(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210407832.X (22)申请日 2022.04.19 (71)申请人 中国农业科 学院郑州果 树研究所 地址 450009 河南省郑州市管城回族区未 来路南端郑州果 树研究所 (72)发明人 苏艳丽　薛华柏　韩芳　高晓铭　 杨健　王龙　王苏珂　 (74)专利代理 机构 郑州大通专利商标代理有限 公司 41111 专利代理师 蔡少华 (51)Int.Cl. C12Q 1/6895(2018.01) C12Q 1/6858(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 梨果肉褐变性状相关的InDel-85标记及其 应用 (57)摘要 本发明属于梨 分子育种技术领域， 公开了梨 果肉褐变性状相关的InDel ‑85标记， 所述InDel ‑ 85标记位于 ‘满天红’ × ‘红香酥’遗传连锁图谱 中第2号染色体的第17936028~17936232bp位置， InDel‑85标记的核苷酸序列如SEQ  ID NO.85所 示， 序列全长2 05bp， InDel ‑85标记的正向引物为 5'‑TTAGCCGTTTTCTTCATGTT ‑3'、 反向引物为5' ‑ AGGCTCAAGAAAGGAGAGTT ‑3'； 梨果肉易褐单株表 现为InDel ‑85标记序列的插入， 梨果肉不易褐单 株表现为InDel ‑85标记序列的缺失。 本发明设计 的InDel‑85标记能够用于鉴定梨果肉是否容易 发生褐变， 具有良好的应用价值， 可用于梨分子 育种。 权利要求书1页 说明书15页 序列表22页 附图2页 CN 114921577 A 2022.08.19 CN 114921577 A 1.梨果肉褐变性状相关的InDel ‑85标记， 其特征在于， 所述InDel ‑85标记位于 ‘满天 红’ × ‘红香酥’遗传连锁图谱中第2号染色体的第17936028~17936232bp位置， InDel ‑85标 记的核苷酸序列如SEQ  ID NO.85所示， 序列全长205bp， InDel ‑85标记的正向引物为5' ‑ TTAGCCGTTTTCTTCATGTT ‑3'、 反向引物为5' ‑AGGCTCAAGAAAGGAGAGTT ‑3'； 梨果肉易褐单株表 现为InDel‑85标记序列的插 入， 梨果肉不 易褐单株表现为 InDel‑85标记序列的缺失。 2.含有梨果肉褐变性状相关的I nDel‑85标记的引物对的试剂盒。 3.权利要求2所述的试剂盒在梨果肉褐变品种鉴定中的应用。 4.根据权利要求3所述的应用， 其特 征在于， 具体鉴定方法包括以下步骤： a、 提取待检测梨材 料的基因 组DNA； b、 采用InDel‑85标记的引物对 对待检测梨材 料基因组DNA进行PCR扩增； c、 PCR产物经电泳检测， 若有两个条带则梨果肉易褐变， 若有一个条带则梨果肉不易褐 变。 5.梨果肉褐变性状相关的I nDel‑85标记在梨分子标记辅助育种中的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114921577 A 2梨果肉褐变性状相关的InDel ‑85标记及其应用 技术领域 [0001]本发明属于梨分子育种技术领域， 涉及梨果肉褐变性状相关的InDel ‑85标记及其 应用。 背景技术 [0002]近几年， 鲜切水果以其新鲜、 方便等特点， 特别受到消费者的喜爱。 但是， 许多梨品 种果肉暴露在空气中会很快出现褐变现象， 外观 欠佳、 营养被破坏， 大大降低消费者的食用 欲望。 挖掘控制梨果肉褐变性状的相关基因， 开 发梨果肉褐变相关的分子标记， 能加快果肉 抗褐变梨品种的选育、 减少育种成本， 对延长鲜切梨的货架期， 解决梨果加工的限制性因 素， 推动梨产业的多样化 发展有重要的意义。 在果实褐变的生理和分子机制解析方面， 研究 者发现果 肉褐变是在氧的作用下， 果 肉组织内的酚类物质被多酚氧化酶催化氧化为醌， 然 后酶促褐变为黑色素， 而使果 实组织变成褐色的生理生化过程， 绿原 酸是PPO最主要的褐变 底物。 Boss等从苹果果皮中克隆得到了多酚氧化酶(polyphenoloxidase,PPO)的cDNA， Haruta等通过PCR反应克隆了两个编码苹果PPO的DNA片段， 并证实蔷薇科植物 果实中的PPO 非常相似。 Guardo等将与苹 果果肉褐变性状相关的基因定位在基因组上， 在这些基因中PPO 和PAL与果肉褐变关系最为密切。 甘惠芳采用RNAi技术将苹果PPO基因导入梨中发现， 干扰 效果并不如 在苹果中好， 抑制果肉发生褐变的效果较差 。 [0003]截至目前， 控制梨果肉褐变 的分子机制仍有待深入研究， 也没有辅助筛选杂交群 体中不易褐变单株所需的实用分子标记， 难以对抗褐变 梨新品种选 育提供有效支撑 。 发明内容 [0004]本发明的目的在于提供梨果肉褐变性状相关的InDel ‑85标记， 能够用于鉴定梨果 肉是否容 易发生褐变， 具有良好的应用价 值， 可用于梨分子 育种。 [0005]为实现上述目的， 本发明采用以下技 术方案： 本发明提供梨果肉褐变性状相关的InDel ‑85标记， 所述InDel ‑85标记位于 ‘满天 红’ × ‘红香酥’遗传连锁图谱中第2号染色体的第17936028～179362 32bp位置， InDel ‑85标 记的核苷酸序列如SEQ  ID NO.85所示， 序列全长205bp， InDel ‑85标记的正向引物为5' ‑   TTAGCCGTTTTCTTCATGTT ‑3'、 反向引物为5' ‑AGGCTCAAGAAAGGAGAGTT ‑3'； 梨果肉易褐单株表 现为InDel‑85标记序列的插 入， 梨果肉不 易褐单株表现为 InDel‑85标记序列的缺失。 [0006]本发明还提供含有梨果肉褐变性状相关的I nDel‑85标记的引物对的试剂盒。 [0007]本发明还提供 上述试剂盒在梨果肉褐变品种鉴定中的应用。 [0008]优选地， 上述试剂盒在梨果肉褐变品种鉴定中的应用， 具体鉴定方法包括以下步 骤： a、 提取待检测梨材 料的基因 组DNA； b、 采用InDel‑85标记的引物对 对待检测梨材 料基因组DNA进行PCR扩增； c、 PCR产物经电泳检测， 如若有两个条带则梨果肉易褐变， 若有一个条带则梨果肉说　明　书 1/15 页 3 CN 114921577 A 3