(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210476454.0 (22)申请日 2022.04.29 (71)申请人 中国疾病预防控制中心性病艾滋病 预防控制中心 地址 102206 北京市昌平区昌百路15 5号 申请人 北京安普生 化科技有限公司 (72)发明人 廖玲洁　邢辉　冯毅　宋畅　 马鹏飞　杨晓震　郜培杰　史亚伦　 邵一鸣　 (74)专利代理 机构 北京邦申诚知识产权代理事 务所(普通 合伙) 11871 专利代理师 简德明 (51)Int.Cl. C12N 15/11(2006.01) C12Q 1/70(2006.01)C12Q 1/686(2018.01) (54)发明名称 检测HIV-1整合酶基因突变的引物组及其应 用 (57)摘要 本发明属于生物 技术领域， 提供了一种检测 HIV‑1整合酶基因突变的引物组， 包括第一组引 物组合和第二组引物组合； 第一组引物组合和第 二组引物组合均包括第一轮扩增引物、 第二轮扩 增引物和测序引物。 本发明还提供了上述检测 HIV‑1整合酶基因突变的引物组在检测HIV ‑1整 合酶基因突变中的应用。 本发明提供的检测HIV ‑ 1整合酶基因突变的引物组可用于检测病毒 载量 大于1000拷贝/mL的样本， 同时还涵盖了斯坦福 耐药数据库中整合酶相关耐药位点， 检测到整合 酶基因突变的准确性高、 扩增灵敏度好、 精确性 高、 可重复性高， 并且成本较低， 非常适合推广使 用， 对于艾滋病的防治具有重要的意 义。 权利要求书2页 说明书14页 序列表2页 附图3页 CN 114703178 A 2022.07.05 CN 114703178 A 1.一种检测HIV ‑1整合酶基因突变的引物 组， 其特征在于， 所述引物 组包括第一组引物 组合和第二组引物组合； 所述第一组引物组合包括第一轮扩增引物、 第二轮扩增引物和 测序引物： 所述第一轮扩增引物包括： 正向引物1： 5 ′ ‑GGRATYATTCARGCACA ACCAG‑3′， 即序列表中的序列1； 正向引物 2： 5′ ‑GCATTAGGRATYATTCARGCAC ‑3′， 即序列表中的序列2； 反向引物： 5 ′ ‑TGGGATRTGTACT TCYGARCTTA‑3′， 即序列表中的序列3； 所述第二轮扩增引物包括： 正向引物： 5 ′ ‑TCTAYCTGKCATG GGTRCCAGCAC‑3′， 即序列表中的序列4； 反向引物： 5 ′ ‑CATCCTGTCTAC YTGCCACAC‑3′， 即序列表中的序列5； 所述测序引物包括： 正向引物1： 5 ′ ‑TCTAYCTGKCATG GGTRCCAGCAC‑3′， 即序列表中的序列4； 反向引物1： 5 ′ ‑CATCCTGTCTAC YTGCCACAC‑3′， 即序列表中的序列5； 正向引物 2： 5′ ‑GGVATTCCCTACAATCCCCAAAG‑3′， 即序列表中的序列6； 反向引物 2： 5′ ‑GAATACTGCCATTTGTACTGCTG ‑3′， 即序列表中的序列7； 所述第二组引物组合包括第一轮扩增引物、 第二轮扩增引物和 测序引物： 所述第一轮扩增引物包括： 正向引物1： 5 ′ ‑GGRATYATTCARGCACA ACCAG‑3′， 即序列表中的序列1； 正向引物 2： 5′ ‑GCATTAGGRATYATTCARGCAC ‑3′， 即序列表中的序列2； 反向引物： 5 ′ ‑CTGCTATGTYGRCAC CCAATTCTG‑3′， 即序列表中的序列8； 所述第二轮扩增引物包括： 正向引物： 5 ′ ‑TCTAYCTGKCATG GGTRCCAGCAC‑3′， 即序列表中的序列4； 反向引物： 5 ′ ‑GAGACTCCMTGRCCCAAWTGCC‑3′， 即序列表中的序列9； 所述测序引物包括： 正向引物1： 5 ′ ‑TCTAYCTGKCATG GGTRCCAGCAC‑3′， 即序列表中的序列4； 反向引物1： 5 ′ ‑GAGACTCCMTGRCCCAAWTGCC‑3′， 即序列表中的序列10； 正向引物 2： 5′ ‑GGVATTCCCTACAATCCCCAAAG‑3′， 即序列表中的序列6； 反向引物 2： 5′ ‑GAATACTGCCATTTGTACTGCTG ‑3′， 即序列表中的序列7。 2.一种检测HIV ‑1整合酶基因突变的试剂盒， 其特征在于， 所述试剂盒包括权利要求1 所述的检测HIV ‑1整合酶基因突变的引物组中的第一组引物组合和/或第二组引物组合。 3.根据权利要求2所述的试剂 盒， 其特征在于， 所述第 一组引物 组合中的引物的摩尔数 均相同； 所述第二组引物组合中的引物的摩尔数均相同。 4.根据权利要求2所述的试剂盒， 其特征在于， 所述试剂盒中还含有RT ‑PCR扩增试剂、 PCR扩增试剂中的至少一种。 5.权利要求1所述的检测HIV ‑1整合酶基因突变的引物组， 或权利要求2 ‑4中任一项所 述的检测HIV ‑1整合酶基因突变的试剂盒在制备检测HIV ‑1整合酶基因突变的制剂中的应 用。 6.权利要求1所述的检测HIV ‑1整合酶基因突变的引物组， 或权利要求2 ‑4中任一项所 述的检测HIV ‑1整合酶基因突变的试剂盒， 或权利要求5所述的检测HIV ‑1整合酶基因突变权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114703178 A 2的制剂在检测或辅助检测HIV ‑1整合酶基因突变中的应用。 7.一种检测HIV ‑1整合酶基因突变的方法， 所述方法包括： 采用权利要求1所述的检测HIV ‑1整合酶基因突变的引物组， 或权利要求2 ‑4中任一项 所述的检测HIV ‑1整合酶基因突变的试剂盒， 或权利要求5所述的检测HIV ‑1整合酶基因突 变的制剂中的第一组引物组合和/或第二组引物组合， 以从待测样本中提取出的RNA为模 板， 依次进行逆转录及第一轮PCR扩增、 第二轮PCR扩增， 得到PCR扩增产物； 对所述PCR扩增产物进行测序， 获得 所述PCR扩增产物的测序结果； 将所述PCR扩增产物 的测序结果与斯坦福大学艾滋病毒耐药性数据库进行比对， 获得 HIV‑1整合酶基因突变位 点信息。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114703178 A 3