(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210472580.9 (22)申请日 2022.04.29 (71)申请人 深圳市众循精准医学研究院 地址 518005 广东省深圳市罗湖区友谊路 47号罗湖区人民医院医技楼5楼 (72)发明人 解佳佳　陶涛　吴松　 (74)专利代理 机构 北京三聚阳光知识产权代理 有限公司 1 1250 专利代理师 周淑歌 (51)Int.Cl. C12Q 1/6886(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种膀胱癌检测试剂盒及其应用 (57)摘要 本发明涉及一种膀胱癌检测试剂盒及其应 用， 属于分子生物学技术领域。 本发明提供了一 种膀胱癌检测试剂盒， 所述试剂盒包括检测 circZFR的检测试剂。 本发明先通过环状RNA表 达 谱分析发现环状RNA  cZFR为在膀胱癌干细胞中 表达量升高最显著的环状RNA， 并且和患者预后 显著相关， 然后通路离心检测膀胱癌病人尿液外 泌体相比正常人尿液外泌体中环状RNA  cZFR表 达显著升高。 可见， 本发明确定环状RNA  cZFR作 为膀胱癌复发的临床诊断与治疗靶标的潜在应 用价值， 为预防膀胱癌复发提供新的理论依据。 权利要求书1页 说明书8页 序列表1页 附图4页 CN 114657253 A 2022.06.24 CN 114657253 A 1.一种膀胱癌检测试剂盒， 其特 征在于， 所述试剂盒包括检测circZFR的检测试剂。 2.如权利要求1所述的试剂盒， 其特征在于， 所述circZFR的核苷酸序列为SEQ  ID  NO.1。 3.如权利要求2所述的试剂盒， 其特征在于， 所述检测circZFR的检测试剂包括靶向 circZFR的特异性引物对； 所述靶向circZFR的特异性引物对由核苷酸序列为SEQ  ID NO.2 的上游引物和核苷酸序列为SEQ  ID NO.3的下游引物组成。 4.如权利要求1～3任一项所述的试剂盒， 其特征在于， 所述试剂盒的检测对象为尿液 外泌体。 5.检测circZFR的检测试剂在制备膀胱癌检测试剂盒中的应用。 6.如权利要求5所述的应用， 其特 征在于， 所述circZFR的核苷酸序列为SEQ  ID NO.1。 7.如权利要求6所述的应用， 其特征在于， 所述检测circZFR的检测试剂包括靶向 circZFR的特异性引物对； 所述靶向circZFR的特异性引物对由核苷酸序列为SEQ  ID NO.2 的上游引物和核苷酸序列为SEQ  ID NO.3的下游引物组成。 8.如权利要求5～7任一项所述的应用， 其特征在于， 所述试剂盒的检测对象为尿液外 泌体。 9.一种在膀胱癌病人尿液中检测膀胱癌相关标志物的方法， 其特征在于， 包括如下步 骤： 步骤一： 从膀胱癌病人尿液中提取尿液外泌体； 步骤二： 提取尿液外泌体的RNA； 步骤三： 将外泌体RNA逆转录成cDNA； 步骤四： 通过PCR检测cDNA中膀胱癌相关标志 物的表达量； 所述肿瘤相关标志 物为circZFR。 10.如权利要求9所述的方法， 其特征在于， 所述circZFR的核苷酸序列为SEQ  ID NO.1； 所述检测circZFR 的检测试剂包括靶向circZFR 的特异性引物对； 所述靶向circZFR 的特异 性引物对由核苷酸序列为SEQ  ID NO.2的上游引物和核苷酸序列为SEQ  ID NO.3的下游引 物组成。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114657253 A 2一种膀胱癌检测试剂盒及其应用 技术领域 [0001]本发明涉及一种膀胱癌检测试剂盒及其应用， 属于分子生物学技 术领域。 背景技术 [0002]膀胱癌(Bladder  Cancer， BC)是泌尿系统最常见的恶性肿瘤， 是世界范围内严重 危及生命健康的恶性肿瘤之一。 膀胱镜检查和细胞学检查是目前膀胱癌诊断的主要技术， 但前者是有创检查且费用高， 后者的敏感性低。 经尿道膀胱肿瘤切除术(TUR ‑BT)可同时做 到膀胱癌的诊断、 治疗， 并明确病理分期， 是治疗膀胱癌的首选术式， 但患者TUR ‑BT术后复 发率极高， 有10～70％的患者会在1年内复发， 术后5年内有2 4～84％的病人复发， 其中部 分 病例伴有肿瘤 恶性程度增加或浸润能力增强， 严重影响患者的生存期 。 因此， 如何降低膀胱 癌患者术后复发风险、 延长其 生存期， 一 直是临床关注的重点。 [0003]已有研究表明膀胱癌组织中存在肿瘤干细胞亚群在肿瘤复发中发挥重要作用， 肿 瘤干细胞(Cancer  Stem Cell,CSC)又称为肿瘤起始细胞(Tumor  Initiative  Cell， TIC)， 是肿瘤中的一少部分细胞， 这类细胞具有自我更新和分化为肿瘤 全部亚群的能力。 因此， 通 过对膀胱癌干细胞干性调节机制的研究， 正确认识膀胱癌干性维持的条件， 对于监测膀胱 癌复发， 以及时采取针对性的干预措施预防膀胱癌复发， 提高膀胱癌 患者生存率至关重要。 发明内容 [0004]为解决上述问题， 本发明提供了一种膀胱癌检测试剂盒， 所述试剂盒包括检测 circZFR的检测试剂。 [0005]在本发明的一种实施方式 中， 所述circZFR的核苷酸序列为SEQ  ID NO.1。 [0006]在本发明的一种实施 方式中， 所述检测circZFR的检测试剂包括靶向circZFR的特 异性引物对； 所述靶向circZ FR的特异性引物对由核苷 酸序列为SEQ  ID NO.2的上游引物和 核苷酸序列为SEQ  ID NO.3的下游引物组成。 [0007]在本发明的一种实施方式 中， 所述试剂盒的检测对象为尿液外泌体。 [0008]在本发明的一种实施方式 中， 所述试剂盒用于膀胱癌的诊断和复发监控。 [0009]本发明还提供了检测circZFR的检测试剂在制备膀胱癌检测试剂盒中的应用。 [0010]在本发明的一种实施方式 中， 所述circZFR的核苷酸序列为SEQ  ID NO.1。 [0011]在本发明的一种实施 方式中， 所述检测circZFR的检测试剂包括靶向circZFR的特 异性引物对； 所述靶向circZ FR的特异性引物对由核苷 酸序列为SEQ  ID NO.2的上游引物和 核苷酸序列为SEQ  ID NO.3的下游引物组成。 [0012]在本发明的一种实施方式 中， 所述试剂盒的检测对象为尿液外泌体。 [0013]在本发明的一种实施方式 中， 所述试剂盒用于膀胱癌的诊断和复发监控。 [0014]本发明还提供了一种在膀胱癌病人尿液中检测膀胱癌相关标志物的方法， 包括如 下步骤： [0015]步骤一： 从膀胱癌病人尿液中提取尿液外泌体；说　明　书 1/8 页 3 CN 114657253 A 3