(19)国家知识产权局 (12)发明 专利 (10)授权公告 号 (45)授权公告日 (21)申请 号 202210398770.0 (22)申请日 2022.04.15 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 114854869 A (43)申请公布日 2022.08.05 (73)专利权人 中国农业科 学院北京畜牧兽医研 究所 地址 100193 北京市海淀区 圆明园西路2号 (72)发明人 蒋琳　李业芳　张政凯　马月辉　 浦亚斌　 (74)专利代理 机构 北京路浩知识产权代理有限 公司 11002 专利代理师 黄爽 (51)Int.Cl. C12Q 1/6888(2018.01) C12Q 1/6869(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (56)对比文件 CN 105238778 A,2016.01.13 CN 114214426 A,202 2.03.22 CN 102162013 A,201 1.08.24 CN 10870767 7 A,2018.10.26CN 110373474 A,2019.10.25 CN 114196765 A,2022.03.18 CN 112481392 A,2021.0 3.12 CN 106434955 A,2017.02.2 2 US 2021072 259 A1,2021.0 3.11 宋伸等.基 于高通量测序技 术的山羊遗传多 样性及其 生产性状 研究进展. 《中国畜牧兽医》 .2017,第4 4卷(第10期),2 965-2972. 王俊杰等.羊经济性状全基因 组关联分析与 基因组育种的研究进 展. 《家畜生态学报》 .2017, (第11期),7-13+26. E-S Kim等.Multiple gen omic signatures of selecti on in goats and she ep indigenous to a hot arid enviro nment. 《Heredity》 .2015,第1 16卷(第3期),25 5-264. Rashid Saif等.Who le Genome Selective Sweeps Analysis i n Pakistani Kamori Goat. 《biorxiv》 .2021, Ensembl.rs670824681 (SNP) - Flan king sequence - Capra_ hircus - Ensembl gen ome browser 107. 《Ensembl》 .2015, 审查员 谢庆宁 (54)发明名称 与山羊耐热性状相关的SNP标记与应用 (57)摘要 本发明提供一种与山羊耐热性状相关的SNP 标记与应用。 所述SNP分子标记位于山羊第21号 染色体第46330931bp处； 所述位点上存在T/A碱 基突变， 与山羊耐热性状具有显著的相关性。 本 发明的SNP标记能够用于山羊分子标记辅助育 种。 本发明提供的分子标记不受山羊的年龄、 性 别等限制， 可用于耐热山羊选育， 甚至刚出生即 可进行准确地筛选， 大大加快了耐热山羊的育种 进程。 权利要求书1页 说明书5页 序列表1页 附图2页 CN 114854869 B 2022.12.09 CN 114854869 B 1.鉴定耐热山羊品种的方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： 1)提取待测山羊的基因 组DNA； 2)以待测山羊的基因 组DNA为模板， 利用SEQ  ID NO:1‑2所示的引物进行PCR扩增反应； 3)分析PCR扩增产物， 检测PCR扩增产物第 345bp处的基因型， 鉴定基因型为AA的个体耐 热性显著高于TA、 T T基因型个 体的耐热性。 2.根据权利要求1所述的方法， 其特征在于， 步骤2)中所用PCR扩增反应体系以50  μL计 包括： 50～100  ng/ μL待测山羊的基因组DNA  1μL， 10 pmol/ μL正向引物和反向引物各1μL， 10 mmol/L dNTPs Mixture 1 μL， 1.25 U/25 μL Taq DNA聚合酶1 μL， 2 ×PCR反应缓冲液25 μL 和余量的双蒸水。 