(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210466166.7 (22)申请日 2022.04.29 (71)申请人 北京艺妙神州医药 科技有限公司 地址 100195 北京市海淀区杏石口路80号B 区1号楼3层316号 (72)发明人 何霆　鲁薪安　刘光华　谢城源　 施瑞娜　 (74)专利代理 机构 北京北翔 知识产权代理有限 公司 11285 专利代理师 吴溪　张拥 (51)Int.Cl. C12Q 1/6851(2018.01) C12Q 1/686(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 用于定性和定量检测骨髓瘤细胞的试剂及 其用途 (57)摘要 本发明提供了用于定性和定量检测骨髓瘤 细胞的试剂， 其包 括特异性结合NCI ‑H929 c‑myc 基因的引物； 优选地， 所述试剂还包括特异性结 合NCI‑H929 c‑myc基因的探针。 特别地， 所述试 剂包括具有如SEQ  ID NO:3、 SEQ  ID NO:4所示核 苷酸序列的引物和具有如SEQ  ID NO:6所示核苷 酸序列的探针。 本发明还提供了所述试剂制备用 于检测人或动物中骨髓瘤细胞负荷的检测剂的 用途。 权利要求书1页 说明书16页 序列表2页 附图3页 CN 114592044 A 2022.06.07 CN 114592044 A 1.用于定性和定量检测骨髓瘤细 胞的试剂， 其包括特异性结合NCI ‑H929 c‑myc基因的 引物。 2.权利要求1所述的试剂， 所述试剂还 包括特异性结合 NCI‑H929 c‑myc基因的探针。 3.权利要求1所述的试剂， 其中所述引物为： 具有如SEQ  ID NO:2、 SEQ  ID NO:4所示核 苷酸序列的引物； 和/或具有如SEQ  ID NO:3、 SEQ  ID NO:4所示核苷酸序列的引物； 和/或具 有如SEQ ID NO:3、 SEQ ID NO:5所示核苷酸序列的引物。 4.权利要求2所述的试剂， 所述试剂包括具有如SEQ  ID NO:2、 SEQ  ID NO:4所示核苷酸 序列的引物和具有如SEQ  ID NO:6所示核苷酸序列的探针； 和/或具有如SEQ  ID NO:3、 SEQ   ID NO:4所示核苷酸序列的引物和具有如SEQ  ID NO:6所示核苷酸序列的探针； 和/或具有 如SEQ ID NO:3、 SEQ  ID NO:5所示核苷酸序列的引物和具有如SEQ  ID NO:6所示核苷酸序 列的探针。 5.权利要求2或4所述的试剂， 其中所述探针包 含FAM荧光基团和MGB淬灭基团。 6.权利要求3所述的试剂， 其中所述引物为： 具有如SEQ  ID NO:3、 SEQ  ID NO:4所示核 苷酸序列的引物； 和/或具有如SEQ  ID NO:3、 SEQ ID NO:5所示核苷酸序列的引物。 7.权利要求4所述的试剂， 所述试剂包括具有如SEQ  ID NO:3、 SEQ  ID NO:4所示核苷酸 序列的引物和具有如SEQ  ID NO:6所示核苷酸序列的探针； 和/或具有如SEQ  ID NO:3、 SEQ   ID NO:5所示核苷酸序列的引物和具有如SEQ  ID NO:6所示核苷酸序列的探针。 8.权利要求6所述的试剂， 其中所述引物为： 具有如SEQ  ID NO:3、 SEQ  ID NO:4所示核 苷酸序列的引物。 9.权利要求7所述的试剂， 所述试剂包括具有如SEQ  ID NO:3、 SEQ  ID NO:4所示核苷酸 序列的引物和具有如SEQ  ID NO:6所示核苷酸序列的探针。 10.一种PCR试剂盒， 其包 含权利要求1 ‑9中任一项所述的试剂。 11.权利要求10所述的PCR试剂盒， 其中所述PCR试剂盒为 荧光定量PCR试剂盒。 12.