(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210342626.5 (22)申请日 2022.04.02 (71)申请人 南京农业大 学 地址 211225 江苏省南京市溧水区白马镇 国家农业科技园南京农业大 学基地 (72)发明人 陈杰　赵金迪　韦伟　张立凡　 (74)专利代理 机构 南京天华专利代理有限责任 公司 32218 专利代理师 徐冬涛　李晓峰 (51)Int.Cl. C12Q 1/6888(2018.01) C12Q 1/6858(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 DGAT1基因启动子区域变异位点及其在检测 猪肉肌内脂肪 含量上的应用 (57)摘要 本发明属于分子生物学领域， 公开了一种 DGAT1基因启动子区变异位点及其在检测猪肉肌 内脂肪含 量上的应用。 该SNP分子标记位于DGAT1 基因启动子区的转录起始密码子上游379bp处， 该位点碱基是C或T。 根据该突变位点的基因型确 定猪肉肌内脂肪含量情况。 本发 明在启动子区域 筛选了一个与肌内脂肪含量相关的SNP位点， 从 而获得了与肌内脂肪含量相关的功能基因和分 子遗传标记， 通过优选该SNP分子标记的优势等 位基因及对 该位点的快速检测， 能够为猪肉中肌 内脂肪含量调控相关的SNP分子标记辅助育种提 供参考依据， 同时对猪肉品质改良具有重要意 义。 权利要求书1页 说明书9页 序列表2页 附图2页 CN 114854868 A 2022.08.05 CN 114854868 A 1.一种用于检测猪肌内脂肪含量的SNP分子标记， 其特征在于： 该SNP分子标记位于 DGAT1基因启动子区的转录起始密码子上游379bp处， 该位 点碱基是C或T。 2.权利要求1所述的SNP分子标记在检测猪肉肌内脂肪含量中的应用， 其特征在于： 当 所述SNP分子标记的基因型为T T型或CT型时， 猪肉肌内脂肪含量高于 CC型基因型。 3.一种用于检测权利要求1所述SNP分子标记 的引物对， 其特征在于： 所述引物对的序 列分别为： DGAT1‑3F： 5’ ‑CCACAACGCACTAG GCATTTC‑3’ DGAT1‑3R： 5’ ‑GGGCACCACTACCTCAGATC C‑3’。 4.一种用于对权利要求1所述SNP分子标记的C/T突变位点进行基因分型的试剂盒， 其 特征在于， 该 试剂盒包 含权利要求3所述的引物对。 5.权利要求3 中所述的引物对， 或权利要求4中所述的试剂 盒在检测猪肉肌 内脂肪含量 中的应用， 其特征在于： 对所述SNP分子标记的C/T突变位点进行基因分型， 基因型为TT或CT 的猪肉样品的肌内脂肪含量高于基因型为C C的猪肉样品的肌内脂肪含量。 6.一种辅助选育猪高肌内脂肪性状遗传改良的方法， 其特征在于： 对权利要求1所述 SNP分子标记的C/T突变位点进行基因分型， 基因型为TT或CT的猪肉样品的肌内脂肪含量高 于基因型为C C的猪肉样品的肌内脂肪含量。 7.根据权利要求6所述的方法， 其特 征在于： 该 方法包括以下步骤： 1)提取待检测猪肉样品的DNA； 2)采用权利要求3所述的引物对或权利要求4所述的试剂盒对步骤1)获得的DNA进行 PCR扩增， 获得扩增片段； 3)通过PCR ‑RFLP‑PvuⅡ方法对扩增片段进行酶切分型， 不同基因型的酶切产物会呈现 不同的条带数： CC基因型为134bp和58 1bp两个条带， CT基因型为134bp、 58 1bp和715bp三个 条带， TT基因型为715bp一个条 带； 4)当分型结果为TT型或CT型时， 判断其猪肉样品的肌内脂肪含量高于CC型的猪肉样品 肌内脂肪含量。 8.