(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 20221041623 6.8 (22)申请日 2022.04.20 (66)本国优先权数据 202210228676.0 202 2.03.08 CN (71)申请人 广东海洋大学 地址 524088 广东省湛江市麻章区海大路1 号 (72)发明人 刘渊博　苏瑛　赵志辉　姜平　 (74)专利代理 机构 广州智斧知识产权代理事务 所(普通合伙) 44649 专利代理师 朱双 (51)Int.Cl. C12Q 1/6888(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种雷州 黑鸭高产蛋性能的分子标记辅助 选育方法 (57)摘要 本发明公开了一种雷州 黑鸭高产蛋性能的 分子标记辅助选育方法。 本发明发现雷州黑鸭 VEGFA基因的内含子4上有8个SNP位点， 其中I4 ‑ 14004G＞T存在突变， 基因型GT个体开产蛋重显 著高于GG型个体。 这8个SNP位点共组成具有 生物 学统计意义的14种单倍型， 其中， 在开产日龄性 状上， H1H3与H1H6、 H2 H5具有显著性差异； 在开产 蛋重性状上， H1H3与H4H6， H1H7与H2H3， H2H3与 H4H6、 H5H6， H3H5与H4H6均具有显著性差异； 在 300日龄产蛋数性状上， 单倍型H1H6与H2H3、 H3H5 差异显著， H2H3与H5H5差异显著， H3H5与H5H5差 异显著。 利用本发明的选育方法， 可筛选出雷州 黑鸭晚开产日龄、 高开产蛋重、 高产蛋量的个体， 为建立雷州黑鸭高产品系奠定理论基础和提供 可行方法。 权利要求书1页 说明书7页 序列表11页 附图3页 CN 114807386 A 2022.07.29 CN 114807386 A 1.一种雷州黑鸭高开产蛋重性状的分子标记辅助选育方法， 其特征在于， 包括以下步 骤： a.对雷州黑鸭个 体进行翅静脉采血， 提取基因 组DNA； b.用引物对： 上游引物F： 5 ′ ‑ATCATGAGAATTAAACCCCATCAGAGTCAG ‑3′和下游引物R： 5 ′ ‑ CTTGAATCCATTCTGGTAGGACACACAC ‑3′， 以上述的基因 组DNA为模板进行PCR扩增； c.PCR扩增产物经纯化后进行测序， 将测序结果比对如SEQ  ID NO.1所示 的VEGFA基因 序列， 确定该雷州黑鸭个体SNP位点I4 ‑14004 G＞T的基因型， 选育该位点为GT基因型个体 即为具有高开产蛋重性状的雷州黑鸭个 体。 2.根据权利要求1所述的方法， 其特征在于， 所述的PCR扩增， 反应总体系25μL， 其中含 有ddH2O 11μL， 上下游引物各0.5 μL， Green  Taq Mix12.5 μL， 雷州黑鸭基因组DNA模板0.5 μ L。 3.根据权利要求1所述的方法， 其特征在于， 所述的PCR扩增， 反应程序为： 94℃预变性 4min； 94℃30s， 53.4℃30s， 72℃20s， 3 5个循环； 72℃延伸10mi n。 4.一种雷州黑鸭高产蛋性能的分子标记辅助选 育方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： a.对雷州黑鸭个 体进行翅静脉采血， 提取基因 组DNA； b.用引物对： 上游引物F： 5 ′ ‑ATCATGAGAATTAAACCCCATCAGAGTCAG ‑3′和下游引物R： 5 ′ ‑ CTTGAATCCATTCTGGTAGGACACACAC ‑3′， 以上述的基因 组DNA为模板进行PCR扩增； c.PCR扩增产物经纯化后进行测序， 将测序结果比对如SEQ  ID NO.1所示 的VEGFA基因 序列得到该雷州黑鸭个体在如下8个SNP位点I4 ‑13876 C＞T、 I4‑13925 C＞T、 I4‑13926 C ＞G、 I4‑14004 G＞T、 I4‑14063 C＞T、 I4‑14076 G＞A、 I4‑14173 T＞C、 I4‑14175 T＞C的基 因型， 确定该 雷州黑鸭个 体单倍型组合； d.