(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210352683.1 (22)申请日 2022.03.31 (71)申请人 杭州丹威 生物科技有限公司 地址 311121 浙江省杭州市余杭区仓前街 道余杭塘路2959号4幢2层、 6层601、 9 层902、 1幢2层 (72)发明人 孙艳　陈小音　陈文　郭兴中　 刘松林　朱小娟　 (74)专利代理 机构 杭州君锐知产专利代理事务 所(普通合伙) 33443 专利代理师 方琦 (51)Int.Cl. C12Q 1/70(2006.01) C12Q 1/686(2018.01) C12N 15/11(2006.01)C12R 1/93(2006.01) (54)发明名称 用于23种人乳头瘤病毒基因分型检测的引 物探针组合物、 试剂盒及检测方法 (57)摘要 本发明涉及分子生物学领域， 具体涉及一种 用于23种人乳头瘤病毒基因分型检测的引物探 针组合物、 试剂盒及检测方法。 本发明通过在HPV 基因序列E6和L1两个不同区域分别设计水解探 针和分子信标探针、 并将扩增阶段的荧光采集点 设置于高温变性阶段， 使 得扩增阶段和熔解曲线 两个阶段的检测相互独立而互不干扰， 从而实现 了实时荧光PCR扩增检测技术与熔解曲线技术的 联合使用； 该技术提高了荧光PCR分析技术的单 孔检测目标通量， 降低了检测成本， 为HPV多重荧 光PCR分型检测提供一个更优的检测方法。 权利要求书4页 说明书16页 序列表10页 附图29页 CN 114891922 A 2022.08.12 CN 114891922 A 1.一种用于23种人乳头瘤病 毒基因分型检测的引物探针组合物， 该组合物包括引物 组 和探针组， 其特 征在于： 所述引物组包括： 引物1： 如SEQ  ID NO.1所示的核苷酸序列， 引物2： 如SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列， 引物3： 如SEQ  ID NO.4所示的核苷酸序列， 引物4： 如SEQ  ID NO.5所示的核苷酸序列， 引物5： 如SEQ  ID NO.7所示的核苷酸序列， 引物6： 如SEQ  ID NO.8所示的核苷酸序列， 引物7： 如SEQ  ID NO.10所示的核苷酸序列， 引物8： 如SEQ  ID NO.11所示的核苷酸序列， 引物9： 如SEQ ID NO.13所示的核苷酸序列， 引物10： 如SEQ  ID NO.14所示的核苷酸序列， 引物11： 如SEQ ID NO.16所示的核苷酸序列， 引物12： 如SEQ  ID NO.17所示的核苷酸序列， 引物13： 如SEQ  ID NO.19所示的核苷酸序列， 引物14： 如SEQ  ID NO.20所示的核苷酸序列， 引物15： 如SEQ  ID NO.22所示的核苷酸序列， 引物16： 如SEQ  ID NO.23所示的核苷酸序列， 引物17： 如SEQ  ID NO.25所示的核苷酸序列， 引物18： 如SEQ  ID NO.26所示的核苷酸序列， 引物19： 如SEQ  ID NO.27所示的核苷酸序列， 引物20： 如SEQ ID NO.28所示的核苷酸序列， 引物21： 如SEQ ID NO.30所示的核苷酸序列， 引物22： 如SEQ ID NO.31所示的核苷酸序列， 引物23： 如SEQ ID NO.32所示的核苷酸序列， 引物24： 如SEQ ID NO.33所示的核苷酸序列， 引物25： 如SEQ ID NO.35所示的核苷酸序列， 引物26： 如SEQ ID NO.36所示的核苷酸序列， 引物27： 如SEQ ID NO.37所示的核苷酸序列， 引物28： 如SEQ ID NO.38所示的核苷酸序列， 引物29： 如SEQ ID NO.40所示的核苷酸序列， 引物30： 如SEQ ID NO.41所示的核苷酸序列， 引物31： 如SEQ  ID NO.42所示的核苷酸序列， 引物32： 如SEQ  ID