(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210449755.4 (22)申请日 2022.04.24 (71)申请人 福建省烟草专卖局烟草科 学研究所 地址 350013 福建省福州市晋安区华林路 378号 申请人 闽江学院 (72)发明人 李文卿　梁廷敏　叶蓉蓉　柯玉琴　 郭金平　李春英　唐唯其　曲梦宇　 迟文超　陆建军　陈松彪　王月敏　 高静娟　谢榕榕　 (74)专利代理 机构 福州元创专利商标代理有限 公司 35100 专利代理师 林文弘　蔡学俊 (51)Int.Cl. C12Q 1/6895(2018.01)C12N 15/11(2006.01) C12Q 1/6851(2018.01) (54)发明名称 一种用于检测烟草缺硼胁迫的生物标志物 组及其应用 (57)摘要 本发明公开了一种用于检测烟草缺硼胁迫 的生物标志物组及其应用。 所述生物标志物组由 Nitab4 .5_0000595g0010、 Nitab4 .5_ 0011519g0020、 Nitab4.5_0016396g0010等3个基 因组成， 其在烟草应答硼胁迫的过程中特异上调 表达。 因此， 上述3个基因可以作为诊断烟草缺硼 胁迫的生物标志物组。 本发明为 建立基于生物标 志的烟草 缺硼快速诊断方法奠定 了基础。 权利要求书1页 说明书6页 序列表3页 附图2页 CN 115011716 A 2022.09.06 CN 115011716 A 1.一种用于检测烟草缺硼胁迫的生物标志物组， 其特征在于： 所述生物标志物组由 Nitab4.5_0000595g0010、 Nit ab4.5_0011519 g0020、 Nitab4.5_0016396g0010组成； 其中， Nitab4.5_0000595g0010的核苷酸序列如SEQ  ID NO:1所示， Nitab4.5_0011519g0020的核 苷酸序列如SEQ  ID NO:2所示， N itab4.5_0 016396g0010的核苷酸序列如SEQ  ID NO:3所示。 2.一种如权利要求1所述的生物标志 物组在烟草缺硼营养诊断中的应用。 3.一种用于诊断烟草缺硼胁迫的试剂盒， 其特征在于： 所述试剂盒包括通过RT ‑qPCR技 术检测权利要求1所述的生物标志 物组的试剂。 4.根据权利要求3所述的试剂盒， 其特征在于： 所述的试剂包括Nitab4 .5_ 0000595g0010、 Nitab4.5_0 011519g0020、 Nitab4.5_0 016396g0010的特异性引物。 5.根据权利要求4所述的试剂盒， 其特征在于： 所述的Nitab4.5_0000595g0010、 Nitab4.5_0 011519g0020、 Nitab4.5_0 016396g0010的特异性引物的核苷酸序列如下： Nitab4.5_0 000595g0010的特异性引物： RT‑0595‑F: 5ʹ‑AATCAATAACGCCACTTC‑3ʹ， RT‑0595‑R: 5ʹ‑ATCACATACACT TACAACAC‑3ʹ； Nitab4.5_0 011519g0020的特异性引物： RT‑1519‑F: 5ʹ‑TTCGTTCTCAAGCCTATATGG‑3ʹ， RT‑1519‑R: 5ʹ‑GTCTGTGGAGCAACAACTATA‑3ʹ； Nitab4.5_0 016396g0010的特异性引物： RT‑6396‑F: 5ʹ‑TCTTTGCTTCCCTTTGTG‑3ʹ， RT‑6396‑R: 5ʹ‑CCTTGTCATCATCAGTAGTG ‑3ʹ。 6.如权利要求3所述的试剂盒在 在烟草缺硼营养诊断中的应用。 7.一种烟草 缺硼营养诊断的方法， 其特 征在于： 包括如下步骤： 1） 采集待测烟草叶片， 提取总RNA， 反转录成cDNA； 2） 以反转录得到的cDNA为模板， 利用 权利要求5中所述的特异性引物进行RT ‑qPCR检 测； 根据基因是否上调表达判断待测烟草是否受缺硼胁迫。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115011716 A 2一种用于 检测烟草缺硼胁迫的生物标志物组及其应用 技术领域 [0001]本发明属于生物技术领域， 具体涉及一种利用基因组学技术筛选得到的可用于检 测烟草缺硼胁迫的生物标志 物组及其应用。 背景技术 [0002]烟草 （Nicotiana  tabacum L.） 是一种经济价值较高的作物。 在我国， 种 植烟草能 够创造较高的经济 收入。 烟草是一年生或有限多年生茄科烟草属 植物， 生物量大且吸收养 分能力强， 其 生长发育过程中 需要多种营养元 素。 [0003]硼是烟草生长发育必需的微量元素之一， 参与蛋白质代谢、 物质运输和生物碱合 成等多种生理生化活动， 影响烟草的正常发育和抗逆性。 在烟草生长和发育过程中， 硼参与 尿嘧啶和叶绿素 的合成、 碳水化合物的运输、 细胞分裂和生长、 核糖核酸代谢等等。 硼还可 以提高烟草光合作用和蒸腾作用， 促进糖类物质的积累。 缺硼会导致烟草顶芽枯死， 生长受 阻停滞， 植株呈丛 生状， 影响糖 类物质和蛋白质的运输， 导 致烟叶质量下降。 [0004]利用基因组学策略， 挖掘和筛选烟草应答缺硼胁迫的分子生物标志物， 建立基于 生物标志的营养诊断方法， 对构建烟草绿色种植体系具有实际意 义。 发明内容 [0005]本发明的目的在于提供一种用于检测烟草 缺硼胁迫的生物标志 物组及其应用。 [0006]为实现上述目的， 本发明提供了如下 方案： 本发明首先提供了一种用于诊断烟草应答缺硼胁迫的生物标志物组， 所述标志物 组由Nitab4.5_0000595g0010、 Nitab4.5_0011519g0020、 Nitab4.5_0016396g0010组成； 其 中， Nitab4.5_000059 5g0010的核苷酸序列如SEQ  ID NO:1所示， Nitab4.5_0011519g0020的 核苷酸序列如SEQ  ID NO:2所示， Nitab4.5_0016396g0010的核苷酸序列如SEQ  ID NO:3所 示； 本发明还提供了上述 一种生物标志 物组在烟草缺硼营养诊断中的应用。 [0007]进一步的， 在烟草受缺硼胁迫时， 上述一种生物标志物组的表达水平出现显著上 调。 [0008]本发明还提供了一种用于诊断烟草缺硼胁迫的试剂盒， 所述试剂盒包括通过RT ‑ qPCR技术检测上述的生物标志 物组的试剂。 [0009]进一步的， 上述的试剂包括Nitab4.5_0000595g0010、 Nitab4.5_0011519g0020、 Nitab4.5_0 016396g0010的特异性引物。 [0010]进一步的， 上述的Nitab4.5_0000595 g0010、 Nitab4.5_0011519g0020、 Nitab4.5_ 0016396g0010的特异性引物的核苷酸序列如下： Nitab4.5_0 000595g0010的特异性引物： RT‑0595‑F: 5ʹ‑AATCAATAACGCCACTTC‑3ʹ， RT‑0595‑R: 5ʹ‑ATCACATACACT TACAACAC‑3ʹ；说　明　书 1/6 页 3 CN 115011716 A 3