(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210343023.7 (22)申请日 2022.04.02 (71)申请人 广东省农业科 学院果树研究所 地址 510640 广东省广州市天河区大丰二 街80号 (72)发明人 邵雪花　匡石滋　肖维强　赖多　 刘传和　贺涵　 (74)专利代理 机构 广州嘉权专利商标事务所有 限公司 4 4205 专利代理师 齐键 (51)Int.Cl. C12Q 1/6895(2018.01) C12Q 1/6858(2018.01) C12N 15/11(2006.01) G16B 15/00(2019.01)G16B 20/40(2019.01) (54)发明名称 一种番石榴ISSR-PCR分子标记组合及其应 用 (57)摘要 本发明公开了一种番石榴ISSR ‑PCR分子标 记组合及其应用， 其主要基于SEQIDNO： 1～10组 成的ISSR引物组实现鉴别番石榴遗传多样性分 析的功能。 且本发明中的引物组相对于传统方 法， 其能够在更大的样本量的情况下实现高精准 度的测定工作， 可识别的多态性高达89.68％。 而 且基于该方法， 其条带分辨率更高， 扩增片段更 清晰， 反应更加稳定， 多态性识别 度更高， 可在短 时间内完成大批量实验材料鉴定， 能准确分辨番 石榴种质资源间的亲缘关系， 对番石榴种质资源 的鉴定有重大意 义。 权利要求书1页 说明书11页 序列表2页 附图6页 CN 114807412 A 2022.07.29 CN 114807412 A 1.一组用于鉴别番石榴遗传多样性分析的ISSR引物组， 其特征在于， 所述引物组由SEQ   ID NO： 1～10组成。 2.一种用于鉴别番石榴遗传多样性分析的检测试剂， 其特征在于， 所述检测试剂中含 有权利要求1所述的IS SR引物组。 3.权利要求1所述的IS SR引物组在制备番 石榴遗传多样性检测产品中的应用。 4.根据权利要求3所述的应用， 其特征在于， 所述产品包括检测试剂、 检测试剂 盒、 检测 芯片。 5.权利要求1所述的IS SR引物组在番 石榴种质选 育中的应用。 6.一种鉴别番 石榴品种遗传多样性的方法， 包括如下步骤： (1)提取番石榴样品DNA， 基于SEQ  ID NO： 1～10中至少一条引物分别独立进行扩增， 得 到扩增产物； (2)电泳分离扩增产物， 并进行凝胶成像， 获得 条带信息； (3)根据条 带信息进行聚类分析， 并建立DNA指纹图谱， 从而鉴别出番 石榴品种。 7.根据权利要求6所述的方法， 其特 征在于， 步骤(1)中所述扩增的反应 体系为： 8.根据权利 要求7所述的方法， 其特征在于， 步骤(1)中所述扩增的反应程序为： 94～95 ℃预变性2～5min； 94～95℃变性25～30s， 50℃退火42～45s， 40～45个循环； 72℃延伸9～ 10min。 9.根据权利要求6所述的方法， 其特征在于， 所述引物为SEQ  ID NO:2、 4～8和10的组 合。 10.根据权利要求6所述的方法， 其特 征在于， 所述引物为SEQ  ID NO： 1～10的组合。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114807412 A 2一种番石榴I SSR‑PCR分子标记组合及其应用 技术领域 [0001]本发明属于分子生物学领域， 具体涉及一种番石榴ISSR ‑PCR分子标记组合及其应 用。 背景技术 [0002]番石榴(Psidium  guajava L.)是桃金娘科番石榴属乔木， 又名芭乐、 鸡屎果、 拔子 等。 番石榴原产于热带美洲， 现广泛分布于热带和亚热带地区， 引入中国栽培已有300多年 的历史。 番石榴主要栽培于华南地区， 在西南地区亦有分布。 番石榴富含蛋白质 、 维他命C、 A、 B以及钙、 磷、 铁、 钾等人体所需的多种微量元素。 既可鲜食、 煮食、 酿 酒， 又可加工成果汁、 果酱、 罐头等， 还 具有抗菌、 止泻、 抗氧化、 保肝、 降血糖、 降血脂、 降血压、 抗心血管疾病和抗 肿瘤等药用价 值。 另外其种子含油率 为5％～13％， 富含不饱和脂肪酸， 可作为保健用油。 [0003]目前， 在我国多个省份、 自治区都建有番石榴种质资源圃， 番石榴的引种、 试种和 收集工作赓续进行， 但现阶段中， 番石榴种质资源的鉴定仍主要依据形态特征， 缺乏科学系 统的检测方法， 从而导致种质亲缘关系难以正确判断， 常有同物异名， 同名 异物的现象存 在， 为番石榴品种的鉴别工作带来了极大的挑战。 [0004]ISSR(Inter ‑simple Sequence Repeat)是物种遗传多样性研究中的常见方法， 具 有不受环境影响， 结合位点丰富和灵敏度准确性高等特点， 在品种鉴定方面， DNA分子标记 技术与传统技 术相比具有更加突出的优点。 [0005]相关技术中， 虽然也有采用ISSR分子标记技术鉴别番石榴的报道， 但其鉴定准确 度普遍无法实现大样本量下的高精度的要求。 有研究人员对对36份番石榴种质资源的亲缘 关系进行分析， 共扩增出165条带， 其中多态 性条带129条， 多态 性百分率仅为78.18％。 有研 究对16份番石榴材料进行了亲缘关系分析， 共扩增出44条可重复条带， 其中多态性条带仅 占61.4％， 各种质间的相似系数在0.689 ～0.981之间。 [0006]因此， 开发一种能够使用在更大规模样本量筛查中且能够显示出更高多态性百分 率的番石榴品种鉴定方法对于提高番石榴品种鉴定的工作效率以及鉴定准确 性都具有极 为重要的意 义。 发明内容 [0007]本发明旨在至少解决上述现有技术中存在的技术问题之一。 为此， 本发明提出一 种番石榴ISSR ‑PCR分子标记组合及其应用。 本申请发现了一组番石榴ISSR ‑PCR分子标记的 引物组， 可准确鉴定大样本量的番石榴样品， 并准确的进行种质分类， 从而实现番石榴品种 的准确鉴定 工作， 降低番 石榴选育难度和不确定性。 [0008]本发明的第一个方面， 提供一组用于鉴别番石榴遗传多样性分析的ISSR引物组， 所述引物组由SEQ  ID NO： 1～10组成。 [0009]其中， 所述SEQ  ID NO： 1～10的具体核苷酸序列如下 所示。 [0010]UBC807： 5 ’ ‑AGAGAGAGAGAGAGAGT ‑3’(SEQ ID NO:1)说　明　书 1/11 页 3 CN 114807412 A 3