NO.43所示的核苷酸序列， 引物33： 如SEQ ID NO.45所示的核苷酸序列， 引物34： 如SEQ  ID NO.46所示的核苷酸序列， 引物35： 如SEQ ID NO.47所示的核苷酸序列， 引物36： 如SEQ ID NO.48所示的核苷酸序列，权　利　要　求　书 1/4 页 2 CN 114891922 A 2引物37： 如SEQ  ID NO.50所示的核苷酸序列， 引物38： 如SEQ  ID NO.51所示的核苷酸序列， 引物39： 如SEQ  ID NO.52所示的核苷酸序列， 引物40： 如SEQ  ID NO.53所示的核苷酸序列， 引物41： 如SEQ  ID NO.55所示的核苷酸序列， 引物42： 如SEQ  ID NO.56所示的核苷酸序列， 引物43： 如SEQ  ID NO.57所示的核苷酸序列， 引物44： 如SEQ ID NO.58所示的核苷酸序列， 引物45： 如SEQ  ID NO.60所示的核苷酸序列， 引物46： 如SEQ  ID NO.61所示的核苷酸序列， 所述探针组包括： 探针A： 如SEQ  ID NO.3所示的核苷酸序列， 探针B： 如SEQ  ID NO.6所示的核苷酸序列， 探针c： 如SEQ  ID NO.9所示的核苷酸序列， 探针D： 如SEQ  ID NO.12所示的核苷酸序列， 探针E： 如SEQ  ID NO.15所示的核苷酸序列， 探针F： 如SEQ  ID NO.18所示的核苷酸序列， 探针G： 如SEQ  ID NO.21所示的核苷酸序列， 探针H： 如SEQ  ID NO.24所示的核苷酸序列， 探针I： 如SEQ  ID NO.29所示的核苷酸序列， 探针G： 如SEQ  ID NO.34所示的核苷酸序列， 探针K： 如SEQ  ID NO.39所示的核苷酸序列， 探针L： 如SEQ  ID NO.44所示的核苷酸序列， 探针M： 如SEQ  ID NO.49所示的核苷酸序列， 探针N： 如SEQ  ID NO.54所示的核苷酸序列， 探针O： 如SEQ  ID NO.59所示的核苷酸序列， 探针P： 如SEQ  ID NO.62所示的核苷酸序列。 2.如权利 要求1所述的引物探针组合物， 其特征在于： 所述23种人乳头瘤病毒是HPV52、 HPV39、 HPV18、 HPV16、 HPV31、 HPV26、 HPV35、 HPV45、 HPV68、 HPV59、 HPV33、 HPV58、 HPV43、 HPV53、 HPV81、 HPV6、 HPV1 1、 HPV51、 HPV82、 HPV73、 HPV42、 HPV5 6、 HPV66。 3.如权利要求1所述的引物探针组合物， 其特 征在于： HPV52、 HPV39、 HPV18、 HPV16、 HPV31、 HPV26、 HPV35、 HPV45在E6/E7区对应的上游引物分 别为如SEQ  ID NO.1、 SEQ  ID NO.4、 SEQ  ID NO.7、 SEQ  ID NO.10、 SEQ  ID NO.13、 SEQ  ID  NO.16、 SEQ  ID NO.19、 SEQ  ID NO.22所示的核苷酸序列， 对应的下游引物分别为如SEQ  ID  NO.2、 SEQ  ID NO.5、 SEQ  ID NO.8、 SEQ  ID NO.11、 SEQ  ID NO.14、 SEQ  ID NO.17、 SEQ  ID  NO.20、 SEQ  ID NO.23所示的核苷酸序列， 用于对称PCR扩增并分型检测的线性荧光探针分 别为如SEQ  ID NO.3、 SEQ  ID NO.6、 SEQ  ID NO.9、 SEQ  ID NO.12、 SEQ  ID NO.15、 SEQ  ID  NO.18、 SEQ  ID NO.21、 SEQ  ID NO.24所示的核苷酸序列， HPV68和HPV59在L1区对应的上游引物分别为如SEQ  ID NO.25、 SEQ  ID NO.27所示的核权　利　要　求　书 2/4 页 3 CN 114891922 A 3