(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210396387.1 (22)申请日 2022.04.15 (71)申请人 张家港澳 洋医院有限公司 地址 215699 江苏省苏州市张家港市杨舍 镇金港大道 279号 (72)发明人 江佳佳　王冬丽　许文荣　钱晖　 张帆　邱双洋　黄晓娟　 (74)专利代理 机构 北京高沃 律师事务所 1 1569 专利代理师 高辉 (51)Int.Cl. C12Q 1/6886(2018.01) C12N 15/113(2010.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种胃癌血浆外泌体circRNA标志物及其试 剂盒和应用 (57)摘要 本发明涉及一种胃癌血浆外泌体circRNA标 志物及其试剂盒和应用， 属于生物及分子诊断技 术领域。 本发明提供了血浆外泌体circRNA标志 物在制备胃癌诊断试剂盒和/或胃癌诊断制剂中 的应用， 首次发现血浆外泌体中存在hsa_circ_ 0000512， 并通过 实验证实： 本发明所述的血浆外 泌体hsa_circ_0000512的表达水平在胃癌患者 体内显著升高， 是胃癌的早期诊断和预后判断具 有潜在价 值的新型生物标志 物。 权利要求书1页 说明书7页 序列表1页 附图5页 CN 114606321 A 2022.06.10 CN 114606321 A 1.一种血浆外泌体circRNA标志物在制备胃癌诊断试剂盒和/或胃癌诊断制剂中的应 用， 其特征在于， 所述血浆外泌体circRNA标志 物为hsa_circ_0 000512。 2.根据权利要求1所述的应用， 其特征在于， 所述hsa_circ_0000512的核苷酸序列如 SEQ ID NO.1所示。 3.根据权利要求1所述的应用， 其特征在于， 所述血浆外泌体circRNA标志物由血浆外 泌体circRNA提取试剂盒提取得到， 所述血浆外泌体circRNA 提取试剂盒包括提取血浆外泌 体试剂和提取外泌体circRNA试剂。 4.根据权利要求3所述的应用， 其特征在于， 所述提取血浆外泌体试剂包括ExoQiuck   Plasmaprep  and Exosome precipitation  kit， 所述提取外泌体circRNA试剂包括 miRNeasy  Serum/plas ma kit、 氯仿、 无 水乙醇。 5.一种用于检测权利要求1所述血浆外泌体circRNA标志物的引物组， 其特征在于， 所 述引物组为检测hsa_circ_0 000512含量的上 下游引物。 6.根据权利要求5所述的引物组， 其特征在于， 所述上游引物的核苷酸序列如SEQ  ID  NO.2所示， 所述下游引物的核苷酸序列如SEQ  ID NO.3所示。 7.权利要求5或6所述的引物组在制备胃癌诊断试剂盒和/或胃癌诊断制剂中的应用。 8.一种胃癌诊断试剂盒， 其特 征在于， 所述试剂盒包括权利要求5或6所述的引物组。 9.根据权利要求8所述的诊断试剂 盒， 其特征在于， 所述诊断试剂 盒还包括血浆外泌体 circRNA的逆转录试剂和荧 光定量PCR试剂。 10.权利要求8 或9所述的诊断试剂 盒在胃癌诊断和治疗中的应用， 其特征在于， 通过所 述诊断试剂盒测定血浆外泌体中hsa_circ_0000512含量， 进行hsa_circ_0000512表达水平 比较。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114606321 A 2一种胃癌血浆外泌体circRNA标志物及其试剂盒和应用 技术领域 [0001]本发明涉及生物及分子诊 断技术领域， 特别是涉及一种胃癌血浆外泌体circRNA 标志物及其试剂盒和应用。 背景技术 [0002]胃癌(Gastric  cancer,GC)， 又称胃腺癌(Gastric  adenocaroma)， 近年来引起了 世界各国的社会关注， 是世界上最常见的恶性肿瘤之一， 根据最新的全球数据统计， 胃癌新 增病例超 过100万例， 死亡人数估计为769000人。 尽管近年来在 诊断方法和外科手术方面取 得了许多进展， 但胃癌患者的总体生存状况仍不尽如人意， 大多 数国家的5年总生存率低于 30％。 胃癌治疗的复杂性在于其肿瘤组织内的异质性， 不仅有遗传因素， 而且存在表观遗传 的改变， 尽早 发现及时治疗能为患者带来最大的生存空间。 因此， 寻找有效的诊断和治疗方 法对胃癌的研究具有重要意 义。 [0003]环状RNA(Circ RNA)是一种新的非编码RNA， 在肿瘤的起始和发展中起着重要作用。 circRNA的多种生物学功能正在被广泛研究。 其中， 最显著的功能是作为miRNA海绵， 可以结 合单个或多个 miRNA并调控其下游基因的表达， 从而发挥对疾病的调控作用。 此外， circRNA 具有组织和发育阶段特异性表达的特点， 其表达广泛， 稳定性高， 具有环状结构的可耐受 RNaseR的降解， 比线性转录本更稳定。 因此， 这些分子有望从临床样本中提取并分析， 其作 为生物标志 物的潜力的研究已被广泛开展。 [0004]外泌体直径30 ‑100nm， 是由多种 细胞分泌的小细胞外囊泡(sEV)， 几乎存在 于所有 体液中。 外泌体的生物发生始于质膜上 的内吞作用形成内体， 然后早期的内体成熟为多囊 泡内体(MVE)， 外泌体通过内体向内出芽产生腔内囊泡(ILV)然后与细胞膜 融合释放ILV到 细胞外从而 形成。 分析表明， 外泌体内富含多种核酸分子， 且外泌体的双层膜能保护这些分 子免受蛋白酶、 核酸酶和其他环境影响， 越来越多的证据表明， 外泌体内富含circRNA并能 在体液中检测到， 可参与癌症的病理生理过程导致癌细胞增殖、 侵袭、 转移和化疗耐药性。 因此， 外泌体circRNA的液体活检可能被开发为新型的非侵入性生物标志物和癌症的潜在 靶分子。 [0005]目前， 在胃癌的研究领域中， 由于外泌体提取方法的限制， 血浆外泌体circRNA标 志物的研究鲜有报道， 大部 分研究只是聚焦于组织或血液circRNA的纯研究。 且由于经典的 外泌体提取方法—超速离心法耗时长、 损失大， 样本量需求高， 难以满足临床的检测需求， 因此亟待开发一种更为简单快速的血浆外泌体circRNA提取方法， 为胃癌的早期诊断提供 新的潜在标志 物以及帮助临床实验室挖掘更多的血浆外泌体circRNA标志 物。 发明内容 [0006]本发明的目的在于提供一种胃癌血浆外泌体circRNA标志物hsa_circ_0000512， 通过对血浆外泌体中hsa_circ_0000512含量的检测和分析， 能够对胃癌进行早期诊断和预 后判断。说　明　书 1/7 页 3 CN 114606321 A 3