(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210353012.7 (22)申请日 2022.04.02 (71)申请人 西北大学 地址 710069 陕西省西安市太白北路2 29号 (72)发明人 郭松涛　黄康　吴帆　何刚　 尚义昕　李宇航　谢玉乐　贺树军　 李保国　 (74)专利代理 机构 西安智邦专利商标代理有限 公司 6121 1 专利代理师 汪海艳 (51)Int.Cl. C12Q 1/6888(2018.01) C12Q 1/6858(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 用于川金丝猴亲权鉴定的微卫星检测方法、 位点组合及引物组合、 试剂盒与应用 (57)摘要 本发明提供一种用于川金丝猴亲权鉴定的 微卫星检测方法、 位点组合及引物组合、 试剂盒 与应用， 解决现有微卫星位点标记 技术进行川金 丝猴亲权鉴定中存在鉴定结果不够准确的技术 问题。 首先确定19对微卫星位点组合， 核心重复 序列为四碱基重复， 重复序列重复次数在8次以 上， 产物在100 ‑300bp； 根据19对微卫星位点组合 合成相应微卫星位点引物； 之后， 利用合成的相 应微卫星引物组合及川金丝猴个体的基因组 DNA， 进行PCR扩增反应， 获得扩增产物； 最后利用 毛细管电泳检测方法， 检测扩增产物的微卫星多 态性； 分析检测结果， 实现川金丝猴的高精度亲 权鉴定， 精确度达到99.99％， 具有快速、 准确、 简 便和实现成本 较低的优点。 权利要求书3页 说明书9页 序列表6页 附图1页 CN 115216546 A 2022.10.21 CN 115216546 A 1.一种适用于川金丝猴 亲权鉴定的微 卫星检测方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： 步骤1、 确定19对微卫星位点组合， 核心重复序列为四碱基重复， 重复序列重复次数在8 次以上， 产物在10 0‑300bp； 根据19对微 卫星位点组合合成相应微 卫星位点引物； 步骤2、 提取川金丝猴个 体的基因 组DNA； 步骤3、 利用步骤1合成的相应微卫星引物组合及步骤2提取的川金丝猴个体的基因组 DNA， 进行PCR扩增反应， 获得扩增产物； 步骤4、 利用毛细管电泳检测方法， 检测扩增产物的微 卫星多态性； 步骤5、 分析检测结果， 利用软件进行 亲权鉴定 。 2.根据权利要求1所述的用于川金丝猴亲权鉴定的微卫星检测方法， 其特征在于， 所述 步骤1中19对微 卫星位点组合分别为： GSM ‑1至GSM‑19； 相应微卫星位点引物组合的序列如下： 3.根据权利要求1或2所述的用于川 金丝猴亲权鉴定的微卫星检测方法， 其特征在于， 步骤2具体为： 提取川金丝猴个 体的基因 组DNA提取的是抗凝血DNA、 毛发DNA或粪便DNA。 4.根据权利要求3所述的用于川金丝猴亲权鉴定的微卫星检测方法， 其特征在于， 步骤 3PCR反应 体系按10 μl计， 具体为：权　利　要　求　书 1/3 页 2 CN 115216546 A 25.根据权利要求4所述的用于川金丝猴亲权鉴定的微卫星检测方法， 其特征在于， 19对 微卫星位点引物组合PCR程序为： 95℃变性， 4min； 94℃变性， 1min； 设置不同位点的退火温 度， 在该温度下复性45s； 72℃延伸45s； 循环35次； 72℃延伸10min； 4℃延伸； 19对微卫星位 点引物退火温度如下 所示： 引物 退火温度(℃) 引物 退火温度(℃) GSM‑1 54 GSM‑11 53 GSM‑2 56 GSM‑12 55 GSM‑3 54 GSM‑13 61 GSM‑4 53 GSM‑14 60 GSM‑5 55 GSM‑15 60 GSM‑6 61 GSM‑16 61 GSM‑7 60 GSM‑17 60 GSM‑8 61 GSM‑18 60 GSM‑9 52 GSM‑19 58 GSM‑10 58 。 6.根据权利要求4所述的用于川金丝猴亲权鉴定的微卫星检测方法， 其特征在于， 步骤 5具体为： 通过软件CERVUS3.0.7利用最大似然法进行亲权鉴定， 根据待测个体的基因型计 算亲权指数的LOD值， 当LOD值大于0时， 候选亲本有可能是真实亲本， LOD值最高个体为最似 亲本； 当LOD值小于0， 候选亲本不可能是真实亲本； 模拟参数设置为模拟10000个子代， 候选 亲本检出率为100％， 位点分型成功率设为0.99， 分析错误率为0.01， 置信水平的临界值设 置为80％和95％。 7.一种用于川金丝猴亲权鉴定的微卫星位点组合及相应引物组合， 其特征在于： 包括 19对微卫星位点组合， 分别为： GSM ‑1至GSM‑19； 相应微卫星位点引物组合的序列如下：权　利　要　求　书 2/3 页 3 CN 115216546 A 3