(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210339688.0 (22)申请日 2022.04.01 (71)申请人 领航基因科技 （杭州） 有限公司 地址 310000 浙江省杭州市萧 山区南阳街 道横蓬园区红山工业区 (72)发明人 夏江　朱海涛　 (74)专利代理 机构 北京集佳知识产权代理有限 公司 11227 专利代理师 温可睿 (51)Int.Cl. C12Q 1/689(2018.01) C12Q 1/6851(2018.01) C12N 15/11(2006.01) C12R 1/32(2006.01) (54)发明名称 一种用于结核分枝杆菌及其耐药性的数字 PCR检测试剂盒 (57)摘要 本发明涉及医药技术领域， 尤其涉及一种用 于结核分枝杆菌及利福平耐药位点的数字PCR检 测试剂盒。 本发 明提供了用于结核分枝杆菌核酸 及利福平耐药位点的数字PCR检测试剂盒， 该试 剂盒靶向检测结核分枝杆菌核酸， 通过数字PCR 技术来检测结核分枝杆菌rpoB基因的511突变位 点、 516突变位点、 526突变位点、 531突变位点和 533突变位点。 本发明基于非竞争性探针的设计 理念， 通过检测 利福平耐药基因rpoB来确定样品 中是否含有结核菌核酸， 以及是否含有利福平耐 药位点。 权利要求书2页 说明书9页 序列表2页 附图1页 CN 114540524 A 2022.05.27 CN 114540524 A 1.一种用于结核分枝杆菌及利福平耐药位点的数字PCR检测试剂 盒， 其特征在于， 包括 靶向结核分枝杆菌rpoB基因的引物和探针以及利 福平耐药位 点的探针； 所述结核菌利福平 耐药位点包括511突变位点、 516突变位点、 526突变位点、 531突变位 点和533突变位点。 2.根据权利要求1所述的数字PCR检测试剂盒， 其特 征在于， 靶向所述rpoB基因的2条引物的核酸序列分别如SEQ  ID NO:1和SEQ  ID NO:2所示， 靶向所述结核分枝杆菌rpoB基因的探针的核酸序列如SEQ  ID NO:3所示， 靶向所述51 1野生型位 点的探针的核酸序列如SEQ  ID NO:4所示， 靶向所述516野生型位 点的探针的核酸序列如SEQ  ID NO:5所示， 靶向所述526野生型位 点的探针的核酸序列如SEQ  ID NO:6所示， 靶向所述5 31野生型位 点的探针的核酸序列如SEQ  ID NO:7所示， 靶向所述5 33野生型位 点的探针的核酸序列如SEQ  ID NO:8所示。 3.根据权利要求2所述的数字PCR检测试剂盒， 其特 征在于， 所述如SEQ  ID NO:3所示探针的两端分别修饰C Y7基团和BHQ3基团； 所述如SEQ  ID NO:4所示探针的两端分别修饰FAM基团和MGB基团； 所述如SEQ  ID NO:5所示探针的两端分别修饰VIC基团和BHQ1基团； 所述如SEQ  ID NO:6所示探针的两端分别修饰ROX基团和BHQ2基团； 所述如SEQ  ID NO:7所示探针的两端分别修饰C Y5基团和MGB基团； 所述如SEQ  ID NO:8所示探针的两端分别修饰C Y5.5基团和BHQ3基团。 4.根据权利要求1～3任一项所述的数字PCR检测试剂盒， 其特 征在于， 所述试剂盒中还 包括外源内参的引物和探针， 所述外源内参的2条引物的核酸序列分别如SEQ  ID NO:9和SEQ  ID NO:10所示， 所述外源内参的探针的核酸序列如SEQ  ID NO:11所示。 5.根据权利要求4所述的数字PCR检测试剂盒， 其特征在于， 所述如SEQ  ID NO:11所示 探针的两端分别修饰A425基团和BHQ1基团。 6.根据权利要求1～5任一项所述的数字PCR检测试剂盒， 其特征在于， 还包括数字PCR 反应试剂， 所述数字PCR反应试剂包括d dPCR Mix和水。 7.非诊断目的检测结核分枝杆菌及其耐药位点的方法， 其特征在于， 包括， 以权利要求 1～6任一项所述的数字PCR检测试剂盒对样品进行检测。 8.根据根据权利要求7所述的方法， 其特征在于， 所述样品经前处理提取获得基因组 DNA。 9.根据权利要求7 所述的方法， 其特 征在于， 所述检测的反应 体系包括： 权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114540524 A 210.根据权利 要求7所述的方法， 其特征在于， 所述检测的反应的程序包括98℃5min； 然 后98℃15s， 6 0℃1min， 40个循环。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114540524 A 3