(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210360353.7 (22)申请日 2022.04.06 (71)申请人 扬州大学 地址 225009 江苏省扬州市大 学南路88号 (72)发明人 叶怡　许学文　贺疏颖　陈学好　 袁颖　 (74)专利代理 机构 扬州苏中专利事务所(普通 合伙) 32222 专利代理师 许必元 (51)Int.Cl. C12Q 1/6895(2018.01) C12Q 1/6858(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 黄瓜成熟果皮颜色性状连锁的一个SNP标记 及其应用 (57)摘要 本发明涉及一种黄瓜成熟果皮颜色性状连 锁的一个SNP标记及其应 用， SNP标记是 yb637005， 位于黄瓜Gy14_V2参考基因组第4号染 色体637005bp处， yb637005处碱基为C的黄瓜成 熟果皮为黄棕色， yfSNP01处碱基为T的黄瓜成熟 果皮为白绿色。 一组用于检测权利要求1所述的 与黄瓜成熟果皮紧密连锁的一个SNP标记的 dCAPs引物对， 包括yb637005的正向引物5 ′ ‑ CCAATAAATTACCTGTTTCCAAGG ‑3′和yb637005的反 向引物5′ ‑TAACTATTTGAGAGCTGATTTGAAT ‑3′。 所 述的dCAPs引物对在黄瓜成熟果 皮颜色分子标记 辅助育种 中的应用。 通过本发明， 本发明利用基 因组学和群体遗传学筛选到与黄瓜成熟果皮颜 色紧密连锁的SNP标记， 通过测序转化为dCAPs标 记的方法鉴定黄瓜基因型， 且该标记 为共显性标 记， 可有效区分纯合体和杂合体， 加速黄瓜果皮 颜色分子育种进程。 权利要求书1页 说明书4页 序列表1页 附图2页 CN 114622033 A 2022.06.14 CN 114622033 A 1.与黄瓜成熟果皮颜色性状连锁的一个SNP标记， 其特征在于， SNP标记是yb637005， 位 于黄瓜Gy14_V2参考基因组第4号染色体637005bp处； yb637005处碱基为C的黄瓜成熟果皮 为黄棕色， 碱基为T的黄瓜成熟果皮为白绿色。 2.一组用于检测权利要求1所述的与黄瓜成熟果皮颜色性状连锁的一个SNP标记的 dCAPs引物对， 其特 征在于， 所述dCAPs引物对 包括： yb637005的正向引物5 ′ ‑CCAATAAATTACCTGTTTCCAAGG‑3′， yb637005的反向引物5 ′ ‑TAACTATTTGAGAGCTGAT TTGAAT‑3′。 3.权利要求2所述的dCAPs引物对在黄瓜成熟果皮颜色 分子标记辅助育种中的应用。 4.如权利要求3述的应用， 其特 征在于， 具体方法是： （1） 提取待检测黄瓜 基因组DNA； （2） 以待检测黄瓜 基因组DNA为模板， 利用dCAPs引物对， 进行PCR扩增； （3） 使用TaqI限制性内切酶对yb6 37005引物扩增的PCR产物进行酶切； （4） 将酶切后的产物进行 聚丙烯酰胺凝胶电泳检测， 如果条带与Pepino一致， 则为成熟 果皮为黄棕色； 如果条 带与Zaoer ‑N一致， 则成熟果皮为白绿色。 5.权利要求2所述的dCAPs引物对在克隆黄瓜成熟果皮颜色基因中的应用。 6.权利要求2所述的dCAPs引物对在选 育不同果皮颜色黄瓜新品种中的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114622033 A 2黄瓜成熟果皮颜色性状连锁的一 个SNP标记及其应用 技术领域 [0001]本发明涉及与黄瓜成熟果皮颜色性状连锁的一个SNP标记及其应用， 具体为与黄 瓜成熟果皮颜色性状连锁的一个SNP标记、 检测SNP标记的dCAPS引物对及其应用， 属于基因 工程及分子生物学 领域。 背景技术 [0002]黄瓜 （Cucumis sativus L. ） 为葫芦科甜瓜属一年生攀缘性草本植物， 起源于 温暖 湿润的喜马拉雅山南麓， 是我国广泛栽培的主要蔬菜作物。 随着人们生活水平的逐渐提高， 消费者对于黄瓜的外观品质多样性要求也越来越高。 果皮颜色作为黄瓜重要的外观品质性 状， 直接影响着消费者的选择。 [0003]黄瓜嫩果皮颜色主要为墨绿、 绿、 浅绿和乳白色。 孙小镭等 （2004年于 《园艺学报》 上发表的题为 “黄瓜嫩果皮色与色素含量的关系 ”文章） 通过对黄瓜果皮果色的颜色差异的 目测法进 行分类以及对果皮色素含量的测定发现叶绿素含量与黄瓜嫩果皮颜色密切相关。 黄瓜果实发育30~45天后进入成熟期， 果皮颜色主要呈现乳白色、 白色、 浅绿色、 绿色、 深绿 色、 黄色、 橙色以及红色等。 Hutchins （1940年于Journal  of Agricultural  Research上发 表的题为“Inheritance  in the cucumber ”文章） 最早将成熟果果皮分为红色、 橙色、 黄色 及奶油色四大类型， 并推测控制这些颜色形成的是两个显性等位基因 R（成熟瓜红色果皮） 与C（奶油色果皮基因） ， 当基因型为 R_Cc时成熟果皮为红色， R_cc时成熟果皮为橙色， rrC_ 时成熟果实为黄色， rrcc时成熟果实为奶油色。 Peterson和Pike （1992年于  Journal of  the American  Society for Horticultural  Science上发表的题为 “Inheritance  of  Green Mature Seed‑stage Fruit Color in Cucumis sativus L”文章） 的研究发现： 黄瓜 成熟果皮颜色由两个主效基因 R和Gn控制， 当基因型为 R_ _ _ _ _时成熟黄瓜果皮为红色， 当基因型为 rrgngn时为绿色， 当基因型为 rrGnGn时为奶油色， 当基因型为 rrGngn时果皮颜 色介于绿色与奶油色之间。 Li等 （2013年于Theoretical  and Applied Genetics上发表的 题为“Fine mapping of the pleiotropic  locus B for black spine and orange  mature fruit color in cucumber  identifies  a 50 kb region containing  a R2R3‑ MYB transcription  factor”文章） 认为单显性基因 B同时控制黄瓜黑刺与成熟果皮橙色两 个性状， 并将 B基因定位到了4号染色体上~50 kb区间内， 推测一个编码R2R3 ‑MYB的转录因 子为候选基因。 刘书 林等 （2014年于 《园艺学报》 上发表的题 为“成熟黄瓜果皮红色性状的遗 传分析及其基因定位 ”文章） 认为黄瓜成熟果皮红色性状由显性单基因 R控制， 红色对黄色 为显性， 并将 R基因定位到黄瓜4号染色体上~213.4kb区间内， 含有30个候选基因。 然而， 相 比于嫩果皮颜色、 果 肉胡萝卜素含量等果实品质性状， 有关黄瓜成熟果皮颜色性状的遗传 机制研究较为匮乏。 探明黄瓜成熟果果皮颜色形成的遗传机制、 基因效应是今后进行分子 遗传改良和育种利用的基础。说　明　书 1/4 页 3 CN 114622033 A 3