(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210460564.8 (22)申请日 2022.04.28 (71)申请人 领航基因科技 （杭州） 有限公司 地址 310000 浙江省杭州市萧 山区南阳街 道横蓬园区红山工业区 (72)发明人 夏江　高学娟　 (74)专利代理 机构 北京集佳知识产权代理有限 公司 11227 专利代理师 王欢 (51)Int.Cl. C12Q 1/6895(2018.01) C12Q 1/6851(2018.01) C12N 15/11(2006.01) C12R 1/645(2006.01) C12R 1/66(2006.01) (54)发明名称 肺部病原菌 检测的引物探 针及其试剂盒 (57)摘要 本发明涉及生物检测技术领域， 尤其涉及肺 部病原菌检测的引物探针组合及其应用、 试剂 盒。 本发明引物探针组合可实现曲霉属、 耶氏孢 子菌、 隐球菌和诺卡菌四种肺部感染菌属的快速 检测， 准确性和特异性好、 灵敏度高， 便于实时评 估患者健康状况， 及时为临床医生提供辅助治疗 建议， 对提高感染患者的存活率有着重要的意 义。 权利要求书1页 说明书13页 序列表4页 附图2页 CN 114672585 A 2022.06.28 CN 114672585 A 1.耶氏孢子菌检测的引物探针， 其特征在于， 包括SEQ  ID NO:1～2所示核苷酸序列的 引物和SEQ  ID NO:3所示核苷酸序列的探针。 2.隐球菌检测的引物探针， 其特征在于， 包括SEQ  ID NO:4～5所示核苷酸序列的引物 和SEQ ID NO:6所示核苷酸序列的探针。 3.曲霉属检测的引物探针， 其特征在于， 包括SEQ  ID NO:7～9所示核苷酸序列的引物 和SEQ ID NO:10～1 1所示核苷酸序列的探针。 4.诺卡菌检测的引 物探针， 其特征在于， 包括SEQ  ID NO： 12～18所示核苷酸序列的引 物和SEQ ID NO:19所示核苷酸序列的探针。 5.试剂盒， 其特 征在于， 包括权利要求1～4中至少两个菌属所述的引物探针。 6.根据权利要求5所述的试剂盒， 其特 征在于， 还 包括检测外源内参的引物和探针； 所述检测外源内参的引物， 其核苷酸序列如SEQ  ID NO:20～21所示； 所述检测外源内参的探针， 核苷酸序列如SEQ  ID NO:22所示。 7.根据权利要求5或6所述的试剂盒， 其特 征在于， SEQ ID NO:3所示核苷酸序列的探针的5 ’端标记有荧光报告基团FAM， 3 ’端标记有荧光 淬灭基团MGB； SEQ ID NO:6所示核苷酸序列的探针的5 ’端标记有荧光报告基团CY5， 3 ’端标记有荧光 淬灭基团MGB； SEQ ID NO:10所示核苷酸序列的探针的5 ’端标记有荧光报告基团ROX， 3 ’端标记有荧 光淬灭基团MGB； SEQ ID NO:11所示核苷酸序列的探针的5 ’端标记有荧光报告基团ROX， 3 ’端标记有荧 光淬灭基团MGB； SEQ ID NO:19所示核苷酸序列的探针的5 ’端标记有荧光报告基团VIC， 3 ’端标记有荧 光淬灭基团MGB； SEQ ID NO:22所示核苷酸序列的探针的5 ’端标记有荧光报告基团ATTO ‑425， 3’端标记 有荧光淬灭基团BHQ1。 8.根据权利要求3所述的试剂盒， 其特征在于， 还包括数字PCR的检测试剂； 所述检测试 剂包括无菌水、 d dPCR Mix、 DNA扩增酶、 dNTP、 Mg2+中的至少一种。 9.非诊断目的的检测肺部病原菌的方法， 其特征在于， 利用权利要求1～4任一项所述 的引物探针组合或权利要求5～8任一项所述的试剂盒对样本进行检测。 