(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210415720.9 (22)申请日 2022.04.20 (71)申请人 湖北中医药大学 地址 430000 湖北省武汉市洪山区黄家湖 西路1号 (72)发明人 刘义飞　袁仁森　王旭　 (74)专利代理 机构 武汉智嘉联合知识产权代理 事务所(普通 合伙) 42231 专利代理师 徐绍新 (51)Int.Cl. C12Q 1/6895(2018.01) C12Q 1/6858(2018.01) C12N 15/11(2006.01) A01H 1/04(2006.01) (54)发明名称 用于野菊和神农香菊种质资源鉴定的SSR分 子标记引物组合 (57)摘要 本发明公开了一组用于野菊和神农香菊种 质资源鉴定的SSR分子标记， 由21对SSR组成， 编 号为SSR01 ‑SSR21， 用于扩增这21对分子标记的 引物序列如SEQ  IDNO:1‑42所示， 属于分子生物 学技术领域。 利用这21对SSR分子标记， 可以对收 集到的野菊和神农香菊进行鉴定和种质遗传多 样性分析， 本发明首次利用SSR标记共同检测野 菊和神农香菊种质的遗传多样性， 这一组SSR分 子标记的多态性良好， 遗传多样性水平较高， 可 以用于野菊和神农香菊的亲缘关系分析、 资源遗 传评价、 种间杂交后代鉴定、 性状基因的定位和 分子标记辅助育种等领域。 权利要求书3页 说明书10页 序列表7页 附图1页 CN 114774574 A 2022.07.22 CN 114774574 A 1.用于野菊和神农香菊种质资源鉴定的SSR分子标记引物组合， 其特征在于， 所述的 SSR分子标记包括SSR01、 SSR02、 SSR03、 SSR04、 SSR05、 SSR06、 SSR07、 SSR08、 SSR09、 SSR10、 SSR11、 SSR12、 SSR13、 SSR14、 SSR15、 SSR16、 SSR17、 SSR18、 SSR19、 SSR20和SSR21， 所述的引物组合 为： (1)扩增S SR分子标记的S SR01引物： SSR01‑F： 5'‑GCACCAGTCACCTTCTTGGT‑3' SSR01‑R： 5'‑GGTGGGAGTGGGAGGTATTT‑3' (2)扩增S SR分子标记的S SR02引物： SSR02‑F： 5'‑ACAACGGGCTCTTCAATACG‑3' SSR02‑R： 5'‑CCCAAGACCTAGCCAAAAGA‑3' (3)扩增S SR分子标记的S SR03引物： SSR03‑F： 5'‑TTGGTCAAACTGGGCAAAAT‑3' SSR03‑R： 5'‑GGGGTCGATGGTATTTGGTA‑3' (4)扩增S SR分子标记的S SR04引物： SSR04‑F： 5'‑TATCATCCGCCAATTCATCA‑3' SSR04‑R： 5'‑ATGTAGCGC CAGAAGACGTT‑3' (5)扩增S SR分子标记的S SR05引物： SSR05‑F： 5'‑TTGATCGTGCAGA AGTGGAG‑3' SSR05‑R： 5'‑CCTAAGCGCATGT TCCCTAC‑3' (6)扩增S SR分子标记的S SR06引物： SSR06‑F： 5'‑CCCGTTTGTGCTAATGGAGT‑3' SSR06‑R： 5'‑AAGAGCAAACCGAGAAGTGC‑3' (7)扩增S SR分子标记的S SR07引物： SSR07‑F： 5'‑ACCCACGGTCAAATCACAAT‑3' SSR07‑R： 5'‑CTCACTTGTGGGAGCCAAAC‑3' (8)扩增S SR分子标记的S SR08引物： SSR08‑F： 5'‑CAAAACCTTTCACCCCAATC‑3' SSR08‑R： 5'‑ATCATGTG GTGGTCATGTG G‑3' (9)扩增S SR分子标记的S SR09引物： SSR09‑F： 