(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210347336.X (22)申请日 2022.04.01 (71)申请人 苏州卫生职业技术学院 地址 215009 江苏省苏州市高新区科华路 28号 (72)发明人 刘松柏　 (74)专利代理 机构 南京业腾知识产权代理事务 所(特殊普通 合伙) 32321 专利代理师 李静 (51)Int.Cl. C12Q 1/6886(2018.01) C12Q 1/6858(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种检测BCR-ABL融合基因的LA MP引物组及 试剂盒 (57)摘要 本发明涉及一种检测BCR ‑ABL融合基因的 LAMP引物组， 包 括检测BCR ‑ABL1基因的LAMP引物 组、 检测BCR ‑ABL2基因的LAMP引物组和检测BCR ‑ ABL3基因的LAMP引物组， 共17条LAMP引物， 序列 如SEQIDNO:1 ‑17所示。 检测方法： 以待测样本DNA 为模板， 采用上述检测BCR ‑ABL1基因的LA MP引物 组、 检测BCR ‑ABL2基因的LAMP引物组和检测BCR ‑ ABL3基因的LAMP引物组进行环介导等温扩增， 然 后对扩增产物进行检测， 根据检测结果进行判 断。 本发明的检测方法能够快速、 灵敏、 特异的检 测出三种类型的BCR ‑ABL融合基因， 并且操作简 单， 不需要复杂仪 器， 检测成本低。 权利要求书1页 说明书8页 序列表4页 附图3页 CN 114774542 A 2022.07.22 CN 114774542 A 1.一种检测 BCR‑ABL融合基因的LAMP引物组， 包括检测BCR ‑ABL1基因的LAMP引物组、 检 测BCR‑ABL2基因的LAMP引物组和检测BCR ‑ABL3基因的LAMP引物组； 所述检测BCR ‑ABL1基因的LAMP引物组包括BCR ‑ABL1‑F3引物、 BCR ‑ABL1‑B3引物、 BCR ‑ ABL1‑FIP引物、 BCR ‑ABL1‑BIP引物和BCR ‑ABL1‑LB引物， 所述BCR ‑ABL1‑F3引物的核苷酸序 列如SEQ ID NO:1所示， 所述BCR ‑ABL1‑B3引物的核苷酸序列如SEQ  ID NO:2所示， 所述BCR ‑ ABL1‑FIP引物的核苷酸序列如SEQ  ID NO:3所示， 所述BCR ‑ABL1‑BIP引物的核苷酸序列如 SEQ ID NO:4所示， 所述BCR ‑ABL1‑LB引物的核苷酸序列如SEQ  ID NO:5所示； 所述检测BCR ‑ABL2基因的LAMP引物组包括BCR ‑ABL2‑F3引物、 BCR ‑ABL2‑B3引物、 BCR ‑ ABL2‑FIP引物、 BCR ‑ABL2‑BIP引物、 BCR ‑ABL2‑LF引物和BCR ‑ABL2‑LB， 所述BCR ‑ABL2‑F3引 物的核苷酸序列如SEQ  ID NO:6所示， 所述BCR ‑ABL2‑B3引物的核苷酸序列如SEQ  ID NO:7 所示， 所述BCR ‑ABL2‑FIP引物的核苷酸序列如SEQ  ID NO:8所示， 所述BCR ‑ABL2‑BIP引物的 核苷酸序列如SEQ  ID NO:9所示， 所述BCR ‑ABL2‑LF引物的核苷酸序列如SEQ  ID NO:10， 所 述BCR‑ABL2‑LB引物的核苷酸序列如SEQ  ID NO:11所示； 所述检测BCR ‑ABL3基因的LAMP引物组包括BCR ‑ABL3‑F3引物、 BCR ‑ABL3‑B3引物、 BCR ‑ ABL3‑FIP引物、 BCR ‑ABL3‑BIP引物、 BCR ‑ABL3‑LF引物和BCR ‑ABL3‑LB引物， 所述BCR ‑ABL3‑ F3引物的核苷酸序列如SEQ  ID NO:12所示， 所述BCR ‑ABL3‑B3引物的核苷酸序列如SEQ  ID  NO:13所示， 所述BCR ‑ABL3‑FIP引物的核苷酸序列如SEQ  ID NO:14所示， 所述BCR ‑ABL3‑BIP 引物的核苷酸序列如SEQ  ID NO:15所示， 所述BCR ‑ABL3‑LF引物的核苷酸序列如SEQ  ID  NO:16， 所述BCR ‑ABL3‑LB引物的核苷酸序列如SEQ  ID NO:17所示。 