(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210382984.9 (22)申请日 2022.04.12 (71)申请人 广州医科 大学 地址 510000 广东省广州市番禺区新造镇 广州医科 大学番禺校区 (72)发明人 戚德峰　 (74)专利代理 机构 广州三环 专利商标代理有限 公司 44202 专利代理师 费雯 (51)Int.Cl. C12N 15/113(2010.01) C12Q 1/6886(2018.01) C12N 15/11(2006.01) A61K 45/00(2006.01) A61P 35/00(2006.01) (54)发明名称 环状RNA circLMBR1及其表达产物在制备诊 断和治疗膀胱癌药物中的应用 (57)摘要 本发明涉及生物医药技术领域， 具体公开了 一种环状RNA  circLMBR1及其表 达产物在制备诊 断和治疗膀胱癌药物中的应用。 所述环状RNA   circLMBR1的核苷酸序列如SEQ  ID NO:1所示。 本 发明通过检测环 状RNA circLMBR1基因在膀胱癌 样 本 中 的 表 达 差 异 ， 结 果 显 示 环 状 R N A   circLMBR1基因在膀 胱癌组织中的表 达水平明显 低于癌旁 组织中的表达水平。 并且通过慢病毒介 导的方法构建过表 达circLMBR1基因的稳定细胞 株， 过表达环状RNA  circLMBR1基因的膀胱癌细 胞株与对照膀胱癌细胞株相比， 其增殖速度显著 降低。 权利要求书1页 说明书8页 序列表6页 附图3页 CN 114774416 A 2022.07.22 CN 114774416 A 1.环状RNA  circLMBR1及其表达产物在制 备诊断和治疗膀胱癌药物中的应用， 所述环 状RNA circLMBR 1的核苷酸序列如SEQ  ID NO:1所示。 2.如权利要求1所述的应用， 其特征在于， 所述环状RNA  circLMBR1的成熟体序列如 SEQID NO:2所示。 3.环状RNA  circLMBR1及其表达产物在制 备膀胱癌临床诊断的芯片、 试剂或试剂盒中 的应用， 所述环状RNA  circLMBR 1的核苷酸序列如SEQ  ID NO:1所示。 4.检测环状RNA  circLMBR 1的试剂在制备膀胱癌临床诊断的芯片或试剂盒中的应用。 5.如权利要求4所述的应用， 其特征在于， 所述试剂包括扩增环状RNA  circLMBR1的特 异性引物， 所述特异性引物包括如SEQ  ID NO:3和SEQ  ID NO:4所示的DNA序列组成的引物 对或如SEQ  ID NO:5和SEQ  ID NO:6所示的DNA序列组成的引物对。 6.环状RNA  circLMBR1基因激活剂在制 备诊断和治疗膀胱癌药物中的应用， 所述环状 RNA circLMBR 1的核苷酸序列如SEQ  ID NO:1所示。 7.一种治疗膀胱癌的药物组合物， 其特征在于， 所述药物组合物包括环状RNA   circLMBR 1基因激活剂。 8.如权利要求7所述的药物组合物， 其特征在于， 所述药物组合物还包括药物上可接受 的载体。 9.一种膀胱癌诊断的试剂盒， 其特征在于， 所述试剂盒包括扩增环状RNA  circLMBR1的 特异性引物， 所述特异性引物包括如SEQ  ID NO:3和SEQ  ID NO:4所示的DNA序列组成的引 物对或如SEQ  ID NO:5和SEQ  ID NO:6所示的DNA序列组成的引物对。 10.一种稳定细胞系， 其特征在于， 所述稳定细胞系过表达环状RNA  circLMBR1及其表 达产物， 所述环状RNA  circLMBR 1的核苷酸序列如SEQ  ID NO:1所示。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114774416 A 2环状RNA circLMBR1及其表达产物在制备诊断和治疗膀胱癌 药物中的应用 技术领域 [0001]本发明涉及生物医药技术领域， 尤其是涉及一种环状RNA  circLMBR1及其表达产 物在制备诊断和治疗膀胱癌药物中的应用。 背景技术 [0002]膀胱癌(Bladder  Cancer， BC)是泌尿系统最常见的恶性肿 瘤之一。 根据对2018年 全球新发癌症的病例统计， 膀胱癌的发病率居人类所有恶性肿瘤发病率的第 12位， 死亡率 居第14位。 故深入研究膀胱癌发生和发展中的分子机制、 开发新的诊断标志物和治疗靶点 是当前膀胱癌研究的热点和重点。 [0003]目前对膀胱癌的发病原因和进展机制所知甚少， 除了常见的流行病学和遗传学因 素， 许多错综复杂的分子事件是导致肿瘤细胞形成、 进展和转移的深层次原因。 环状RNA (circRNA)是一种新 兴的内源性ncRNA， 是继微小RNA(microRNA， miRNA)以及长链非编码RNA (long noncoding  RNA,lncRNA)后ncRNA家族中极具研究潜力的成员。 最近的研究表明， circRNA在细胞的恶性转化过程中起到非常重要的作用。 因此， circRNA在新型疾病诊断与 治疗方法的开发应用上 具有广阔的前 景。 发明内容 [0004]本发明的目的在 于克服上述现有技术的不足之处而提供一种环状 RNA circLMBR1 及其表达产物在制备诊断和治疗膀胱癌药物 中的应用。 环状RNA  circLMBR1及其表达产物 在膀胱癌组织中表达显著下降， 因此， 环状RNA  circLMBR1及其表达产物可作为膀胱癌的诊 断标志物。 [0005]为实现上述目的， 本发明采取的技 术方案为： [0006]第一目的， 本发明提供了一种环状RNA  circLMBR1及其表达产物在制备诊断和治 疗膀胱癌药物中的应用， 所述环状RNA  circLMBR 1的核苷酸序列如SEQ  ID NO:1所示。 [0007]LMBR1(limb  development  membrane  protein 1)基因位于7号染色体的长臂上， 其mRNA的大小约5kb， 该基因编码LMBR1样膜蛋白家族的成员， 其蛋白质家族的另一成员是 脂质运载蛋白跨膜受体。 CircLMBR1是来源于LMBR1的circRNA， 由6个外显子剪切拼接而来， 长度为578nt。 [0008]所述环状RNA  circLMBR1的结构是由如SEQ  ID NO:1所示的核苷酸序列转录后经 剪接形成的首尾相连的环状RNA结构。 [0009]本发明通过采用荧光定量PCR的方法检测膀胱癌病人中circLMBR1基因表达情况， 发现circLMBR1基因在 膀胱癌组织中的表达水平明显低于癌旁 组织中的表达水平， 因此， 环 状RNA circLMBR1及其表达产物可作为膀胱癌的诊断标志， 故可制作检测该基因表达变化 的试剂盒以用于诊断膀胱癌。 [0010]作为本发明所述应用的优选实施方式， 所述环状RNA  circLMBR1的成熟体序列如说　明　书 1/8 页 3 CN 114774416 A 3