(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210376453.9 (22)申请日 2022.04.12 (71)申请人 斯贝福 （北京） 生物技 术有限公司 地址 102100 北京市延庆区八达岭镇西康 路23号1幢1层101 （中关村延庆园） (72)发明人 王妍　陈红　张晓晴　谢飞　 (51)Int.Cl. C12Q 1/6888(2018.01) C12Q 1/686(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种引物序列、 鉴定小鼠品种的方法及其应 用 (57)摘要 本申请涉及 小鼠品种鉴定的技术领域， 具体 公开了一种引物序列、 鉴定小鼠品种的方法及其 应用。 所述引物序列包括内引物与外引物， 并由 内引物、 外引物组合而成的两种引物组合； 所述 鉴定小鼠品种的方法包括提取小鼠基因组DNA、 利用上述引物组合对小鼠基因组DNA进行PCR扩 增、 对PCR扩增产物进行电泳检测与鉴定； 以及上 述引物序列及鉴定小鼠品种的方法在鉴定封闭 群KM小鼠和ICR小鼠中的应用。 本申请提供的引 物序列及鉴定小鼠品种的方法可以快速、 准确地 鉴定封闭群KM小鼠和ICR小鼠。 权利要求书1页 说明书8页 序列表1页 附图1页 CN 114457173 A 2022.05.10 CN 114457173 A 1.一种引物序列， 其特 征在于， 包括上游引物FI ‑F与下游引物FI ‑R； FI‑F： 5’ ‑TGTGAGTG GCACTCAGTCACTGTGCT ‑3’； FI‑R： 5’ ‑CAAAAGAAAGAAGGAAACCTAGAGAG GAAG‑3’。 2.根据权利要求1所述的引物序列， 其特 征在于， 所述引物序列还 包括外引物。 3.根据权利要求2所述的引物序列， 其特征在于， 所述外引物包括上游引物与 下游引物 FO‑R； 所述上游引物选自FO ‑1F或FO‑2F； FO‑1F： 5’ ‑ACTGTAATAGCCGGAATGGGAAAAGAAT‑3’； FO‑2F： 5’ ‑TTCTCTAATGCCAGAGAAGGAGAATTGC‑3’； FO‑R： 5’ ‑ATCTGCTCT TCTCCATCATTTGAAATGA‑3’。 4.一种鉴定小鼠品种的方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： （1） 提取小鼠基因 组DNA； （2） 以步骤 （1） 获得的小鼠基因组DNA为模板， 利用权利要求3所述的引物序列对小鼠 SNP位点及上下游核苷酸序列片段进行PCR扩增， 获得SNP相关序列扩增产物； （3） 对步骤 （2） 获得的SNP相关序列扩增产物进行电泳检测与鉴定 。 5.如权利要求4所述的鉴定小鼠品种的方法， 其特征在于， 所述小鼠SNP位点及上下游 核苷酸序列片段如SEQ  ID NO.1所示。 6.根据权利 要求5所述的鉴定小鼠品种的方法， 其特征在于， 所述SNP位点位于所述SEQ   ID NO.1的第181位。 7.根据权利要求4所述的鉴定小鼠品种的方法， 其特征在于， 所述PCR扩增反应的体系 为20 μL， 包括2 ×Rapid Taq Master Mix： 10 μL； 每条引物： 1 μL； 小鼠基因组DNA： 1 μL； ddH2O： 5 μL。 8.如权利要求1 ‑3中任一项所述的引物序列、 权利要求4 ‑7中任一项所述的鉴定小鼠品 种的方法在鉴定 封闭群小鼠中的应用。 9.如权利要求1 ‑3中任一项所述的引物序列、 权利要求4 ‑7中任一项所述的鉴定小鼠品 种的方法在鉴定KM小鼠和ICR小鼠中的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114457173 A 2一种引物序列、 鉴定小鼠品种的方 法及其应用 技术领域 [0001]本申请涉及小鼠品种鉴定 的技术领域， 具体涉及一种引 物序列、 鉴定小鼠品种的 方法及其应用。 背景技术 [0002]21世纪是生命科学的世纪， 近年来国内外对于生命科学的研究愈加重视。 实验动 物作为科学与产品质量检验必不可少的资源条件， 对生命科学的研究发挥着重要的推动作 用， 而实验动物质量的高低直接影响实验结果的可靠性和准确性。 [0003]封闭群小鼠具有较强的繁殖力与生命力， 是目前生命科学研究中使用最多、 用途 最广的实验动物。 然而封闭群小鼠存在两个问题： 一是遗传检测复杂， 且我国实验动物国家 标准中对于封闭群小鼠的检测方法与标准还不够完善， 这严重影响小鼠的应用与实验结果 的判定； 二是封闭群小鼠的生产单位长期封闭繁殖， 导致群体间遗传与 表型分离， 使得实验 结果的一致性与可比性差。 尤其是封闭群KM小鼠和ICR小鼠， 这两种小鼠外表极其相 似， 且 基因杂合 率高， 所以两者区分判定极其困难。 [0004]目前用于封闭群KM小鼠和ICR小鼠的鉴定常用的方法是设计探针或荧光引物， 然 而该方法鉴定时间长， 操作方法复杂， 成本大。 因此， 急需提供一种可以准确、 快速区分小鼠 的品种， 且成本较低的鉴定方法。 发明内容 [0005]为了准确、 快速区分KM小鼠和ICR小鼠， 同时降低鉴定成本， 本申请提供一种引物 序列、 鉴定小鼠品种的方法及其应用。 [0006]第一方面， 本申请提供一种引物序列， 采用如下的技 术方案： 一种引物序列， 包括上游引物FI ‑F与下游引物FI ‑R； FI‑F： 5’ ‑TGTGAGTG GCACTCAGTCACTGTGCT ‑3’； FI‑R： 5’ ‑CAAAAGAAAGAAGGAAACCTAGAGAG GAAG‑3’。 [0007]本申请提供了一种引 物序列， 由上述上游引 物与下游引 物组成的引 物对， 利用上 述引物对和外引物对相结合能够对小鼠基因组DNA片段进行快速扩增与复制、 并基于根据 小鼠基因表型不同的SNP位 点来快速鉴定小鼠的品种。 [0008]单核苷酸多态性 （SNP） 主要是指在基因组水平上由单个核苷酸的变异所引起的 DNA序列多态性。 由于KM小鼠和ICR小鼠的rs3089604位点的核苷 酸类型不一致， 因此截 取了 上述SNP位点上下游的核苷 酸序列片段 （如SEQ  ID NO.1所示） ， 并根据该片段设计出了可以 用于鉴定KM小鼠和ICR小鼠品种的引物序列。 [0009]优选的， 所述引物序列还 包括外引物。 [0010]进一步优选的， 所述外引物包括上游引物与下游引物FO ‑R； 所述上游引物选自FO ‑ 1F或FO‑2F； FO‑1F： 5’ ‑ACTGTAATAGCCGGAATGGGAAAAGAAT‑3’；说　明　书 1/8 页 3 CN 114457173 A 3