(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210400614.3 (22)申请日 2022.04.16 (71)申请人 宁波市第一医院 地址 315000 浙江省宁波市海曙区柳汀街 59号 (72)发明人 俞秀冲　郭俊明　宋雪梅　严志龙　 张双双　谢瑶瑶　翁秋燕　 (74)专利代理 机构 宁波诚源专利事务所有限公 司 33102 专利代理师 叶桂萍 (51)Int.Cl. C12Q 1/6886(2018.01) C12N 15/11(2006.01) C12Q 1/6851(2018.01) C12N 15/10(2006.01) (54)发明名称 一种用于胃组织tRF-28-ZJ47D112Z 4DZ的相 对定量检测方法及其应用 (57)摘要 本发明涉及一种用于胃组织tRF ‑28‑ ZJ47D112Z 4DZ的相对定量检测方法及其应用， 其 特征在于： 该tRF ‑28‑ZJ47D112Z4DZ的核苷酸序 列如SEQ ID NO： 1所示， 该tRF ‑28‑ZJ47D112 Z4DZ 在胃癌患者组织中的特异性表达下调： 所述引物 为： F1： 5' ‑CTCCCGGTTGGCTTCCTAAG ‑3'； R1： 5' ‑ GGTACCTCCTCTCTTCTCTACT ‑3'， 与现有技术相比， 本发明的优点在于胃癌组织中的特异性表达下 调tRF‑28‑ZJ47D112Z 4DZ可作为胃癌诊断 的新型 分子标记 物。 权利要求书1页 说明书7页 序列表1页 附图5页 CN 114891884 A 2022.08.12 CN 114891884 A 1.一种检测组织 中tRF‑28‑ZJ47D112Z4DZ表达的引物在制备胃癌 辅助诊断试剂盒中的 应用， 其特征在于： 该tRF ‑28‑ZJ47D112Z4DZ的核苷酸序列如SEQ  ID NO： 1所示， 该tRF ‑28‑ ZJ47D112Z4DZ在胃癌 患者组织中的特异性表达下调： 所述引物为： F1： 5'‑CTCCCGGTTGGCTTCCTAAG‑3'； R1： 5'‑GGTACCTCCTCTCTTCTCTACT ‑3'。 2.根据权利要求1所述的应用， 其特征在于： 所述试剂 盒还包括有内参小核RNU6的特异 性扩增上 下游引物： F2： 5'‑CGGCAGCACATATACTA AAATTGGAA‑3'； R2： 5'‑CGAATTTGCGTGTCATC CTTGCG‑3'。 3.根据权利要求2所述的应用， 其特征在于： 所述试剂 盒还包括有内参小核RNU6的逆转 录引物序列为： 5'‑GCAGACGAG GGTACCTCCTCTCTTCTCTACTCGTGTC CTACCCTCGTCTGCA AAATA‑3'。 tRF‑28‑ZJ47D112Z4DZ的逆转录引物序列为： 5'‑GCAGACGAG GGTACCTCCTCTCTTCTCTACTCGTGTC CTACCCTCGTCTGCAC CCAC‑3'。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114891884 A 2一种用于胃组织tRF ‑28‑ZJ47D112Z4DZ的相对定量 检测方法 及其应用 技术领域 [0001]本发明涉及一种胃癌组织中tRNA衍生片段的检测方法， 尤其涉及一种用于胃组织   tRF‑28‑ZJ47D112Z4DZ的相对定量检测方法及其应用。 背景技术 [0003]早期诊断是提高胃癌患者预后的关键因素， 但是早期胃癌患者通常无症状或症状 不典型。 因此， 胃癌初诊时患者大多 数已属晚期， 预后差， 5年生存率低于30％。 然而， 胃癌患 者如能早期诊断和治疗， 其5年生存率可达到90％。 因此发现新型胃癌诊断标志物对于胃癌 的早期诊断、 判断疗效和预测复发具有重要价 值。 [0004]近年研究表明， tRNA衍生片段(tRNA ‑derived fragment， tRF)是tRNA被特异性切 割产生的具有调节功能的小非编码RNA分子， 参与多种生理和病理过程。 由于tRF具有结构 稳定和组织特异性表达等特点， 具有成为肿瘤诊断新型 标志物的巨大潜力。 发明内容 [0005]本发明所要解决的技术问题是针对上述现有技术现状而提供一种检测组织中   tRF‑28‑ZJ47D112Z4DZ表达的引物在制备胃癌辅助诊断试剂盒中的应用。 [0006]本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为： 该检测组织中  tRF‑28‑ ZJ47D112Z4DZ表达的引物在制备胃癌辅助诊断试剂盒中的应用， 其特征在于： 该tRF ‑28‑ ZJ47D112Z4DZ的核苷酸序列如SEQ  ID NO： 1所示，  UUGGCUUCCUAAGCCAGGGAUUGUGGGU， 所述 tRF‑28‑ZJ47D112Z4DZ在胃癌 患者组织中的特异性表达下调： [0007]所述引物为： [0008]F1： 5’ ‑CTCCCGGTTGGCTTCCTAAG‑3'； [0009]R1： 5’ ‑GGTACCTCCTCTCTTCTCTACT ‑3’。 [0010]进一步地， 所述试剂盒还 包括有内参小 核RNU6的特异性扩增上 下游引物： [0011]F2： 5’ ‑CGGCAGCACATATACTA AAATTGGAA‑3’ [0012]R2： 5’ ‑CGAATTTGCGTGTCATC CTTGCG‑3’。 [0013]进一步地， 所述试剂盒还 包括有内参小 核RNU6的逆转录引物序列为： [0014]5'‑GCAGACGAG GGTACCTCCTCTCTTCTCTACTCGTGTC CTACCCTCGTCTGCA  AAATA‑3'。 [0015]tRF‑28‑ZJ47D112Z4DZ的逆转录引物序列为： [0016]5'‑GCAGACGAG GGTACCTCCTCTCTTCTCTACTCGTGTC CTACCCTCGTCTGCA  CCCAC‑3'。 [0017]本发明还提供一种检测tRF分子标记物的方法， 其特征在于所述的方法包括如下 步骤： [0018](1)采集胃癌组织， 称取组织， 提取组织中的总RNA； [0019](2)将总RNA特异性逆转录成cDNA； [0020](3)将cDNA进行实时荧光定量PCR方法检测， 反应结束后检测样品中  tRF‑28‑说　明　书 1/7 页 3 CN 114891884 A 3