5'‑ACCTCACCCTCCCTCATTCT‑3' SSR09‑R： 5'‑AGCCATACGTG GCTTTACCA‑3' (10)扩增S SR分子标记的S SR10引物： SSR10‑F： 5'‑TTTGTGCAGGAGGGAAGTTT‑3' SSR10‑R： 5'‑CAACCATTATTTGGTCGGCTA‑3' (11)扩增SSR分子标记的S SR11引物： SSR11‑F： 5'‑AAAGATGCAGCA ACCACCTC‑3' SSR11‑R： 5'‑TCTTTTGTAGGACGGCTTGG‑3' (12)扩增S SR分子标记的S SR12引物： SSR12‑F： 5'‑CCCGTGTGACATAATTCTATCTAGC ‑3'SSR12‑R： 5'‑CTGCATCTGGATCTGGATTTC ‑权　利　要　求　书 1/3 页 2 CN 114774574 A 23' (13)扩增S SR分子标记的S SR13引物： SSR13‑F： 5'‑CTTTTCCTCACCACCCAAAA‑3' SSR13‑R： 5'‑AACAATCCACCTGGCAGAAC‑3' (14)扩增S SR分子标记的S SR14引物： SSR14‑F： 5'‑TCAAACACCACCCAACAAAA‑3' SSR14‑R： 5'‑ATATTCGGCAACAAGCAACC‑3' (15)扩增S SR分子标记的S SR15引物： SSR15‑F： 5'‑GGATTCGTTGGAGAGACGAG ‑3' SSR15‑R： 5'‑TTGTTGCGGTTGTGATTGTT‑3' (16)扩增S SR分子标记的S SR16引物： SSR16‑F： 5'‑ATTCTCGGCATTTGTTTTGG‑3' SSR16‑R： 5'‑GAACCCCTATGTCCCATCCT‑3' (17)扩增S SR分子标记的S SR17引物： SSR17‑F： 5'‑TTCCCATCATTTTCCCAAAC‑3' SSR17‑R： 5'‑TAACAGCAGCAG GAGCAGAA‑3' (18)扩增S SR分子标记的S SR18引物： SSR18‑F： 5'‑CCCGGTTTGAAATCTAGGAA‑3' SSR18‑R： 5'‑TCCCAAATGGTTTCGACAAT‑3' (19)扩增S SR分子标记的S SR19引物： SSR19‑F： 5'‑TCGAACCGTTTCACTCTTCC‑3' SSR19‑R： 5'‑AACAATCCAAGCCTGACCAC‑3' (20)扩增S SR分子标记的S SR20引物： SSR20‑F： 5'‑TTCCTTCATCCTGGACAACC‑3' SSR20‑R： 5'‑ACCACCAGAACCAGAACCAG‑3' (21)扩增S SR分子标记的S SR21引物： SSR21‑F： 5'‑ACCATCCGCAGGTTTACAAG‑3' SSR21‑R： 5'‑CCCACGATGTCGT TCTCTTT‑3'。 2.权利要求1所述的SSR分子标记引物组合在野菊和神农香菊筛选或种质资源鉴定中 的应用。 3.一种野菊和 神农香菊 筛选或种质资源鉴定的方法， 其特 征在于包括以下步骤： (1)待测植株总DNA提取； (2)以步骤(1)提取的总DNA作为模板， 分别用权利要求1所述的SSR分子标记引 物组合 进行PCR扩增； (3)毛细管电泳检测步骤(2)的PCR扩增产物， 收集数据； (4)根据步骤(3)获得的数据进行遗传多样性指标、 聚类及多态信息含量PIC计算分析。 4.根据权利要求3所述的方法， 其特征在于， 步骤(2)中所述PCR扩增的体系为： 50n g/ μl 的DNA模板2u l， 5 μM的正引物、 反引物各0.5u l、 2×Es Taq Master Mix 5 μl， 双蒸水 1.85 μl， Fam/Hex/Rox/Tamra  0.15ul， 体系的总体积为10 μl。权　利　要　求　书 2/3 页 3 CN 114774574 A 3