(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210423495.3 (22)申请日 2022.04.21 (71)申请人 宁夏医科大学 地址 750004 宁夏回族自治区银川市胜利 街1160号 (72)发明人 马胜超　米英　高源　揭育祯　 高春兰　杨慧霞　张正皓　张晴　 丁宁　姜怡邓　 (74)专利代理 机构 西安铭泽知识产权代理事务 所(普通合伙) 61223 专利代理师 崔瑞迎 (51)Int.Cl. C12Q 1/6883(2018.01) C12N 15/11(2006.01) C12N 15/54(2006.01) (54)发明名称 EphA2基因及其甲基化水平检测试剂的应用 (57)摘要 本发明属于医学技术领域， 具体涉及EphA2 基因及其甲基化水平检测试剂的应用。 所述应用 具体是EphA2 基因甲基化水平 检测试剂在制备诊 断胰岛β细胞凋亡所致疾病的产品中的应用， 以 及EphA2基因用于筛选治疗2型糖尿病的潜在物 质的应用。 本发明结果证实， EphA2基因Hcy引起 血糖异常的关键基因， 其中EphA2DNA高甲基化参 与了同型半胱氨酸诱导的Cbs+/‑小鼠胰岛β细胞 凋亡的调控， 可作为临床早期诊断和病情发展评 估提供一类新的标志物， 也为临床上治疗胰岛β 细胞功能障碍所致胰岛素分泌不足的2型糖尿病 提供新的治 疗思路， 具有潜在的价 值。 权利要求书1页 说明书5页 序列表3页 附图4页 CN 114622012 A 2022.06.14 CN 114622012 A 1.EphA2基因甲基化水平检测试剂在制备诊断胰岛β细胞凋亡所致疾病的产品中的应 用， 其特征在于， 所述EphA 2基因的序列如SEQ  ID NO.1所示。 2.根据权利要求1所述的应用， 其特征在于， 所述β细胞凋亡是由同型半胱氨酸诱导所 致。 3.根据权利要求2所述的应用， 其特 征在于， 所述疾病包括2型糖尿病。 4.根据权利要求3所述的应用， 其特征在于， 2型糖尿病患者胰岛β细胞中EphA2基因甲 基化水平升高。 5.根据权利要求 4所述的应用， 其特 征在于， 所述试剂包括 nMS‑PCR检测用试剂。 6.根据权利 要求5所述的应用， 其特征在于， 所述nMS ‑PCR检测用试剂包括针对EphA2基 因的甲基化引物， 其序列如SEQ  ID NO.6‑7所示。 7.权利要求1中所述EphA2基因的应用， 其特征在于， 用于筛选治疗2型糖尿病的潜在物 质。 8.根据权利要求7所述的应用， 其特征在于， 所述物质为下调EphA2基因甲基化水平的 物质。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114622012 A 2EphA2基因及其甲 基化水平检测试剂的应用 技术领域 [0001]本发明属于医学技术领域， 具体涉及EphA2基因及其甲基化水平检测试剂  的应 用。 背景技术 [0002]糖尿病是异质性代谢紊乱的统称， 其主要表现是慢性高血糖。 发病机制主  要因胰 岛β 细胞被破坏， 包括胰岛素抵抗、 胰岛素进行性分泌不足或两者兼有。  其以起病隐匿， 发 病率高， 合并症多而成为严重危害 人类健康的一组代谢性疾  病。 目前全世界范围内有4.15 亿人患有糖尿病， 估计有1.93亿 人患有未确诊的  糖尿病。 其中， 2型糖尿病占糖尿病患者的 90％以上， 常会导致微血管和大血  管的并发症， 给患者和护理人员带来深刻的心理和身体 痛苦， 并给医疗保健系  统带来巨大负担。 到目前为止， 尽管人们收集和分析了大量关于糖 尿病的数据，  但对于2型糖尿病(T2DM)发生发展的实际分子机制仍然未知。 基于此， 急  需 寻找一种同型半胱氨酸引起的胰岛β 细胞凋亡诊断用分子标志物， 进一步探  讨临床上2型 糖尿病的防治策略， 这对提高人类健康水平、 优化人口素质具有  长足且深远的意 义。 [0003]同型半胱氨酸(Homocysteine， Hcy)是一种在必需氨基酸甲硫氨酸代 谢过 程中形 成的含硫非 蛋白氨基酸， 可引起细胞发生凋亡、 自噬、 焦亡等重要的生  物学功能。 根据流行 病学调查显示， 伴有胰岛素抵抗和胰岛素分泌受损的肥胖  患者中Hcy水平升高， 甚至在非 糖尿病的胰岛素抵抗人群中也增加， 可见Hcy  与血糖异常密切相关。 研究证据 表明， 促炎细 胞因子的过度产生会导致DM，  胰岛中局 部产生的IL ‑1β 会导致胰岛β 细胞功能障碍从而降 低胰岛素 的产生能  力， 表明胰岛β 细胞凋亡可能是其功能障碍的中心环节。 同时研究也表 明， bcl‑2 是公认的细胞调控靶点， 它可与bax发生拮抗， 从而使bax游离的数量减少。  bcl‑ 2的蛋白含量表达下降， 会增加bax转位到线粒体膜， 使线 粒体的通透性增  强并释放细胞色 素c(cytochrome ‑c， Cyt‑c)， 激活c aspase‑3的联线反应， 发生  凋亡。 本研究中我们通过体 外培养Cbs+/ ‑小鼠胰岛β细胞株(Min6)， 采用免  疫荧光及Western  blot检测凋亡相关指 标， 与对照组相比， 也发现Hcy干预的  细胞中bcl ‑2蛋白表达下降， bax和caspase ‑3的蛋白 表达明显上升， bax/bcl ‑2 的比值增大， 提示Hcy引起的胰岛β 细胞功能障碍是血糖升高的 重要机制。 [0004]EphA2是产生促红细胞生成素的肝细胞(Ep h)受体的主要成员， Ep h受 体酪氨酸激 酶及其ephr in的配体在生理和病理过程中都发挥着 重要的作用。 Eph  受体及其配体 分为两 个亚家族， 其中Eph受体是受体酪氨酸激酶(RTK)的最  大亚家族。 研究表明， EphA2在乳腺 癌、 宫颈癌和黑色素瘤中过表达。 目前尚  未见EphA2与胰岛β 细胞凋亡及2型糖尿病的相关 研究。 [0005]鉴于此， 特提出本发明。 发明内容 [0006]本发明目的在于提供一种同型半胱氨酸引起的胰岛β细胞凋亡诊断用分子  标志说　明　书 1/5 页 3 CN 114622012 A 3