1.4发病季节 1 DB62/T2686—2023 一年四季均可发，气候寒冷（冬春）、闷热潮湿的季节（6月～8月）多发 4.2临床症状及病理变化 4.2.1最急性型 多见于哺乳羔羊，往往突然发病，呈现寒战、虚弱、呼吸困难等临诊症状，于数分钟至数小时内死 亡。往往难以见到特征性变化。 4.2.2急性型 病羊精神沉郁，食欲废绝，体温升高至41℃～42℃。呼吸急促、咳嗽、鼻孔常有出血，有时血液混 杂与黏性分泌物中；眼结膜潮红，有黏性分泌物；初期便秘，后期腹泻，有时粪便为血水；颈部、胸下 部位发生水肿；病羊常在严重腹泻后虚脱而死；病程2d～5d。 4.2.3慢性型 病羊消瘦，食欲减退，流黏脓性鼻液；颈胸部有时发生水肿；咳嗽；呼吸困难并有角膜炎临诊症状； 病羊腹泻，粪便恶臭，临死前极度虚弱，体温下降，四肢厥冷。 一般在皮下有液体浸润和小出血点；胸腔内有黄色渗出物，肺淤血，有小出血点和肝变，偶有黄豆 至胡桃大的化脓灶；胃肠道有出血性炎症；其他器官水肿和淤血，间有小点出血，但脾脏不肿大。病期 较长者户体消瘦，皮下胶样浸润，常有纤维素性胸膜肺炎，肝有坏死灶。 4.3实验室诊断 4.3.1病原学诊断 4.3.1.1病料采集 无菌采集病死羊的心、脾、肝、肺、淋巴结及体腔渗出液、 4.3.1.2染色镜检 取实质器官病料作涂片或触片，革兰染色呈阴性，球杆状或短杆状，两端钝圆，长0.6um～2.5um， 宽0.25um～0.6um，无鞭毛、无芽胞，有英膜。瑞特氏或美蓝染色呈典型的两极着色。 标准信息服务平 4.3.1.3细菌分离培养 按照GB/T27530执行。 4.3.2血清学诊断 按照GB/T27530执行。 4.3.3动物接种诊断 取病死动物的肺、肝、脾等组织病料制成1：10乳剂皮下或腹腔接种小鼠，剂量为每只0.2mL～0.5mL， 胸腔液、心包液可直接用于接种。接种后24h72h死亡，死后及时部检，观察病变并进行病原学确诊。 4.3.4PCR鉴定 4.3.4.1引物 2 DB62/T2686—2023 多杀性巴氏杆菌属特异性16SrRNA基因、种特异性KMT1及英膜基因capA、capB、capD、capE、capF 引物序列应按照表1合成。 表1引物序列信息表 基因 引物 引物序列（5'-→3') 片段大小 退火温度 Gene Primer Primer sequence Fragment size Tm F ACGCGTCGACAGAGTTTGATCCTGGCT 16Sr RNA 1500bp 55℃ R CGCGGATCCGCTACCTTGTTACGACTT F ATCCGCTATTTACCCAGTGG Pm-KMT1 460bp 55℃C R GCTGTAAACGAACTCGCCAC F TGCCAAAATCGCAGTGAG Pm-A 1044bp 55℃ R TTCCCATCATTGTCAGTG F CATTTATCCAAGCTCCACC Pm-B 760bp 55℃ R GCCCGAGAGTTTCAATCC F TTACAAAAGAAAGACTAGGAGCCC Pm-D 657bp 55℃ R CATCTACCCACTCAACCATATCAG F TCCGCAGAAAATTATTGACTC Pm-E 511bp 55°C R GCTTGCTGCTTGATTTTGTC F AATCGGAGAACGCAGAAATCAG Pm-F 851bp 55°℃ R TTCCGCCGTCAATTACTCTG 4.3.4.2多杀性巴氏杆菌种的PCR鉴定 将染色鉴定为可疑多杀性巴氏杆菌的菌株在固体培养基上纯化，取细菌培养物2mL，用试剂盒提取 菌液DNA。反应体系为：PremixTaqTM12.5μL，KMT1基因通用引物上、下游引物（10μumol/L）各0.5μL， DNA模板1μL，无菌无酶水补至总体积25uL。反应条件为：预变性95C，5min；扩增循环30×（95C60s， 55℃C30s，72C60s）；延伸72℃C7min。PCR扩增产物在1.5%琼脂糖凝胶中进行电泳。KMT1基因扩增 产物大小为460bp。对KMT1基因PCR阳性的样品进一步用相同的方法进行5个英膜型的鉴定。 5结果判定 根据4.1流行特点、4.2临床症状及病理变化可做出初步诊断，确诊需按照4.3进行实验室诊断。 6 预防 6.1定期预防接种，春秋两季用市售合格的羊巴氏杆菌疫苗进行预防接种。 6.2紧急预防接种，发生本病后，对同群羊进行紧急免疫接种。 群抵抗力。消除诱发因素；避免牛羊受寒中暑。 6.4严格检疫，避免引入患病动物和带毒动物。 3