(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210323452.8 (22)申请日 2022.03.30 (71)申请人 中国农业科 学院农业资源与农业区 划研究所 地址 100081 北京市海淀区中关村南大街 12号 (72)发明人 高淼　贾晟楠　魏海雷　王泽　 (74)专利代理 机构 北京纪凯知识产权代理有限 公司 11245 专利代理师 张立娜　任凤华 (51)Int.Cl. C12Q 1/689(2018.01) C12Q 1/686(2018.01) C12Q 1/6851(2018.01) C12N 15/11(2006.01)C12R 1/01(2006.01) (54)发明名称 一种番茄青枯病菌鉴定的特异性引物及其 应用 (57)摘要 本发明公开了一种番茄青枯病菌鉴定的特 异性引物及其应用。 本发明提供了一种用于鉴定 或辅助鉴定青枯菌的引物对， 由引物epsD ‑F和引 物epsD‑R组成； 所述引物epsD ‑F的核苷酸序列如 SEQ ID No.1所示， 所述引物epsD ‑R的核苷酸序 列如SEQ IDNo.2所示。 利用本发明所提供的引物 对进行荧光定量PCR检测青枯菌， 该方法快速、 特 异性强、 灵敏度高等优点， 为番茄青枯病早期诊 断和防治提供理论基础， 对保障番茄产业稳产持 续发展具有重要意 义。 权利要求书2页 说明书9页 序列表1页 附图4页 CN 114686609 A 2022.07.01 CN 114686609 A 1.一种用于鉴定或辅助鉴定青枯菌的引物对， 由引 物epsD‑F和引物epsD ‑R组成； 所述 引物epsD ‑F的核苷酸序列如SEQ  ID No.1所示， 所述引物epsD ‑R的核苷酸序列如SEQ  ID  No.2所示。 2.用于鉴定或辅助鉴定青枯菌的试剂或试剂盒， 包括权利要求1所述引物对。 3.如下任一方法： 方法I： 权利要求1所述引物对的制备方法， 包括将所述引物epsD ‑F和所述引物epsD ‑R 分别单独包 装的步骤； 方法II： 权利要求2所述试剂或试剂盒的制备方法， 包括将所述引物epsD ‑F和所述引物 epsD‑R分别单独包 装的步骤。 4.如下任一应用： P1、 权利要求1所述引物对或权利要求2所述试剂 或试剂盒在鉴定或辅助鉴定青枯菌 中 的应用； P2、 权利要求1所述引物对在制备用于鉴定或辅助鉴定青枯菌的产品中的应用； P3、 权利要求1所述引物对或权利要求2所述试剂 或试剂盒在鉴定或辅助鉴定待测菌是 否为青枯菌中的应用； P4、 权利要求1所述引物对在制备用于鉴定或辅助鉴定待测菌是否为青枯菌的产品中 的应用； P5、 权利要求1所述引物对或权利要求2所述试剂 或试剂盒在鉴定或辅助鉴定待测生物 样品中是否含有青枯菌中的应用； P6、 权利要求1所述引物对在制备用于鉴定或辅助鉴定待测生物样品中是否含有青枯 菌的产品中的应用； P7、 权利要求1所述引物对或权利要求2所述试剂 或试剂盒在检测待测生物样品中青枯 菌含量中的应用； P8、 权利要求1所述引物对在制备用于检测待测生物样品中青枯菌含量的产品中的应 用。 5.一种鉴定或辅助鉴定青枯菌的方法， 包括如下步骤： 以待测生物样品的基因组DNA为 模板， 用权利要求 1所述引物对进 行PCR扩增得到扩增产 物， 检测所述扩增产 物的大小， 如果 所述扩增产 物含有100 ‑250bp的DNA片段， 则所述待测生物样品为 或候选为青枯菌或者含有 或候选含有青枯菌； 如果所述扩增产物不含有100 ‑250bp的DNA片段， 则 所述待测生物样品 不为或候选不 为青枯菌或者 不含有或候选不含有青枯菌 。 6.根据权利要求5所述的方法， 其特征在于： 所述100 ‑250bp的DNA片段为192bp的DNA片 段； 进一步地， 所述19 2bp的DNA片段的核苷酸序列如SEQ  ID No.3所示。 7.一种鉴定或辅助鉴定青枯菌的方法， 包括如下步骤： 以待测生物样品的基因组DNA为 模板， 用权利要求 1所述引物对进行荧光定量PCR， 得到所述待测生物样品的Ct值， 如果Ct值 ≤33， 则所述待测生物样品为或候选为青枯菌或者含有或候选含有青枯菌； 如果Ct 值＞33， 则所述待测生物样品不 为或候选不 为青枯菌或者 不含有或候选不含有青枯菌 。 8.一种检测待测生物样本 中青枯菌含量的方法， 包括如下步骤： 基于权利要求1所述引 物对， 将青枯菌菌悬液浓度梯度稀释后进行荧光定量PCR， 得到青枯菌菌液浓度与Ct 值之间权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114686609 A 2的标准曲线； 然后以待测生物样品的基因组DNA为模板， 用权利要求1所述引物对进行荧光 定量PCR， 得到所述待测生物样品的Ct 值， 然后将所述待测生物样品的Ct值代入所述标准曲 线， 计算得到所述待测生物样本中青枯菌含量。 9.如下任一： (A1)SEQ ID No.3所示DNA分子； (A2)SEQ ID No.3所示DNA分子在鉴定或辅助鉴定青枯菌或制备用于鉴定或辅助鉴定 青枯菌的产品中的应用。 10.一种对植物进行青枯病防治的方法， 包括如下步骤： 采用权利要求8所述方法监测 植物根际土壤中青枯菌的含量， 选择在 植物根际土壤中青枯菌含量低于106cfu/g时进行青 枯病防治。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114686609 A 3