3.根据权利 要求1所述的方法， 其特征在于， 步骤2)中所用PCR扩增反应程序为： 95℃预 变性5min； 55℃或60℃退火3 0s， 72℃延伸1 ‑2min， 共30‑35个循环； 72℃保温2mi n。 4.检测分型与山羊耐热性状相关的SNP标记的试剂在鉴定及选育改良耐热山羊品种中 的应用， 所述SNP标记为SEQ  ID NO:3所示序列第345bp处的T/A多态性， 在该SNP位点的基因 型为AA的个体的耐热性被鉴定为显著高于TA、 TT基因型个体的耐热性， 基因型为AA的个体 用于耐热山羊品种选 育。 5.检测分型与山羊耐热性状相关的SNP标记的试剂在山羊耐热性状早期预测中的应 用， 所述SNP标记为SEQ  ID NO:3所示序列第345bp处的T/A多态性， 在该SNP位点的基因型为 AA的个体的耐热性被预测显著高于TA、 T T基因型个 体的耐热性。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114854869 B 2与山羊耐热性状相关的SNP标记与应用 技术领域 [0001]本发明涉及分子生物学及遗传育种领域， 具体地说， 涉及一种与山羊耐热性状相 关的SNP标记与应用。 背景技术 [0002]SLC25A21基因是一个蛋白质编码基因， 其编码的蛋白是溶质载体蛋白家族中的重 要成员。 该蛋白在 线粒体载体转运C5 ‑C7C氧二羧酸盐通过线 粒体内膜的过程中发挥重要作 用。 其转运的物质包括2 ‑氧代己二酸脂、 2 ‑氧代戊二酸等， 其中2 ‑氧代己二酸脂是哺乳动物 赖氨酸、 色氨酸和羟赖氨酸分解代谢的常见中间产 物。 该基因发生突变时， 可能对哺乳动物 体内的氨基酸代谢过程产生严重影响。 在高温和低温环境下山羊群体中进行选择信号筛 选， 发现SLC25A 21基因座 位的多态性变异对山羊热适应性的影响达 到显著水平。 [0003]随着全球气温逐步升高和集约化养殖加剧， 山羊对热环境的适应性问题逐渐成为 规模化养殖场不得不面临的一项挑战。 山 羊处于极端的高温环境下， 机体会出现热应激， 进 而在生理、 泌乳、 繁殖等环节给行业造成经济损失。 山 羊对热环境的适应性是一个复杂的生 物过程， 涉及到许多不同的生物过程和调节蛋白。 近年来， 分子遗传技术的飞速发展， 使DNA 分子标记技术在山羊遗传多样性研究中起着重要作用， 为更好地开 发和利用优良品种的优 良经济特性及保护和 合理的利用品种资源， 有必要开发山羊特异的分子标记， 应用于耐热 性山羊的选 育， 并为耐热性 山羊的分子 育种提供一定的理论依据。 发明内容 [0004]本发明的目的是提供与山羊耐热性状相关的SNP标记与应用。 [0005]为了实现本发明目的， 第一方面， 本发明提供一种与山羊耐热性状相关的SNP标 记， 所述SNP标记含有山羊如SEQ  ID NO:3所示序列第345bp处的多态性为T/A的核苷酸序 列。 [0006]所述SNP标记位于山羊第 21号染色体第46330931bp处； 所述位点上存在T/A碱基突 变， 与山羊耐热性状具有显著的相关性； 所述SNP标记基于山羊基因组序列信息版本号 ASM170441v1， 2016年8月。 [0007]进一步地， 所述SNP标记包含的多态性位点的基因型为AA的个体耐热性显著高于 TA、 TT基因型。 [0008]第二方面， 本发明提供用于检测所述SNP标记的引物， 包括如SEQ  ID NO:1所示的 正向引物和如SEQ  ID NO:2所示的反向引物。 [0009]第三方面， 本发明提供含有所述引物的检测试剂或试剂盒。 [0010]进一步地， 所述试剂盒还包括dNTP  Mixture、 TaKaR a Ex Taq DNA聚合酶、 PCR反应 缓冲液、 标准阳性模板等中的至少一种。 [0011]第四方面， 本发明提供鉴定或选 育耐热山羊品种的方法， 包括以下步骤： [0012]1)提取待测山羊的基因 组DNA；说　明　书 1/5 页 3 CN 114854869 B 3