(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210355840.4 (22)申请日 2022.04.06 (71)申请人 四川省亚中基因科技有限责任公司 地址 610000 四川省成 都市高新区天府国 际生物城 （双流区凤 凰路269号） (72)发明人 刘亚宝　储倩　姜茜　 (74)专利代理 机构 成都行之智 信知识产权代理 有限公司 5125 6 专利代理师 王伟 (51)Int.Cl. C12Q 1/6895(2018.01) C12Q 1/686(2018.01) C12Q 1/04(2006.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 检测真菌的引物组、 探针组、 试剂盒、 用途及 检测方法 (57)摘要 本发明实施例提供一种检测真菌的引物组、 探针组、 试剂盒、 用途及检测方法， 它包括： 用于 检测包括曲霉属真菌、 青霉属真菌和/或镰刀菌 属真菌的引 物对： 序列如SEQ  ID NO.1所示的正 向引物1和SEQ  ID NO.2所示的反向引 物1； 用于 检测包括念珠属真菌、 隐球菌属真菌、 新生隐球 菌属真菌、 酵母属真菌、 毛霉属真菌和/或地霉属 真菌的引物对： 序列如SEQ  IDNO.4所示的正向引 物2A； 序列如SEQ  ID NO.5所示的正向引物2B和 序列如SEQ  ID NO.6所示的反向引物2 。 可同时检 测包含念 珠属真菌、 青霉属真菌、 曲霉属真菌、 镰 刀菌属真菌、 新型隐球菌属真菌、 隐球菌属真菌、 酵母属真菌、 毛霉属真菌、 耶氏肺孢子菌等 真菌， 涵盖范围较现有技 术更广。 权利要求书2页 说明书11页 序列表3页 附图3页 CN 115011714 A 2022.09.06 CN 115011714 A 1.一种检测真菌的引物组， 其特 征在于， 它包括： 用于检测包括曲霉属真菌、 青霉属真菌和/或镰刀菌属真菌的引物对： 序列如SEQ  ID  NO.1所示的正向引物1和SEQ  ID NO.2所示的反向引物1； 用于检测包括念珠属真菌、 新生隐球菌属真菌、 隐球菌属真菌、 酵母属真菌、 毛霉属真 菌和/或地霉属真菌的引物对： 序列如SEQ  ID NO.4所示的正向引物2A； 序列如SEQ  ID NO.5 所示的正向引物 2B和序列如SEQ  ID NO.6所示的反向引物 2。 2.如权利要求1所述检测真菌的引物组， 其特 征在于， 它还 包括： 用于检测耶氏肺孢子菌的引物对： 序列如SEQ  ID NO.8所示的正向引物3和SEQ  ID  NO.9所示的反向引物3 。 3.一种与权利要求1所述引物组配合使用的探针组， 其特 征在于， 它包括： 用于检测包括曲霉属真菌、 青霉属真菌和/或镰刀菌属真菌的引物探针： 序列如SEQ  ID  NO.3所示的探针1； 用于检测包括念珠属真菌、 隐球菌属真菌、 新生 隐球菌属真菌、 酵母属真菌、 毛霉属真 菌和/或地霉属真菌的引物探针： 序列如SEQ  ID NO.7所示的探针2。 4.一种与权利要求2所述引物组配合使用的探针组， 其特 征在于， 它包括： 用于检测包括曲霉属真菌、 青霉属真菌和/或镰刀菌属真菌的引物探针： 序列如SEQ  ID  NO.3所示的探针1； 用于检测包括念珠属真菌、 隐球菌属真菌、 新生 隐球菌属真菌、 酵母属真菌、 毛霉属真 菌和/或地霉属真菌的引物探针： 序列如SEQ  ID NO.7所示的探针2； 用于检测耶氏肺 孢子菌的引物探针： 序列如SEQ  ID NO.10所示的探针3 。 5.一种检测真菌的试剂 盒， 其特征在于， 包括权利要求1或2所述引物 组和权利要求3或 4所述探针组。 6.如权利要求5所述检测真菌的试剂盒， 其特征在于， 它还包括： 用于内参基因检测的 引物对和引物探针。 7.如权利 要求6所述检测真菌的试剂盒， 其特征在于， 所述内参基因为ACTIN基因； 用于 内参基因检测的引物对为： 序列如SEQ  ID NO.11所示的ACTIN基因正向引物和序列如SEQ   ID NO.12所示的ACTIN基因反向引物； 用于内参基因检测的引物探针为： 序列如SEQ  ID  NO.13所示的探针。 8.如权利要求3 ‑4任意一项所述探针组或如权利要求5 ‑6任意一项所述试剂盒， 其特征 在于， 所述引物探针的5 ’端标记有荧 光报告基团， 3 ’端标记有荧 光淬灭基团； 所述荧光报告基团包括： 5 ‑FAM、 6‑FAM、 HEX、 TET、 VIC、 JOE、 Cy3、 Cy3.5、 NED、 TAM RA、 ROX、 Texas Red、 Cy5、 Cy5.5或Quasar670； 所述荧光淬灭基团包括： TAMRA、 BHQ1、 BHQ2、 BHQ3或 MGB。 9.权利要求1 ‑2任意一项所述引物组和/或权利要求3 ‑4任意一项所述探针组在检测真 菌的试剂盒中的用途。 10.一种真菌检测方法， 其特 征在于， 包括： 提取样本基因 组DNA作为扩增模板， 其中， 所述样本为痰液； 使用权利 要求8所述试剂盒， 在实时荧光定量PCR仪上对得到的DNA模板进行扩增， 同时 实时荧光信号采集和分析；权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115011714 A 2根据荧光信号采集和分析结果判断样本真菌感染情况， 实现对真菌的分型/不分型检 测。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115011714 A 3