(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210426773.0 (22)申请日 2022.04.21 (71)申请人 广东省农业科 学院动物卫 生研究所 地址 510630 广东省广州市天河区五山路 白石岗 (72)发明人 温肖会　吕殿红　孙铭飞　赵亮　 翟颀　罗胜军　贾春玲　周秀蓉　 (74)专利代理 机构 北京哌智科创知识产权代理 事务所(普通 合伙) 11745 专利代理师 刘小兵 (51)Int.Cl. C12Q 1/689(2018.01) C12Q 1/686(2018.01) C12N 15/11(2006.01) C12R 1/42(2006.01)C12R 1/145(2006.01) C12R 1/19(2006.01) (54)发明名称 一种用于检测禽沙门氏菌、 产气荚膜梭菌和 大肠杆菌试剂盒 (57)摘要 本发明公开了一种用于检测禽沙门氏菌、 产 气荚膜梭菌和大肠杆菌试剂盒， 属于试剂盒技术 领域， 包括PCR Mix、 浓度为250nM的P rimer F/R、 浓度为250nM 的Probe， 荧光PCR的灵敏度和试验 速度较传统PCR大大提升， 并且可以同时特异性 检测多种 病原。 权利要求书2页 说明书6页 附图4页 CN 114807393 A 2022.07.29 CN 114807393 A 1.一种用于检测禽沙门氏菌、 产气荚膜梭菌和大肠杆菌试剂盒， 其特征在于： 包括PCR   Mix、 浓度为25 0nM的Primer  F/R、 浓度为25 0nM的Probe。 2.根据权利要求1所述的一种用于检测禽沙门氏菌、 产气荚膜梭菌和大肠杆菌试剂 盒， 其特征在于： 所述Primer  F/R包含有InvA‑F/R、 plc‑F/R、 phoA ‑F/R。 3.根据权利要求2所述的一种用于检测禽沙门氏菌、 产气荚膜梭菌和大肠杆菌试剂 盒， 其特征在于： InvA‑F/R扩增得到的目的基因的序列为： GTTCGTCATTCCATTACCTACCTATCTGGTTGATTTC CTGATCGCACTGA ATATCGTACTG GCGATATTGGTGTTTATGGGG； 其中InvA‑F/R的识别标记为SEQ  ID NO.10； plc‑F/R扩增得到的目的基因的序列为： ATGGCAAAGAGGAAACTATAAACAAGCTACATTCTATC TTGGAGAGGCTATGCACTAT TTTGGAGATATAGATACTC CATATCATC CTGCTAATGTTACTGCCGTTG； 其中plc‑F/R的识别标记为SEQ  ID NO.11； phoA‑F/R扩增得到的目的基因的序列为： CTAGGACTGTTTGCTGACGGCAATATGCCAGTGCGCT GGCAAGGACCGAAAGCAACGTACCACGGCAATATCGACA AGCCCGCAGTTACCTGTACGC CTA； 其中phoA ‑F/R的识别标记为SEQ  ID NO.12。 4.根据权利要求3所述的一种用于检测禽沙门氏菌、 产气荚膜梭菌和大肠杆菌试剂 盒， 其特征在于： I nvA‑F/R的上游引物为GT TCGTCATTCCATTACC； 其中InvA‑F/R的上游引物 识别标记为SEQ  ID NO.1； InvA‑F/R的下游引物为C CCATAAACACCAATATCG； 其中InvA‑F/R的下游引物 识别标记为SEQ  ID NO.2。 5.根据权利要求4所述的一种用于检测禽沙门氏菌、 产气荚膜梭菌和大肠杆菌试剂 盒， 其特征在于： plc ‑F/R的上游引物为ATG GCAAAGAGGAAACTA； 其中plc‑F/R的上游引物 识别标记为SEQ  ID NO.4； plc‑F/R的下游引物为CA ACGGCAGTAACATTAG； 其中plc‑F/R的下游引物 识别标记为SEQ  ID NO.5。 6.根据权利要求5所述的一种用于检测禽沙门氏菌、 产气荚膜梭菌和大肠杆菌试剂 盒， 其特征在于： phoA ‑F/R的上游引物为CTAG GACTGTTTGCTGAC； 其中phoA ‑F/R的上游引物 识别标记为SEQ  ID NO.7； phoA‑F/R的下游引物为TAG GCGTACAG GTAACTG； 其中phoA ‑F/R的下游引物 识别标记为SEQ  ID NO.8。 7.根据权利要求6所述的一种用于检测禽沙门氏菌、 产气荚膜梭菌和大肠杆菌试剂 盒， 其特征在于： Probe包 含有InvA‑probe、 plc ‑probe、 phoA ‑probe。 8.根据权利要求7所述的一种用于检测禽沙门氏菌、 产气荚膜梭菌和大肠杆菌试剂 盒， 其特征在于： 所述 InvA‑probe的基因的序列为TC CTGATCGCACTGA ATATCGTACTG； 其中InvA‑probe的识别标记为SEQ  ID NO.3； plc‑probe的基因的序列为CTACAT TCTATCTTGGAGAGGCTATGC； 其中plc‑probe的识别标记为SEQ  ID NO.6； phoA‑probe的基因的序列为CTG GCAAGGACCGAAAGCAAC； 其中phoA ‑probe的识别标记为SEQ  ID NO.9。权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114807393 A 29.根据权利要求8所述的一种用于检测禽沙门氏菌、 产气荚膜梭菌和大肠杆菌试剂 盒， 其特征在于： InvA ‑probe的5'端连接有6 ‑FAM， 3'端连接有BHQ1； plc ‑probe的5'端连接有 ROX， 3'端连接有BHQ2； phoA ‑probe的5'端连接有VIC， 3'端连接有BHQ2。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114807393 A 3