权利要求1 ‑9中任一项所述的试剂制备用于检测人或动物中骨髓瘤细胞负荷的检 测剂的用途。 13.权利要求12所述的用途， 其中所述骨髓瘤为多发性骨髓瘤。 14.权利要求12或13所述的用途， 其中所述动物是小鼠。 15.权利要求14所述的用途， 其中所述小鼠已注射靶向BC MA的CAR‑T细胞。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114592044 A 2用于定性和定量 检测骨髓瘤细胞的试剂及其用途 技术领域 [0001]本发明涉及生物医药领域， 具体而言， 本发明涉及用于检测人或动物中骨髓瘤细 胞负荷的引物和探针。 背景技术 [0002]多发性骨髓瘤 （Multiple  Myeloma， 简写成MM） 是一种浆细胞克隆性疾病， 可导致 高钙血症、 贫血、 肾功能损伤、 骨破坏等症状。 根据美国的统计数据， MM占所有癌症的1%， 占 血液系统恶性肿瘤的10%。 它是一类几乎无法治愈的恶性肿瘤， 好发于中老年， 但近年发病 率增高且发病年龄有提前的趋势。 [0003]B细胞成熟抗原 （B  cell maturation antigen， 简写成BCMA） ， 也叫TNF 受体超家族 成员17 （T NF receptor superfamil y member 17， 简写成TNFRSF17） ， 主要在浆细胞和成熟B 淋巴细胞中表达， 在其它的正常人体细胞中基本检测不到。 BCMA在多发性骨髓瘤细胞表面 高表达， 可溶性的BCMA蛋白在患者血清中浓度升高， 因此它是一个很好的治疗靶点。 针对 BCMA的嵌合抗原受体T细胞 （CAR ‑T） 疗法、 抗体药物缀合物 （ADC） 和双靶向抗体药物都显示 出了治疗多发性骨髓瘤的希望。 BCMA正在成为CAR ‑T治疗的热点， 因为与CD19靶点类似， BCMA‑CAR‑T治疗后虽然也杀伤了正常的浆细胞， 但患者可以通过免疫球蛋白给药来 维持机 体免疫力。 2021年3月27日上市的第五款CAR ‑T细胞产品——ABECMA靶向BCMA， 用于治疗复 发性/难治性多发性骨髓瘤 （R/R  MM） 成人患者。 人骨髓瘤细胞NCI ‑H929因为在细胞表面高 表达BCMA， 在靶向BC MA的CAR‑T细胞 （BC MA‑CAR‑T） 产品前期研究中常被用作靶细胞。 [0004]过继性免疫细胞的药代动力学研究是药物临床前评价的一个重要指标， 可以为临 床给药剂量及药后观察周期等提供重要的参考数据。 此类研究主要在动物体内进行， 主要 关注细胞在荷瘤动物体内增殖、 组织器官分布和存续时间等问题。 以BCMA为靶点的CAR ‑T细 胞药代动力学研究一般先使用BCMA阳性肿瘤细胞 （如NCI ‑H929） 建立多发性骨髓瘤模 型， 然 后注射CAR ‑T细胞， 以观察在肿瘤发生的情况下CAR ‑T细胞在体内的分布， 最大限度模拟 CAR‑T细胞应用于患者体内的情况。 [0005]目前检测CAR ‑T细胞的方法主要是定量PCR， 因为不需要导入特殊 的标签基因， 样 本制备方法简单且 可以长期存放、 试验耗时短。 由于需要阐明CAR ‑T细胞分布与肿瘤负荷之 间的关系， 因此在检测CAR ‑T细胞的同时也需要检测肿瘤负荷。 检测肿瘤负荷的一般手段是 在肿瘤细胞中导入荧光素酶标签基因， 通过活体成像来检测肿瘤负荷情况。 但是， 此操作比 较繁琐， 需要 特殊仪器， 成本较高； 导入荧光素酶标签基因有 可能会影响靶细胞的活性和生 存； 另外， 不能判定肿瘤细胞的确切 位置也无法进行肿瘤细胞的绝对定量。 因此， 亟需开发 一种简单易操作的检测多发性骨髓瘤 细胞负荷的方法。 发明内容 [0006]本发明设计特异性针对骨髓瘤细胞的引物和探针， 用于对骨髓瘤细胞进行定性和 定量检测， 以及检测不同时间点动物体内肿瘤负荷。说　明　书 1/16 页 3 CN 114592044 A 3