(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210338034.6 (22)申请日 2022.04.01 (71)申请人 集美大学 地址 361000 福建省厦门市集美区银 江路 185号 (72)发明人 李完波　何奇伟　叶坤　 (74)专利代理 机构 厦门市精诚新创知识产权代 理有限公司 3 5218 专利代理师 秦华 (51)Int.Cl. C12Q 1/6879(2018.01) C12Q 1/6858(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种鉴别大口黑鲈遗传性别的分子标记及 其引物对 (57)摘要 本发明公开了一种鉴别大口黑鲈遗传性别 的分子标记及其引物对。 其分子标记的序列如 SEQ ID NO:1所示,其存在于 大口黑鲈遗传性别X 染色体上， 在Y染色体上缺失。 引物对的序列如 SEQ ID NO:2和3所示。 应用该引物对可以简便、 快速、 稳定地鉴别出大口黑鲈各个群体中不同个 体的遗传性别， 包括大口黑鲈的胚胎、 幼体和成 体。 正确率达 到100％。 权利要求书1页 说明书6页 序列表1页 附图2页 CN 114717301 A 2022.07.08 CN 114717301 A 1.一种鉴别大口黑鲈遗传性别的分子标记， 其特征在于， 其分子标记的序列如SEQ  ID  NO:1所示,所述分子标记存在于大口黑鲈遗传性别X染色体上， 在Y染色体上缺失。 2.一种鉴别大口黑鲈遗传性别的分子标记的引物对， 其特征在于， 引物对的序列如SEQ   ID NO:2和3所示。 3.一种采用权利要求2所述引物对检测权利要求1分子标记的方法， 其特征在于， 通过 权利要求2的引物对 对待测DNA进行PCR扩增。 4.一种鉴别大口黑鲈遗传性别的方法， 其特征在于， 采用权利要求2的引物对进行PCR 检测， 当采用SEQ  ID NO:2和3引物对时， PCR扩增片段有两条大小不同的特异条带345bp和 314bp， 则判断待测大口黑鲈的遗传性别为雄性； PCR扩增片段只有一条特异条带345bp， 则 判断待测大口黑鲈的遗传性别为雌性。 5.如权利 要求4所述方法， 其特征在于， 所述PCR检测的反应体系为， 以反应总体积为10 μl计算， 5 μl  2×Pro Taq Master Mix， 1 μl 30ng/ μl模板DNA， 0.4 μl  10 μM正反向引物， 最后 加ddH2O补齐。 6.如权利要求4所述方法， 其特征在于， 所述PCR检测的扩增条件为： 95℃预变性3min， 95℃变性3 0s， 55℃退火15s， 72℃延伸3 0s， 30～35个循环后接着72℃延伸5mi n。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114717301 A 2一种鉴别大口黑鲈遗传性别的分子标记及其引物对 技术领域 [0001]本发明涉及鱼类基因组领域， 尤其涉及一种鉴别大口黑鲈遗传 性别的分子标记及 其引物对。 背景技术 [0002]性别决定是两性生殖生物确定性别发育方向的生物过程， 是生命繁衍的关键环 节， 直接关系着物种的发生、 续存、 适应与进化。 因而， 性别决定机制一直是生命 科学研究 的 热点。 鱼类在脊椎动物进化系统中， 处于承前启后的关键位置， 又因其分布范围广， 物种数 量丰富， 在性别决定机制上也多种多样， 所以是研究性别决定机制的重要对象。 许多鱼类在 生长速率上存在性别差异， 因此， 针对这些鱼类物种开发可以准确 鉴定其遗传性别的分子 标记， 进行这些鱼类的单性育种与遗传学研究， 对于提高鱼产量、 增加水产养殖收益以及促 进相关的研究有着重要的意 义。 [0003]大口黑鲈(Micropterus  salmoides)隶属鲈形 目， 太阳鱼科， 黑鲈属， 具有显著的 雌雄生长二态 性， 因其具有适应性强、 生长快、 生长周期短的特点， 经过30多年的养殖历程， 已成为我国重要的淡水养殖品种之一。 养殖产业中有培育全雄或全雌苗种的需求， 全雄苗 种个体体型好， 有价格优势， 且有更好的越冬性能， 适合我国大部分地区的越冬养殖模式； 而全雌苗种长速快， 寿命较长， 体型较大， 开 发其单性育种与单性养殖技术具有重要的产业 意义。 单性苗种还能有效防止种苗 企业的优质种质外流。 培育单性苗种需要获得伪雌、 伪雄 或超雄鱼作为亲本， 而这四类鱼都无法通过表型来判断， 需要准确的分子标记来 鉴定。 [0004]大口黑鲈在性腺发育成熟之前， 其雌鱼和雄鱼却很难从外部形态上加以区分， 胚 胎和幼体阶段雌雄鱼形态上完全没有区别； 不存在异形性染色体， 也无法从细胞学角度鉴 定其遗传性别； 因此， 开发一种 可以鉴别其遗传性别的分子标记用于大 口黑鲈性别控制 育 种具有极大的生产应用价 值。 发明内容 [0005]本发明的目的在于提供能区分大口黑鲈遗传性别的分子标记， 有助于快速、 简便、 准确鉴别大口黑鲈个体的遗传性别， 为开展大 口黑鲈的性别控制 育种工作、 发展单性养殖 建立基础。 本发明还提供了检测该分子标记的引物对。 [0006]为实现上述目的， 本发明提供一种鉴别大口黑鲈遗传性别的分子标记， 其特征在 于， 其分子标记的序列如SEQ  ID NO:1所示,所述分子标记存在于大口黑鲈遗传性别X染色 体上， 在Y染色体上缺失。 [0007]本发明还提供一种鉴别大口黑鲈遗传性别的分子标记的引 物对， 其特征在于， 引 物对的序列如SEQ  ID NO:2和3所示。 [0008]本发明还提供一种采用所述引 物对检测所述分子标记的方法， 其特征在于， 通过 引物对对待测DNA进行PCR扩增。 [0009]本发明还提供一种鉴别大口黑鲈遗传性别的方法， 其特征在于， 采用引 物对进行说　明　书 1/6 页 3 CN 114717301 A 3