在开产日龄性状上， 优先选育H1H6或H2H5单倍型组合的个体， 筛除H1H3单倍型组合 个体； 在开产蛋重性状上， 优先选育H1H3、 H2H3或H3H5单倍型组合的个体， 筛除H4H6、 H1H7或 H5H6单倍型组合的个体； 在300日龄产蛋数性状上， 优先选育H1H6或H5H5单倍型组合的个 体， 筛除H2H 3或H3H5单倍型组合的个 体。 5.根据权利要求3所述的方法， 其特征在于， 所述的PCR扩增， 反应总体系25μL， 其中含 有ddH2O 11μL， 上下游引物各0.5 μL， Green  Taq Mix12.5 μL， 雷州黑鸭基因组DNA模板0.5 μ L。 6.根据权利要求3所述的方法， 其特征在于， 所述的PCR扩增， 反应程序为： 94℃预变性 4min； 94℃30s， 53.4℃30s， 72℃20s， 3 5个循环； 72℃延伸10mi n。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114807386 A 2一种雷州黑鸭高产蛋性能的分子标记辅助选育方 法 技术领域 [0001]本发明属于分子生物学及遗传育种技术领域， 具体涉及 一种雷州黑鸭高产蛋性能 的分子标记辅助选 育方法。 背景技术 [0002]我国的鸭种遗传资源丰富， 全国各地因为地域、 经济、 文化的差异形成了许多的品 种， 大量文献报道地方鸭种 具有得天独厚的种质优势， 利用好这些优良的遗传资源对于培 育我国特有的优质品种、 提升我国鸭种品牌在国际上 的认可度具有十分重要的意义。 雷州 黑鸭广泛分布于广东省湛江市雷州半岛， 它 是由雷州半岛的农民长期放养的地方鸭种群， 个体小， 产蛋量多， 蛋形大， 而且具有耐粗饲、 抗病力强、 觅食力强和环境适应性广的特点， 但目前欠 缺系统选 育， 导致个体间差异较大， 不能形成规模化 生产。 [0003]申请人与合作单位目前已完成对雷州黑鸭群体的系统选育， 选育出雷州黑鸭的 高、 低产群体、 育种核心群， 可进 行鸭苗繁育、 特种养殖等相关技术。 但是对于雷州黑鸭的优 良繁殖性状的选育方面， 目前缺乏一套能用于选育雷州黑鸭产蛋性能的分子标记和选育方 法。 [0004]血管内皮生长因子A(vascular  endothelial  growth factor,VEGFA)， 又称血管 通透因子(vascular  permeability  factor,VPF)是一种高度 特异性的促血管内皮细胞生 长因子， 具有促进血管通透性增加、 细胞外基质变性、 血管内皮细胞迁移、 增殖和血管形成 等作用。 发明内容 [0005]本发明的目的是为了克服现有技术的不足， 提供一种雷州黑鸭产蛋性能相关分子 标记及辅助选育方法， 以将其应用到雷州黑鸭的实际育种过程中， 选育具有高产蛋性能的 雷州黑鸭群 体。 [0006]本发明的第一个目的是提供一种雷州黑鸭高开产蛋重性状的分子标记辅助选育 方法， 其包括以下步骤： [0007]a.对雷州黑鸭个 体进行翅静脉采血， 提取基因 组DNA； [0008]b.用引物对： 上游引物F： 5 ′ ‑ATCATGAGAATTAAACCCCATCAGAGTCAG ‑3′和下游引物R： 5′ ‑CTTGAATCCATTCTGGTAGGACACACAC ‑3′， 以上述的基因 组DNA为模板进行PCR扩增； [0009]c.PCR扩增产物经纯化后进行测序， 将测序结果比对如SEQ  ID NO.1所示的VEGFA 基因序列， 确定该 雷州黑鸭个 体SNP位点I4‑14004 G＞T的基因型(对应于表 2)， [0010]选育该位点为GT基因型个 体即为具有高开产蛋重性状的雷州黑鸭个 体。 [0011]本发明的第二个目的是提供一种雷州黑鸭高产蛋性能的分子标记辅助选育方法， 其包括以下步骤： [0012]a.对雷州黑鸭个 体进行翅静脉采血， 提取基因 组DNA； [0013]b.用引物对： 上游引物F： 5 ′ ‑ATCATGAGAATTAAACCCCATCAGAGTCAG ‑3′和下游引物R：说　明　书 1/7 页 3 CN 114807386 A 3