(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210365827.7 (22)申请日 2022.04.08 (71)申请人 昆明理工大 学 地址 650093 云南省昆明市呈贡区景明南 路757号 申请人 云南农业大 学 (72)发明人 文锦芬　邓明华　赵凯　吕俊恒　 张宏　杨正安　朱海山　韩曙　 (74)专利代理 机构 北京高沃 律师事务所 1 1569 专利代理师 张梦泽 (51)Int.Cl. A01H 1/04(2006.01) A01H 1/02(2006.01) A01H 1/08(2006.01) A01H 6/82(2018.01)C12Q 1/6895(2018.01) C12Q 1/6858(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种基于分子标记辅助选择和倍性育种相 结合的辣椒多基因聚合种质的培 育方法 (57)摘要 本发明属于植物育种技术领域， 具体涉及一 种基于分子标记辅助选择和倍性育种相结合的 辣椒多基因聚合种质的培育方法。 以携带目标优 异基因的辣椒种质为亲本杂交， 于所述杂交一代 植株盛花期分离小孢子， 进行小孢子培育得到单 倍体植株， 筛选得到优异基因聚合的辣椒单株后 对植株进行染色体加倍， 在较短的时间内可将多 个优良基因聚合在一起， 获得基因纯合的植株， 得到多基因聚合的优良辣椒种质。 同时， 采用本 发明中的培育方法， 可显著缩短育种时间， 提高 育种效率， 与传统的育种时间(5年以上)相比， 本 发明获得基因纯合植株只需2.5年， 极大缩短了 育种时间。 权利要求书1页 说明书8页 序列表2页 附图1页 CN 114885830 A 2022.08.12 CN 114885830 A 1.一种基于分子标记辅助选择和倍性育种相结合的辣椒多基因聚合种质的培育方法， 其特征在于， 包括如下步骤： 1)将包括优异基因的辣椒亲本 两两杂交， 得到杂交一代种子； 2)将所述杂交一代种子播种， 得到杂交一代植株； 3)于所述杂交一代植株盛花期分离小孢子， 进行小孢子培育， 得到辣椒单倍体植株， 经 筛选， 得到优异基因聚合的辣椒单株； 4)对所述优异基因聚合的辣椒单株进行染色体加倍， 获得优异基因聚合的辣椒二倍体 植株； 5)将所述优异基因聚合的辣椒二倍体植株经生根培养和种植管理， 得到辣椒多基因聚 合种质； 所述步骤1)中的辣椒亲本均至少包括 一个优异基因。 2.根据权利要求1所述的培育方法， 其特征在于， 所述步骤1)中的辣椒亲本均为辣椒自 交系品种。 3.根据权利要求1所述的培育方法， 其特征在于， 当所述步骤1)中为两个包括优异基因 的辣椒亲本杂交时， 两个辣椒亲本分别为 抗根结线虫黄果 辣味辣椒和红果无辣味辣椒 。 4.根据权利要求3所述的培 育方法， 其特 征在于， 所述杂交为 正反交。 5.根据权利要求3所述的培育方法， 其特征在于， 所述步骤4)中的筛选包括分子标记辅 助筛选； 所述优异基因的分子标记包括抗根结线虫Me基因、 无辣 味at3基因和 黄果ccs基因 的分子标记。 6.根据权利要求5所述的培育方法， 其特征在于， 所述抗根结线虫Me基因分子标记的检 测引物为Me‑1， 所述Me ‑1的正向引物序列如SEQ  ID No.1所示， 所述Me ‑1的反向引物序列如 SEQ ID No.2所示； 所述无辣味at3基因分子标记的检测引物为at3 ‑2， 所述at3 ‑2的正向引物序列如SEQ   ID No.3所示， 所述at3 ‑2的反向引物序列如SEQ  ID No.4所示； 所述黄果ccs基因分子标记的检测引物为ccs ‑3， 所述ccs ‑3的正向引物序列如SEQ  ID  No.5所示， 所述c cs‑3的反向引物序列如SEQ  ID No.6所示。 