(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210353789.3 (22)申请日 2022.04.02 (71)申请人 深圳市国赛 生物技术有限公司 地址 518000 广东省深圳市南 山区招商街 道科技大厦103C、 503C、 504D;科技大 厦辅楼3A号、 4A号 (72)发明人 郑筱雯　薛丽丽　陈明峰　 (74)专利代理 机构 深圳市恒程创新知识产权代 理有限公司 4 4542 专利代理师 刘冰 (51)Int.Cl. C12Q 1/6883(2018.01) C12Q 1/6858(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种检测人MTHFR基因多态 性的引物和探针 组合及其试剂盒 (57)摘要 本发明提供一种检测人MTHFR基因多态性的 引物和探针组合及其试剂盒， 所述检测人MTHFR 基因多态性的引物和探针组合包括： MTHFR上游 引物、 MTH FR下游引物， MTHF R 677野生型探针， 和 MTHFR 677突变型探针。 本发明设计的特异性引 物对和探针， 可检测人MTH FR基因的多态性， 引物 与探针设计合理， 使其在进行扩增反应时， 保证 了退火温度， 使其对样品的扩增 效果良好； 同时 引物与探针具有高特异性， 野生型和突变型样 本、 突变型探针和野生型样本间不存在交叉反 应， 结果不会产生 误判， 准确性高。 权利要求书2页 说明书9页 序列表2页 附图3页 CN 114934111 A 2022.08.23 CN 114934111 A 1.一种检测人MTHFR基因多态性的引物和探针组合， 其特征在于， 所述检测人MTHFR基 因多态性的引物和探针组合包括： MTHFR上游引物， 所述MTHFR上游引物的核苷酸序列如SEQ  ID NO： 1所示； MTHFR下游引物， 所述MTHFR下游引物的核苷酸序列如SEQ  ID NO： 2所示； MTHFR 677野生型探针， 所述MTHFR  677野生型探针的核苷酸序列如SEQ  ID NO： 3所示； 及， MTHFR 677突变型探针， 所述MTHFR  677突变型探针的核苷酸序列如SEQ  ID NO： 4所示。 2.如权利要求1所述的检测人MTHFR基因多态性的引物和探针组合， 其特征在于， 所述 MTHFR 677野生型探针连接有锁核酸； 和/或， 所述MTHFR  677突变型探针连接有锁核酸； 和/或， 所述MTHFR  677野生型探针连接有 小沟化合物； 和/或， 所述MTHFR  677突变型探针连接有 小沟化合物。 3.如权利要求1所述的检测人MTHFR基因多态性的引物和探针组合， 其特征在于， 所述 MTHFR 677野生型探针的第七位核苷酸连接有锁核酸； 和/或， 所述MTHFR  677突变型探针的第七位核苷酸连接有锁核酸。 4.如权利要求1所述的检测人MTHFR基因多态性的引物和探针组合， 其特征在于， 所述 MTHFR 677野生型探针的5 ’端标记有荧 光基团， 3 ’端标记有非荧 光淬灭基团； 和/或， 所述MTHFR  677突变型探针 的5’端标记有荧光基团， 3 ’端标记有非荧光淬灭基团； 和/ 或， 所述MTHFR  677野生型探针的3 ’端连接有 小沟化合物； 和/或， 所述MTHFR  677突变型探针的3 ’端连接有 小沟化合物。 5.如权利要求1所述的检测人MTHFR基因多态性的引物和探针组合， 其特征在于， 所述 检测人MTHFR基因多态性的引物和探针组合还 包括： 内标上游引物， 所述内标 上游引物的核苷酸序列如SEQ  ID NO： 5所示； 内标下游引物， 所述内标 下游引物的核苷酸序列如SEQ  ID NO： 6所示； 及， 内标探针， 所述内标探针的核苷酸序列如SEQ  ID NO： 7所示。 6.一种检测人MTHFR基因多态性的试剂盒， 其特征在于， 所述检测人MTHFR基因多态性 的试剂盒包括P CR反应缓冲液、 DNA聚合 酶、 dNTPs以及如权利要求1～5任一项所述的检测人 MTHFR基因多态性的引物和探针组合。 7.如权利 要求6所述的检测人MTHFR基因多态性的试剂盒， 其特征在于， 所述dNTP s包括 dATP、 dUTP、 dCTP及dGTP， 所述检测人MTHFR基因多态性的试剂盒还 包括UDG酶。 8.如权利要求6所述的检测人MTHFR基因多态性的试剂盒， 其特征在于， 所述检测人 MTHFR基因多态性的试剂盒中， 所述dNTPs的浓度为0.1～0.5 μM； 和/或， 所述MTHFR  677上游引物的浓度为0.1～1 μM； 和/或， 所述MTHFR  677下游引物的浓度为0.1～1 μM； 和/或， 所述MTHFR  677野生型探针的浓度为0.0 5～0.5 μM； 和/或， 所述MTHFR  677突变型探针的浓度为0.0 5～0.5 μM； 和/或， 所述DNA聚合酶为Taq酶； 和/或， 所述DNA聚合酶的酶活为0.5～ 2U。权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114934111 A 29.如权利要求6所述的检测人MTHFR基因多态性的试剂盒， 其特征在于， 所述检测人 MTHFR基因多态性的试剂盒还 包括阳性对照品和/或阴性对照品。 10.一种检测人MTHFR基因多态性的试剂盒的方法， 其特征在于， 所述检测人MTHFR基因 多态性的试剂盒的方法的包括以下步骤： 获取测试样品； 采用如权利 要求6～9任一项所述的检测人MTHFR基因多态性的试剂盒对所述测试样品 进行PCR反应； 根据PCR反应结果判定基因型。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114934111 A 3