(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210432073.2 (22)申请日 2022.04.22 (71)申请人 中国科学院南海 海洋研究所 地址 511458 广东省广州市南沙区海 滨路 1119号 (72)发明人 王艳红　陈廷　罗鹏　胡超群　 任春华　江晓　张鑫　 (74)专利代理 机构 广州科粤专利商标代理有限 公司 44001 专利代理师 陈洁娣　刘明星 (51)Int.Cl. C12Q 1/6888(2018.01) C12Q 1/6858(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种用于鉴定凡纳滨对虾特定抗病品系的 EST-SSR标记及其扩增引物和应用 (57)摘要 本发明公开了一种用于鉴定凡纳滨对虾特 定抗病品系的EST ‑SSR标记及其扩增引物和应 用， 属于分子生物学技术领域。 本发明开发出9 个 具有高度多态性的凡纳滨对虾EST ‑STR标记， 编 号分别为Lv ‑Vp052、 Lv ‑Vp054、 Lv ‑Vp055、 Lv ‑ Vp058、 Lv ‑Vp062、 Lv ‑Vp066、 Lv ‑Vp075、 Lv ‑Vp076 和Lv‑Vp077， 所述EST ‑SSR标记多态性强、 杂合度 高， 在对抗病品系和普通品系的评估上具有优 势； 引物扩增稳定、 重复性好， 因此本发明的ES T‑ SSR标记及其扩增引物 应可用于凡纳滨对虾抗病 品系等种群鉴定、 还可以用于遗传多样性分析， 还可以用于优良品种的辅助选 育。 权利要求书2页 说明书10页 序列表5页 附图1页 CN 114891895 A 2022.08.12 CN 114891895 A 1.一种凡纳滨对虾EST ‑STR标记， 其特征在于， 所述的EST ‑STR标记编号为Lv ‑Vp052、 Lv‑Vp054、 Lv‑Vp055、 Lv‑Vp058、 Lv‑Vp062、 Lv‑Vp066、 Lv‑Vp075、 Lv ‑Vp076和Lv ‑Vp077； 所述的Lv ‑Vp052的核苷酸序列如SEQ  ID NO.1所示； 所述的Lv ‑Vp054的核苷酸序列如SEQ  ID NO.2所示； 所述的Lv ‑Vp055的核苷酸序列如SEQ  ID NO.3所示； 所述的Lv ‑Vp058的核苷酸序列如SEQ  ID NO.4所示； 所述的Lv ‑Vp062的核苷酸序列如SEQ  ID NO.5所示； 所述的Lv ‑Vp066的核苷酸序列如SEQ  ID NO.6所示； 所述的Lv ‑Vp075的核苷酸序列如SEQ  ID NO.7所示； 所述的Lv ‑Vp076的核苷酸序列如SEQ  ID NO.8所示； 所述的Lv ‑Vp077的核苷酸序列如SEQ  ID NO.9所示。 2.一种权利要求1所述的凡纳滨对虾EST ‑STR标记的扩增引物， 其特征在于， 所述的扩 增引物包括： 针对Lv‑Vp052位点： Lv‑Vp052‑F： 5'‑GATACTGGTTCTTTGCAGTCTG G‑3'； Lv‑Vp052‑R： 5'‑AAGAAACAAGCAGAGATG GAAGA‑3'； 针对Lv‑Vp054位点： Lv‑Vp054‑F： 5'‑AAAGTAGAGTGC CAGAGTTGAGG‑3'； Lv‑Vp054‑R： 5'‑AGCGGCAGCAATAACAACA‑3'； 针对Lv‑Vp55位点： Lv‑Vp55‑F： 5'‑GGAAAAGGAAGAGAAGAATGGAA‑3'； Lv‑Vp55‑R： 5'‑TTTCCGTATTTTGTGTGTCA ATG‑3'； 针对Lv‑Vp58位点： Lv‑Vp58‑F： 5'‑AGGATAAAGGAAAAGAAAGGGGA‑3'； Lv‑Vp58‑R： 5'‑TTTCAAGGTAATAACTTCGGGGT‑3'； 针对Lv‑Vp62位点： Lv‑Vp62‑F： 5'‑ACACCACAGAGAGTGA ACAGTCA‑3'； Lv‑Vp62‑R： 5'‑GTGTGCCACTCAGT TCTCTTTTT‑3'； 针对Lv‑Vp66位点： Lv‑Vp66‑F： 5'‑ATTTTGGTATTCTCCCATTTGCT‑3'； Lv‑Vp66‑R： 5'‑AATCGATTGATCTTCCTGTGAAA‑3'； 针对Lv‑Vp75位点： Lv‑Vp75‑F： 5'‑AGAAAGCAAAATTTAATTCCAAGA‑3'； Lv‑Vp75‑R： 5'‑GCGTGTAT TCACACCTTATCGTC‑3'； 针对Lv‑Vp76位点： Lv‑Vp76‑F： 5'‑GTGTGGTAGCTGACG GAGTTC‑3'； Lv‑Vp76‑R： 5'‑CTCAAGGTCAAGGTGCTGAAG‑3'； 针对Lv‑Vp77位点： Lv‑Vp77‑F： 5'‑GACTGTGTGAT TTTGAGATCCGT‑3'；权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114891895 A 2Lv‑Vp77‑R： 5'‑TTTCATTCACCTAATTCACCCAC‑3'。 3.根据权利要求2所述的扩增引物， 其特征在于， 所述的扩增引物的正向引物的5'端标 记有荧光基团。 4.根据权利要求3所述的扩增引物， 其特 征在于， 所述的荧 光基团为FAM或H EX。 5.一种凡纳滨对虾EST ‑SSR标记的检测试剂盒， 其特征在于， 包含权利 要求2、 3或4所述 的扩增引物。 6.一种凡纳滨 对虾EST‑STR标记的检测方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： (1)提取凡纳滨 对虾基因 组DNA； (2)以步骤(1)提取的基因组DNA为模板， 利用权利要求2、 3或4所述的扩增引物进行PCR 扩增； (3)对步骤(2)扩增的PCR产物进行分型； (4)对步骤(3)获得的分型 结果进行遗传多样性分析。 7.根据权利要求6所述的检测方法， 其特征在于， 所述的PCR扩增， 其反应体系为25μL， 包括： 含Mg2+的10×PCR buffer 2.5 μL、 10mM  dNTPs 1 μL、 Taq酶2U、 10 μM正向引物1 μL、 10 μM 反向引物1 μL、 DNA模板10ng， 其 余由无菌双蒸水补足至25 μL； 其反应程序为： 95℃预变性3分钟； 94℃变性30秒， 60℃退火30秒， 72℃延伸30秒， 共10 个循环； 94℃变性3 0秒， 55℃退火3 0秒， 72℃延伸3 0秒， 共35个循环， 72℃再延伸5 ‑8分钟。 8.权利要求1所述的EST ‑STR标记、 权利要求2所述的扩增引物、 权利要求5所述的检测 试剂盒或权利要求6所述的检测方法在凡纳 滨对虾群体遗传多样性研究、 基因定位、 遗传连 锁图谱构建、 种质鉴定、 品种分类或分子标记辅助育种中的应用。 9.根据权利要求8所述的应用， 其特征在于， 是在抗菌性状相关的凡纳滨对虾群体遗传 多样性研究、 基因定位、 遗传连锁图谱构建、 种质鉴定、 品种分类或分子标记辅助育种中的 应用。 10.根据权利要求9所述的应用， 其特 征在于， 所述的抗菌为 抗哈氏弧菌 。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114891895 A 3