10.根据权利要求9所述的方法， 其特征在于， 所述样本包括食品样本、 痰液、 肺泡灌洗 液、 石蜡切片、 病理 组织、 穿刺样本中的至少一种。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114672585 A 2肺部病原菌检测的引物探针及其试剂盒 技术领域 [0001]本发明涉及 生物检测技术领域， 尤其涉及肺部病原菌检测的引物探针 组合及其试 剂盒。 背景技术 [0002]肺部感染是指包括终末气道、 肺泡腔及肺间质在内的肺实质炎症， 病因以感染最 为常见， 还可由理化、 免疫及药物引起。 肺部感染包括细菌性肺部感染、 真菌性肺部感染、 病 毒性肺部感染、 支原体性肺部感染等。 因其种类繁多， 本项目集中在肺侵袭性真菌感染和诺 卡氏菌属感染。 肺袭 蚀性真菌又包括： 念球菌属、 曲霉属、 隐球菌属、 接合菌门里的毛霉目和 肺孢子菌属 。 因念球菌属主要通过血流感染， 接合菌门肺部感染的发生率为2.9/100000引 起的死亡率为86％， 样本非常难获取， 本项目主要针对的肺侵袭性真菌为曲霉属、 隐球菌 属、 肺孢子菌属等。 [0003]肺侵袭性真菌感染引起的真菌病分为原发性和继发性两种， 原发性肺侵袭性真菌 病主要是社区获得性感染， 因其宿 主可以没有真菌感染的危险因素、 临床过程相对缓和、 凶 险程度低等特点。 医学上比较关注的是继发性肺侵袭性真菌感染， 继发性真菌感染主要发 生在如： 器官移植受者、 恶性血液病患者、 恶性肿瘤患者等免疫受损或其他危重病患者身 上。 其特征是： 医院获得性感染， 存在比较明确的真菌感染高危危险因素、 临床过程急骤和 凶险。 [0004]近30年来， 随着实体器官及造血干细胞移植技术和导管介入及留置技术的开发和 利用， 以及免疫抑制剂的大量使用、 恶性肿瘤患者放疗化疗进 行和抗生素的广泛使用， 继发 性侵袭性真菌感染的发病率及致死率在全球范围内显著升高。 流行病 学研究显示， 目前全 球每年有200万人被侵蚀性真菌感染， 院内侵袭性真菌感染率为7.5％， 肿瘤病人侵袭性真 菌感染率为8％， 严重烧伤及创伤病人的侵袭性真菌感染率高达16％， 而侵袭性真菌感染的 致死率高达 55％‑70％， 因此侵 袭性真菌感染已成为 严重威胁人类生命健康的疾病。 [0005]一般认为肺侵袭性真菌感染与血液恶性肿瘤和造血干细胞移植导致的粒细胞缺 乏关系最为密切， 但 最近美国1000多家医疗机构对l88l例侵袭性真菌感染患者的统计分析 结果显示， 最易发生侵袭性真菌感染的基础疾病患病群体中， 居于前三位的分别 是： COPD、 糖尿病、 恶性血液病， 分别占中感染率的22.2％、 21.7％、 9.6％。 国内研究报道显示： 由这些 菌属引起的曲霉菌病、 隐球菌病、 肺孢子菌病分别占侵袭性真菌病的37.9％、 15.6％、 2.1％。 [0006]诺卡氏菌病的发生率为0.31/100000， 与肺侵袭性真菌 感染的患病人群一致， 其主 要感染部位为肺部， 主要感染人群为HIV感染、 器官移 植、 接受放化疗的恶性肿瘤、 慢 性阻塞 性肺炎、 糖尿病 、 长期使用糖皮质激素等引起免疫功能缺陷或受损的患者。 [0007]对于这些不同种属的肺部感染菌引起感染病的检测方法略有差异， 但其主要检测 方法包括： 痰液或肺泡灌洗液镜检、 组织病理学检查、 血清抗原及其代谢物质检测， 这些检 测结果需要 结合患者的临床表征和影像特征共同判定。 随着P CR技术的发展， 目前一些荧光说　明　书 1/13 页 3 CN 114672585 A 3