2.一种检测BCR ‑ABL融合基因的试剂盒， 其特征在于， 包括权利要求1所述检测BCR ‑ ABL1基因的LAMP引物组、 检测BCR ‑ABL2基因的LAMP引物组和检测BCR ‑ABL3基因的LAMP引物 组。 3.如权利 要求2所述检测BCR ‑ABL融合基因的试剂盒， 其特征在于， 所述试剂盒包括2 × Bst LAMP MasterMix(SYBR  Green)。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114774542 A 2一种检测BCR ‑ABL融合基因的LAMP引物组及 试剂盒 技术领域 [0001]本发明属于生物技术领域， 具体涉及一种检测BCR ‑ABL融合基因的LAMP引物组及 试剂盒。 背景技术 [0002]慢性髓系白血病(chronic  myeloid leukemia， CML)是一类骨髓增殖性肿瘤， 其 发 病机制与BCR ‑ABL融合基因相关。 BCR ‑ABL融合基因由9号染色体和22号染色体易位导致形 成， 可表达具有 高酪氨酸激酶活性的BCR ‑ABL融合蛋白， BCR ‑ABL融合蛋白活性的失调进而 导致CML的发生。 90％以上的CML患者可检测到Ph染色体和BCR ‑ABL融合基因。 BCR ‑ABL融合 基因中BCR基因的断裂区主要分为三个类型： Major ‑BCR(M‑BCR)、 minor(m ‑BCR)和u‑BCR。 其 中， M‑BCR区BCR基因的断裂点通常被限制在一个5.8kb的DNA片段区域， 断裂点发生在外显 子e13和e14或e14和e15之间， 断裂后的BCR基因外显子上游留在22号染色体上， 并与ABL基 因断裂后的外显子a2融合， 转录为e13a2或e14a2型mRNA， 编码P210融合蛋白， 见于9 0％以上 的CML病例中； m ‑BCR区域的BCR基因断裂点通常发生在外显子e1和e2之间， 转录为e1 a2型的 mRNA， 编码P190融合蛋白， 见于3％非典型CML和2/3的Ph+急性B淋巴细胞白血病(Ph ‑ positive B‑cell acute lymphoblastic  leukemia， Ph+B ‑ALL)病例中； u ‑BCR区域的BCR基 因断裂点通常发生在外显子e19和e20之间， 转录为e19a2型mRNA， 编码P230融合蛋 白， 常见 于慢性中性粒细胞白血病(Chronic  neutrophilic  leukemia， CNL)病例中。 小分子酪氨酸 激酶抑制剂(TKI)伊马替尼等靶向药物可以与BCR ‑ABL融合蛋白的ATP结合位点结合， 抑制 BCR‑ABL靶点的磷酸化， 进而阻断下游信号通路的传导， 从而抑制CML细胞的增殖， 并诱导细 胞凋亡发生， 可显著延长患者的生存时间。 BCR ‑ABL融合基因作为CML的分子标志， 其检测也 已经成为C ML诊断的“黄金标准”。 [0003]目前检测BCR ‑ABL融合基因的方法主要有荧光原位杂交法、 荧光定量PCR法、 基因 芯片法、 P CR测序法等。 然而， 该类方法均存在设备依赖性、 成本高、 实验方法繁琐， 时间长等 缺点。 [0004]环介导恒温扩增技术(loop  mediated  isothermal  amplification,LAMP)方法是 一种新型的核酸扩增方法， 因其快速(30 ‑60分钟)、 简易、 灵敏、 特异等特点近年来被广泛用 于病毒、 细菌等生物物种的鉴定工作， 在60 ‑65℃下即可实现痕量扩增， 为物种大规模快速 检测做出了巨大贡献。 现有技术中， 尚无采用环介导恒温扩增技术检测BCR ‑ABL融合基因的 相关报道。 发明内容 [0005]本发明的目的是解决现有技术中检测BCR ‑ABL融合基因的方法存在的不足， 提供 一种检测BCR ‑ABL融合基因的LAMP引物组、 试剂盒及检测方法。 [0006]技术方案 [0007]一种检测BCR ‑ABL融合基因的LAMP引物组， 包括检测BCR ‑ABL1基因的LAMP引物组、说　明　书 1/8 页 3 CN 114774542 A 3