(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210361999.7 (22)申请日 2022.04.07 (71)申请人 领航基因科技 （杭州） 有限公司 地址 310000 浙江省杭州市萧 山区南阳街 道横蓬园区红山工业区 (72)发明人 夏江　高学娟　 (74)专利代理 机构 杭州汇和信专利代理有限公 司 33475 专利代理师 薛文玲 (51)Int.Cl. C12Q 1/6895(2018.01) C12Q 1/6851(2018.01) C12N 15/11(2006.01) C12R 1/72(2006.01) (54)发明名称 检测角膜假丝酵母和挪威假丝酵母的引物 探针及其应用 (57)摘要 本发明提供一种检测角膜假丝酵母和挪威 假丝酵母的引物探针及其应用， 提供了针对检测 角膜假丝酵母和挪威假丝酵母的引物探针， 且这 些引物探针针对角膜假丝酵母和挪威假丝酵母 的ITS的特异性区域 设计， 可结合数字PCR技术快 速实现角膜假丝酵母和挪威假丝酵母的快速检 测。 权利要求书1页 说明书8页 序列表2页 CN 114908181 A 2022.08.16 CN 114908181 A 1.检测角膜假丝酵母的引物探针， 其特征在于， 包括： SEQ  ID NO 1～2所示的核苷酸序 列的引物和SEQ  ID NO:3所示核苷酸序列的探针。 2.根据权利要求1所述的检测角膜假丝酵母的引物探针， 其特征在于， SEQ  IDNO： 3所示 的探针的5 ’端标记有荧 光报告基团FAM， 3端标记有荧 光淬灭基团MGB。 3.检测挪威假丝酵母的引物探针， 其特征在于， 包括： SEQ  ID NO 4～5所示的核苷酸序 列的引物和SEQ  ID NO:6所示核苷酸序列的探针。 4.检测根据权利 要求3所述的检测挪威假丝酵母的引物探针， 其特征在于， SEQID  NO： 6 所示的探针的5 ’端标记有荧 光报告基团ROX， 3端标记有荧 光淬灭基团MGB。 5.检测角膜假丝酵母、 挪威假丝酵母的试剂 盒， 其特征在于， 包括权利要求1到4中至少 两种菌属所述的引物探针。 6.根据权利要求5所述的检测角膜假丝酵母、 挪威假丝酵母的试剂盒， 其特征在于， 包 括检测外源内参的引物和探针； 所述检测外源内参的引物， 其核苷酸序列如SEQ  ID NO:10～1 1所示； 所述检测外源内参的探针， 核苷酸序列如SEQ  ID NO:12所示。 7.根据权利要求5所述的检测角膜假丝酵母、 挪威假丝酵母的试剂盒， 其特征在于， 引 物探针针对角膜假丝酵母、 挪威 假丝酵母每种菌种的核糖 体基因群的ITS区设计。 8.一种检测检测角膜假丝酵母、 挪威假丝酵母的方法， 其特征在于， 以待测样品的DNA 为模板， 采用引物组包括如上所述SEQ  ID NO 1～2， SEQ  ID NO 4～5， 探针组包括如上所述 SEQ ID NO 3， SEQ ID NO 6的引物探针组进行扩增， 若SEQ  ID NO 1～2,SEQ  ID NO 3可以 实现对待测样本的DNA的特定性扩增， 则待测样品中含有角膜假丝酵母； 若SEQ  ID NO 4～ 5,SEQ ID NO 6可以实现对待测样本的DNA 的特定性扩增， 则待测样品中含有挪威假丝酵 母。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114908181 A 2检测角膜假丝酵母和挪威假丝酵母的引物探针及其应用 技术领域 [0001]本发明涉及 生物检测领域， 特别涉及一种检测角膜假丝酵母和挪威假丝酵母的引 物探针及其应用。 背景技术 [0002]假丝酵母菌， 亦称念珠菌， (Candida)拉丁文名:Nostoc可侵犯皮肤、 粘膜和内脏， 表现为急性、 亚急性或慢性炎症， 大多为 继发性感染， 角膜 假丝酵母菌和挪威假丝酵母菌都 属于假丝酵母类。 [0003]其中角膜假丝酵母菌是引起侵袭性真菌感染的罕见病原体。 近些年国内外关于此 菌的报道多集中在新生儿重症监护室和机体免疫力低下者， 有研究结果显示， 角膜假丝酵 母菌的感染能导致低体质量新生儿发生颅内脑室炎， 以及静脉注射毒品滥用者发生心内膜 炎。 目前主要针对假丝酵母菌的检测方法为涂片染色后镜检， 具体的手段为： 将待测标本置 于血平培养基上孵育， 再挑选菌落涂片， 若革兰染色为阳性则表明有角膜假丝酵母菌， 但 这 种方式需要严格的孵 育条件且灵敏性差， 很难和其 他酵母菌进行有效的区分鉴定 。 [0004]目前未见关于角膜假丝酵母菌和挪威假丝酵母菌的ddPCR检测技术的研究， 若能 利用ddPCR检测角膜假丝酵母菌和挪威 假丝酵母菌， 将极大程度地 提高临床应用价 值。 发明内容 [0005]本发明的目的在于提供一种检测角膜假丝酵母和挪威假丝酵母的引物探针及其 应用， 提供了针对检测角膜假丝酵母和挪威假丝酵母的引物探针， 这些引物探针结合数字 PCR技术快速实现角膜假丝酵母和挪威 假丝酵母的快速检测。 [0006]第一方面， 本方案提供了一种角膜假丝酵母的引物探针， 包括： SEQ  ID NO 1～2所 示的核苷酸序列的引物和SEQ  ID NO:3所示核苷酸序列的探针。 [0007]其中SEQ ID NO： 1所示的正向引物为： TG GTTCTCGCAACGATGAAG； [0008]SEQ ID NO： 2所示的反向引物为： TCACGA AAATCTGCAATTCACAA； [0009]SEQ ID NO： 3所示的探针为： CAGCGA AATGCGATACG。 [0010]针对角膜假丝酵母的保守区域WICK ‑STD设计， 保守区域的长度为： 178bp， 具体序 列为: [0011]ACAACGGATCTCTTGGTTCTCGCAACGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATACGTATTGTGAAT  TGC AGATTTTCGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACATTGCACCCTCTGGTATTCCA GAGGGTATGC  CTGTTTGA GC GTCATTTCTCTCTCA AACCTTCNGGTTTGGTATTGAGTGATAC 。 [0012]SEQ ID NO： 3所示的探针的5 ’端标记有荧光报告基团FAM， 3端标记有荧光淬灭基 团MGB。 [0013]第二方面， 本方案提供了一种挪威假丝酵母菌的引物探针， 包括： SEQ  ID NO 4～5 所示的核苷酸序列的引物和SEQ  ID NO:6所示核苷酸序列的探针。 [0014]其中SEQ ID NO： 4所示的正向引物为： CGCGTGAGCGCACA AC；说　明　书 1/8 页 3 CN 114908181 A 3