(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210390276.X (22)申请日 2022.04.14 (71)申请人 中国农业科 学院兰州畜牧与兽药研 究所 地址 730050 甘肃省兰州市七里河区硷沟 沿335号 (72)发明人 卢曾奎　袁超　郭婷婷　杨博辉　 刘建斌　岳耀敬　李建烨　牛春娥　 (74)专利代理 机构 北京力量专利代理事务所 (特殊普通 合伙) 11504 专利代理师 毛婷 (51)Int.Cl. C12Q 1/6888(2018.01) C12N 15/11(2006.01) C12Q 1/686(2018.01) (54)发明名称 一种用于鉴定高山美利奴羊断奶重的SNP标 记及其应用 (57)摘要 本发明属于分子遗传学技术领域， 具体涉及 一种用于鉴定高山美利奴羊断奶重的SNP标记及 其应用， 所述的SNP分子标记位于国际绵羊参考 基因组Oar _v4.0版本第23号染色体 上第3566034 个核苷酸位点C/T 突变。 本发明还涉及利用PCR技 术检测上述SNP分子标记的特异性引物对和含有 该引物对的试剂盒及核苷酸多态 性检测方法， 与 传统检测法相比， 该技术具有准确性高， 检测速 度快， 成本低， 结果容易判断等优点。 将SNP位点 检测用于开展高山美利奴羊断奶重早期选择， 缩 短培育周 期、 加快培育进程， 建立一种高山美利 奴羊断奶重早期选择技术， 减少高山美利奴羊断 奶重优良性状的育种时间， 降低育种成本， 具有 很高的应用价 值。 权利要求书1页 说明书5页 序列表1页 附图1页 CN 114657265 A 2022.06.24 CN 114657265 A 1.一种检测与高山美利奴羊断奶重相关的SNP分子标记的试剂在检测高山美利奴羊断 奶重中的应用， 其特征在于， 所述SNP分子标记 位于国际绵羊基因组Oar_v4.0版本23号染色 体上第3566034位点的碱基处； 突变碱基为C或T。 2.一种检测与高山美利奴羊断奶重相关的SNP分子标记的试剂在高山美利奴羊育种中 的应用， 其特征在于， 所述SNP分子标记 位于国际绵羊基因组Oar_v4.0版本23号 染色体上第 3566034位点的碱基处； 突变碱基为C或T。 3.如权利 要求1或2所述的应用， 其特征在于， 所述SNP 分子标记碱基为C时， 基因型为CC 或CT； 所述SNP分子标记碱基为T时， 基因型为TT； 所述基因型CC或CT的高山美利奴羊断奶重 显著大于基因型T T。 4.如权利要求3所述的应用， 其特征在于， 所述试剂包括用于扩增含有所述SNP分子标 记的核苷酸序列的引物对。 5.如权利要求4所述的应用， 其特征在于， 所述含有SNP分子标记的核苷酸序列如SEQ   ID NO.1所示， 所述的SNP分子标记位于第20 5位。 6.一种用于扩增如权利要求4所述的含有SNP分子标记的核苷酸序列的特异性引物对， 其特征在于， 所述的引物对序列为： F： 5'‑GTTGGAGGCACAAATTTTGCAT‑3'； R： 5'‑GCCAGAACTCCCGAAACCTG‑3'。 7.如权利要求6所述的特异性引物对在用于检测高山美利奴羊断奶重， 或用于高山美 利奴羊育种中的应用。 8.如权利要求7所述的应用， 其特征在于， 实现检测高山美利奴羊断奶重， 或高山美利 奴羊育种的方法包括： (1)提取高山美利奴羊血 液基因组DNA为模板DNA； (2)利用特异性引物对， 将步骤(1)获得的待测高山美利奴羊血液的基因组DNA进行PCR 扩增， 获得PCR扩增产物； (3)将步骤(2)获得的PCR扩增产物纯化， 进行基因分型检测， 所述SNP分子标记碱基为C 时， 基因型为CC或CT； 所述SNP分子标记碱基为T时， 基因型为TT； 所述基因型CC或CT的高山 美利奴羊断奶重 显著大于基因型T T。 