(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210441752.6 (22)申请日 2022.04.25 (71)申请人 苏州易科新创科 学仪器有限公司 地址 215333 江苏省苏州市昆山 开发区章 基路189号3号厂房201- 5室 (72)发明人 朱海　 (74)专利代理 机构 广州粤高专利商标代理有限 公司 44102 专利代理师 李远星 (51)Int.Cl. C12Q 1/70(2006.01) C12Q 1/686(2018.01) C12N 15/11(2006.01) C12R 1/93(2006.01) (54)发明名称 一种检测 中东呼吸综合征病毒的MERS冻干 管及其制备方法、 冻干试剂盒 (57)摘要 本发明公开了一种检测中东呼吸综合征病 毒的MERS冻干管及其制备方法、 冻干试剂盒。 一 种检测中东呼吸综合征病毒的冻干试剂盒， 所述 试剂盒包 括MERS冻干 管、 MERS阳性对照和阴性对 照， 所述MERS冻干 管包括Taq酶、 M ‑MLV逆转录酶、 RNA酶抑制剂、 Buffer、 引物探针混合物、 dNTP、 MgCl2和冻干保护剂； 所述冻干保护剂包括3 ‑8％ 海藻糖、 1 ‑5％甘露醇、 0.1 ‑2％BSA、 1 ‑3％乳糖、 0.05‑0.2％tween80； 所述MERS阳性对照包括具 有目标基因的质粒。 本发明将 采用酶、 buffer、 引 物探针、 dNTP、 冻干保护剂等全预混成冻干反应 体系形成冻干型试剂盒， 可于4 ‑25℃稳定保存。 如此， 可以快速、 高效、 定性的检测样本中的中东 呼吸综合症冠状病毒， 而且全封闭反应， 仅一次 加样操作； 本发明为冻干试剂盒， 可实现常温保 存和运输 。 权利要求书2页 说明书9页 附图4页 CN 114807441 A 2022.07.29 CN 114807441 A 1.一种检测中东呼吸综合征病毒的冻干试剂盒， 其特征在于， 所述试剂盒包括MERS冻 干管、 MERS阳性对照和阴性对照， 所述MERS冻干管包括Taq酶、 M ‑MLV逆转录酶、 RNA酶抑制 剂、 Buffer、 引物探针混合物、 dNTP、 MgCl2和冻干保护剂； 所述冻干保护剂包括3 ‑8％海藻 糖、 1‑5％甘露醇、 0.1 ‑2％BSA、 1 ‑3％乳糖、 0.0 5‑0.2％twe en80； 所述MERS阳性对照包括具有目标基因的质粒； 所述引物探针混合物包括有正向引物、 反向引物和寡核苷酸探针， 且正向引物、 反向引 物和寡核苷酸探针的序列分别为： 正向引物序列： T TAGAGACTC CCTGCCGCTGTA 反向引物序列： GA ATCTTTCTTCGCAATGCCTATG 寡核苷酸探针序列： CT TCACAAGGGTTTGTGGTGGTCAAT。 2.根据权利要求1所述的检测中东呼吸综合征病 毒的冻干试剂 盒， 其特征在于， 所述冻 干保护剂为5％海藻糖、 3％甘露醇、 1％BSA、 2％乳糖何0.1％twe en80。 3.根据权利要求1所述的检测中东呼吸综合征病 毒的冻干试剂 盒， 其特征在于， 所述阴 性对照为无菌TE溶 液。 4.根据权利要求1所述的检测中东呼吸综合征病 毒的冻干试剂 盒， 其特征在于， 所述寡 核苷酸探针的3 ’端标记有荧 光淬灭基团， 5 ’端分别标记有不同的荧 光报告基团。 5.根据权利要求1所述的检测中东呼吸综合征病 毒的冻干试剂 盒， 其特征在于， 所述目 标基因为 orf1ab基因。 6.一种检测中东呼吸综合征病毒的MERS冻干管， 其特征在于， 所述MERS冻干管包括Taq 酶、 M‑MLV逆转录酶、 RNA酶抑制剂、 Buffer、 引物探针混合物、 dNTP、 MgCl2和冻干保护剂； 所 述冻干保护剂包括3 ‑8％海藻糖、 1 ‑5％甘露醇、 0.1 ‑2％BSA、 1 ‑3％乳糖、 0.05 ‑0.2％ tween80。 7.一种检测中东呼吸综合征病毒的MERS冻干管的制备方法， 其特征在于， 其包括以下 步骤： (1)配制冻干反应体系： Taq酶、 M ‑MLV逆转录酶、 RNA酶抑制剂、 Buffer、 引物探针混合 物、 dNTP、 MgCl2和冻干保护剂； (2)分装： 将步骤(1)的冻干反应 体系定量分装到反应管； (3)冻干： 将步骤(2)的反应管置 于冷冻干燥机进行冻干程序， 最后封装。 8.根据权利要求7所述的检测中东呼吸综合征病毒的MERS冻干管的制备方法， 其特征 在于， 每一所述反应管内装有20 μl所述冻干反应 体系。 9.根据权利要求7所述的检测中东呼吸综合征病毒的MERS冻干管的制备方法， 其特征 在于， 所述冻干程序具体为： A、 预冷： 板层预冷至3～5℃， 保持9～10min； 接着， 冷却至 ‑50～‑40℃， 保持170～ 190min； B、 一次干燥： 先在 ‑45～‑35℃进行冷冻干燥180～220min； 接着， 升温至 ‑12～‑8℃进行 冷冻干燥5 00～550min； C、 解析干燥： 升温至20～ 25℃， 保持280～320mi n。 10.根据权利要求9所述的检测中东呼吸综合征病 毒的MERS冻干管的制备方法， 其特征 在于， 所述冻干程序具体为：权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114807441 A 2A、 预冷： 板层预冷至4℃， 保持10mi n； 接着， 冷却至 ‑45℃， 保持180mi n； B、 一次干燥： 先在 ‑40℃进行冷冻干燥200min； 接着， 升温至 ‑10℃进行冷冻干燥 520min； C、 解析干燥： 升温至25℃， 保持3 00min。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114807441 A 3