根据权利要求7所述的方法， 其特征在于： 步骤2)中PCR扩增反应25μl体系： T3  mix  22 μl、 上下游引物各1μl、 待检测 DNA 1μl； PCR反应程序： 98℃， 3min； 98℃， 10s； 65℃， 10s退 火； 72℃， 10s； 34个 循环； 72℃， 3mi n。 9.根据权利要求7所述的方法， 其特征在于： 所述PCR ‑RFLP‑PvuⅡ方法的反应体系为： 待检测PCR扩增产物17 μl、 Pvu Ⅱ酶1 μl、 Tango  Buffer 2 μl； 反应条件为： 37℃， 1h 。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114854868 A 2DGAT1基因启动子区域变异位点 及其在检测猪肉肌内脂肪含 量上的应用 技术领域 [0001]本发明属于分子生物学领域， 涉及DGAT1基因启动子区变异位点及其在检测猪肉 肌内脂肪含量上的应用。 背景技术 [0002]我国是肉类生产和消费大国， 肉类总产量占世界总产量三分之一左右， 其中猪肉 占到一半以上。 近年来， 随着人们生活水平的不断提高， 对猪肉的需求逐渐由 “量”向“质”转 变， 即猪肉的品质问题成为人们日益关注的重点， 美味、 营养、 健康肉品已成为人们追求的 新目标。 在影 响猪肉品质的诸多因素中， 肌内脂肪(intramuscular  fat， IMF)含量发挥着重 要作用， 与猪肉的嫩度、 多汁性和风味高度相关， 是决定猪肉品质的关键因素。 因此， 通过提 高猪肉中肌内脂肪含量来改善猪肉肉质、 提高食用价值、 满足广大消费者的要求具有重要 的现实意 义。 [0003]IMF是猪肉中脂肪沉积的主要形式之一， 它指的是同一部位肌肉内部、 肌纤维之间 沉积的脂肪， 主要位于肌内膜、 肌束膜或肌外膜上， 主要成分是磷脂和甘油三酯。 有研究表 明， 肌内脂肪的含量越低， 肌肉的嫩度、 多汁性、 风 味及总体可接受程度也越低， 2％ ‑3％的 肌内脂肪含量是衡量 肉质的一个理想标准。 此外， 猪的肌内脂肪性状具有相对较高的遗传 力(h2＝0.52)。 因此， 研究肌内脂肪对改善猪肉品质、 生产健康肉产品及 提高猪产业经济效 益具有重要意义， 开 发和利用分子标记及相关检测技术使得肌内脂肪性状在遗传育种改良 中获得较快进 展。 [0004]哺乳动物的脂肪 以三酰基甘油(TG)的形式存储代谢能， 而TG的合成需要酶的催 化， 其中发挥作用的酶是二酰基甘油酰基转移酶(DGAT)， DGAT基因包括二酰基甘油酰基转 移酶1(DGAT1)基因和二酰基甘油酰基转移酶2(DGAT2)基因， 前者属于酰基辅酶A  胆固醇酰 基转移酶(ACAT)基因家族， 后者属于单酰甘油酰基转移酶(MGAT)基因家族， 分别编码微粒 体酶DGAT1和DGAT2， 是定位于内质网的跨膜 蛋白， 其拓扑结构具有与其他蛋白质和细胞器 相互作用的能力， 影响脂肪代谢及脂类在组织中的沉积， 参与调节动物机体的能量合成和 分解代谢。 DGAT1基因是定位于内质网的跨膜蛋白， 其拓扑结构具有与其他蛋白质和细胞器 相互作用的能力， 影响脂肪代谢及脂类在组织中的沉积， 参与调节动物机体的能量合成和 分解代谢， 在脂肪合成过程中起着关键作用， 影响着动物体内脂肪的形成与分解。 发明内容 [0005]本发明的目的在于提供一种用于检测猪肌内脂肪含量的SNP分子标记及其应用， 方便快速地判断猪肉肌内脂肪含量情况， 从而获得 更好肉质提供依据。 [0006]本发明的目的通过以下技 术方案实现： [0007]一种用于检测猪肌内脂肪含量的SNP分子标记， 该SNP分子标记位于DGAT1基因启 动子区的转录起始密码 子上游379bp处， 该位点碱基是C或T。 因此， 将该SNP命名为c. ‑ 379C说　明　书 1/9 页 3 CN 114854868 A 3