9.如权利要求8所述的应用， 其特征在于， 所述PCR扩增体系 25 μL： 预混液22 μL， 上、 下游 引物各1 μL， 模板DNA  1 μL。 10.如权利要求8所述的应用， 其特征在于， 所述PCR扩增程序： 98℃2min； 98℃10s， 60℃ 10s， 72℃10s， 共40个 循环； 72℃延伸2mi n。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114657265 A 2一种用于鉴定高 山美利奴羊断奶重的SNP标记及其应用 技术领域 [0001]本发明属于分子遗传学技术领域， 具体涉及一种用于鉴定高山美利奴羊断奶重的 SNP标记及其应用。 背景技术 [0002]对于种畜而 言， 繁殖力就是生产力， 繁殖性能直接关系到畜牧产业的经济效应。 羊 的繁殖性能主要包括总 产羔数、 产活羔数、 初生重、 初生窝重、 断奶重等指标。 羊出生时的体 重即羊初生重， 是衡量羊的一个重要数量性状， 影响羊的生长发育、 生产性能和胴体等级 等。 初生重与断奶 成活率、 断奶重、 出栏重也呈正相关， 与出栏日龄呈负相关。 而且初生重低 的羊， 大多生长发育不良。 因此有针对性的提高羊初生重， 可使 得羊有更高的成活率和更优 良的生产性能， 进 而为生产者带来更 大的经济效益。 [0003]断奶重是衡量羊生产性能的重要指 标， 出生羊断奶重和其出栏日龄以及日增重显 著相关， 随着断奶重的增加， 日增重增加、 出栏日龄下降。 而且断奶重是一个复杂的数量性 状， 由多基因共同调控， 且受到品种、 胎次、 营养及环 境等诸多因素的影响。 传统的育种方法 多采用传统表型选育技术， 即根据后代表型信息推断亲本生产力， 选育周期 长， 遗传进展缓 慢。 采用分子标记辅助选择进 行选育， 其优势在于不易受其他外界环境等因素的影响， 可缩 短育种时间， 提高选育的准确性。 SNP是1996年由美国麻省理工学院的人类基因组研究中心 学者Lander提出的一类分子遗传标记， 主要是指基因组水平上由单个核苷 酸的变异所引起 的DNA序列多态性。 SNP表现出的多态性仅涉及到单个碱基的变异， 表现是有转换、 颠换、 插 入和缺失等。 SNP分子标记具有遗传稳定、 突变率低、 便于自动化检测等优点。 因此， 寻找与 产羔性状紧密连锁的分子辅助标记基因， 筛选调控产羔性状的功 能基因， 是实现现代分子 育种技术与常规育种技 术有机结合， 提高繁殖效率的有益手段。 [0004]本发明发现了一种影响高山美利奴羊断奶重性状 的SNP分子标记， 国际绵羊基因 组Oar_v4.0版本第23号染色体上第3566034位点的碱基处， 突变碱基为C或T； 所述SNP分子 标记碱基为C时， 基因型为CC或CT； 当所述SNP分子标记碱基为T时， 基因型为TT； 所述基因型 CC和基因型CT的高山美利奴羊断奶重显著大于TT基因型(p<0.05)， CC和CT基因型个体间并 未表现出显著差异(p>0.05)。 本发明提供的利用PCR技术检测与高山美利奴羊断奶重相关 的核苷酸多态性的方法， 该技术准确性高， 检测速度快， 成本低廉， 并且 结果判读更容易。 利 用本方法可对断奶重相关的SNP位点多态性实现自动化检测， 通过对高山美利奴羊断奶重 性状相关 的SNP位点进行检测， 可用于育种 早期选留， 将CC和 CT基因型个体保留下来， 提高 高山美利奴 羊选育准确性， 在 对高山美利奴 羊进行大规模分子精准育种中具有潜在的应用 价值。 发明内容 [0005]本发明提供了一种影响 高山美利奴羊断奶重的S NP分子标记， 并通过检测所述SNP 分子标记碱基类型， 实现高山美利奴 羊断奶重的基因分型， 所述SNP分子标记碱基为C时， 基说　明　书 1/5 页 3 CN 114657265 A 3