7.根据权利要求1～6任一项所述的培育方法， 其特征在于， 所述步骤5)中得到的辣椒 多基因聚合种质为 抗根结线虫黄果无辣味辣椒 。 8.根据权利要求1～6任一项所述的培育方法， 其特征在于， 所述步骤3)中的小孢子为 单核靠边期的小孢子 。 9.根据权利要求1～6任一项所述的培育方法， 其特征在于， 所述步骤3)中小孢子培育 的培养基以NTh为基础培养基， 添加0.5mg/LKT、 0.25mg/L  2,4‑D、 4mg/LAgNO3、 0.2wt.％AC、 3wt.％蔗糖、 0.7wt.％琼脂， pH值 为5.8。 10.根据权利要求1～6任一项所述的培育方法， 其特征在于， 所述步骤4)中染色体加倍 的方法包括： 以质量浓度为0.45％的秋水仙素包裹所述辣椒单株的茎尖30h， 获得所述优异 基因聚合的辣椒二 倍体植株。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114885830 A 2一种基于分子标记辅助选择和倍性育种相结 合的辣椒多基因 聚合种质的培育方 法 技术领域 [0001]本发明属于植物育种技术领域， 具体涉及 一种基于分子标记辅助 选择和倍性育种 相结合的辣椒多基因聚合种质的培 育方法。 背景技术 [0002]甜椒， 茄科辣椒属， 能结甜味浆果的一个亚种， 一年生或多年生草本植物， 辣椒中 的一种。 甜椒由原产中南美洲热带地区的辣椒在北美演化而来， 经过长期栽培和人工选择， 使果实发生体积增大， 果肉变厚， 辣味消失和心皮及子房腔数增多等性状变化。 同时， 因其 果肉厚而脆嫩， 生食与烹制的营养成分 几乎相同， 富含类胡 萝卜素而在国际市场上的畅销， 价格较高。 [0003]在辣椒的育种过程中通常需要获得具有多个优良性状的辣椒品种或自交系， 然 而， 由于辣椒不同的优良基因通常处于不同染色体上 的不同位置， 如抗根结线虫基因和无 辣味基因。 因而， 若想创制包括多个优良基因的辣椒种质并不容易， 且采用常规育种方式耗 时较长， 难以解决在较短时间内获得辣椒优异品种的技 术问题。 [0004]再者， 我国辣椒尤其是黄色甜椒 的育种才刚刚起步， 育成的品种还很少， 比如， 抗 根结线虫的黄色甜椒(无辣味)育种材料(品系)还十 分稀有， 不能满足市场对抗根结线 虫黄 色甜椒品种的需求， 为缓解抗根结线虫黄色甜椒的生产用 种， 每年需向国外引进大量的抗 根结线虫黄色甜椒种子。 但进口种子价格昂贵， 推高了生产成本； 进口种子受制 于人， 容易 造成“卡脖子”现象， 影响甜椒产业的健康发展； 此外还存在未知病虫害输入的风险。 因此极 需要加强优异育种材 料(品系)的创制， 以满足社会的需求。 发明内容 [0005]本发明的目的在于提供一种基于分子标记辅助选择和倍性育种相结合的辣椒多 基因聚合种质的培育方法， 采用本发明中的培育方法可在较短时间内获得多基因聚合的辣 椒种质， 提高育种效率。 [0006]本发明提供了一种基于分子标记辅助选择和倍性育种相结合的辣椒多基因聚合 种质的培 育方法， 包括如下步骤： [0007]1)将包括优异基因的辣椒亲本 两两杂交， 得到杂交一代种子； [0008]2)将所述杂交一代种子播种， 得到杂交一代植株； [0009]3)于所述杂交一代植株盛花期分离小孢子， 进行小孢子培育， 得到辣椒单倍体植 株， 经筛选， 得到优异基因聚合的辣椒单株； [0010]4)对所述优异基因聚合的辣椒单株进行染色体加倍， 获得优异基因聚合的辣椒二 倍体植株； [0011]5)将所述优异基因聚合的辣椒二倍体植株经生根培养和种植管理， 得到辣椒多基 因聚合种质；说　明　书 1/8 页 3 CN 114885830 A 3