(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210330516.7 (22)申请日 2022.03.30 (71)申请人 中国农业科 学院作物科 学研究所 地址 100081 北京市海淀区中关村南大街 12号 (72)发明人 翁建峰　程子祥　吕香玲　李新海　 王建军　路明　宋新元　李明顺　 周志强　郝转芳　张德贵　雍洪军　 韩洁楠　 (74)专利代理 机构 北京智永 源知识产权代理事 务所(普通 合伙) 11967 专利代理师 庞永俊 (51)Int.Cl. C07K 14/415(2006.01) C12N 15/29(2006.01)C12N 15/11(2006.01) C12N 15/82(2006.01) C12N 5/10(2006.01) A01H 5/00(2018.01) A01H 6/46(2018.01) (54)发明名称 灰斑病抗性相关蛋白ZmPMT1及其编码基因 和应用 (57)摘要 本发明公开了 灰斑病抗性相关蛋白ZmPMT1， 来自于玉米自交系 齐319记为ZmPMT1qi319为如下 (a1)或(a2)， 来自于玉米自交系掖478记为 ZmPMT1ye478为如下(b1)或(b2)所示的蛋白质。 本 发明通过转基因技术， 获得了转ZmPMT1基因的玉 米植株， 验证了玉米基因ZmPMT1的抗灰斑病功 能。 分别增加两个蛋白的表达量均可以提高玉米 对灰斑病的抗性。 本发明对于培育玉米抗灰斑病 品种具有重要应用价 值。 权利要求书1页 说明书4页 序列表6页 附图2页 CN 114907461 A 2022.08.16 CN 114907461 A 1.灰斑病抗性相关蛋白ZmPMT1， 来自于玉米自交系齐319记为ZmP MT1qi319为如下(a1)或 (a2)， 来自于玉米自交系掖478记为ZmPMT1ye478为如下(b1)或(b2)： (a1)由序列表中的SEQ  ID NO： 1所示的氨基酸序列组成的蛋白质； (a2)在(a1)的N端或/和C端连接标签得到的融合蛋白质； (b1)由序列表中的SEQ  ID NO： 2所示的氨基酸序列组成的蛋白质； (b2)在(b1)的N端或/和C端连接标签得到的融合蛋白质。 2.编码权利要求1所述蛋白质的核酸分子ZmPMT1。 3.如权利要求2所述的核酸分子， 其特征在于， 所述ZmPMT1qi319和ZmPMT1ye478核酸分子为 如下(c1)或(c2)或(c 3)或(c4)的DNA分子： (c1)、 SEQ ID NO： 5所示的核苷酸； 或 (c2)、 SEQ ID NO： 6所示的核苷酸； 或 (c3)、 编码SEQ  ID NO： 1或SEQ  ID NO： 2所示氨基酸的核苷酸； 或 (c4)、 与SEQ  ID NO： 5或SEQ  ID NO： 6的互补序列在 严谨杂交条件能够进行杂交的核苷 酸， 该核苷酸所编码蛋白质具有ZmPMT1糖醇转 运功能。 4.扩增权利要求3所示核酸分子的引物， 其序列如SEQ  ID NO： 3和SEQ  ID NO： 4所示。 5.含有所述ZmPMT1基因的重组表达载体、 表达盒、 转基因细胞系、 转基因植物组织、 转 基因植物器官或重组微 生物。 6.含有所述ZmPMT1基因的重组表达载体， 其 为载体CUB ‑GFP‑3XFLG。 7.含有所述ZmPMT1基因的表达盒、 其自上游至下游依次包括玉米Ubi启动子、 ZmPMT1基 因和终止 子。 8.权利要求1所述蛋白质， 或权利要求2 ‑3所述的核酸分子， 或权利要求5所述的重组表 达载体、 表达盒、 转基因细胞系、 转基因玉米组织、 转基因玉米器官或重组微生物的应用， 为 如下(d1)或(d2)： (d1)调控玉米的抗病性； (d2)提高玉米的抗病性。 9.如权利要求8所述的应用， 其特 征在于， 所述 抗病性为玉米灰斑病的抗病性。 10.一种提高玉米灰斑病抗性的方法， 其特征在于， 所述方法是通过转入抗病基因 ZmPMT1获得抗玉米灰斑病的抗 性， 进而提高玉米抗灰斑病的能力。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114907461 A 2灰斑病抗性相关蛋白ZmPMT1及其编码基因和应用 技术领域 [0001]本发明涉及基因工程和抗病育种领域， 具体地说， 涉及灰斑病抗性相关蛋白 ZmPMT1及其编码基因和应用。 背景技术 [0002]玉米灰斑病是由尾孢菌引起的真菌性叶部病害， 在世界各地普遍发生， 在我国玉 米产区也危害较重(刘文奎等， 2013)。 最经济有效的防病途径是以种植抗病品种 为主的综 合防治， 因此抗灰斑病已经成为玉米品种选育的主要育种目标之一。 已有研究结果表明， 玉 米种质中抗灰斑病基因资源相对匮乏， 所以挖掘优异的抗灰斑病种质， 克隆种质中抗病基 因(徐秀德等， 2003； 董怀玉等， 2005； 吕香玲等， 2011； Lv等)， 解析抗病基因对病原菌的抗性 机制， 进而 借助分子育种技术进 行种质的抗性改良， 对培育抗灰斑病品种， 防治玉米灰斑病 具有重要意 义。 发明内容 [0003]本发明的目的是提供一种灰斑病抗 性相关蛋白ZmPMT1及其编码基因和应用。 [0004]本发明的目的可以采用以下的技 术措施来进一 步实现： [0005]为了实现本发明目的， 本发明首先提供了一种灰斑病抗性相关 蛋白 ZmPMT1， 来自 于玉米自交系齐319记为ZmPMT1qi319为如下(a1)或(a2)， 来自于玉米自交系掖478记为 ZmPMT1ye478为如下(b1)或(b2)： [0006](a1)由序列表中的SEQ  ID NO： 1所示的氨基酸序列组成的蛋白质； [0007](a2)在(a1)的N端或/和C端连接标签得到的融合蛋白质； [0008](b1)由序列表中的SEQ  ID NO： 2所示的氨基酸序列组成的蛋白质； [0009](b2)在(b1)的N端或/和C端连接标签得到的融合蛋白质。 [0010]ZmPMT1蛋白可 人工合成， 也可 先合成其编码基因， 再进行生物 表达得到 。 [0011]进一步地， 本发明还提供了一种编码上述蛋白质的核酸分子。 所述核酸分子可以 是DNA， 如cDNA、 基因 组DNA或重组DNA。 所述核酸分子也可以是RNA， 如mRNA或hnRNA等。 [0012]编码ZmPMT1蛋白的基因命名为ZmPMT1； 具体编码ZmPMT1qi319蛋白的基因命名为 ZmPMT1qi319； 和编码ZmPMT1ye478蛋白的基因命名为  ZmPMT1ye478基因。 [0013]进一步地， 在一优选实施例中， 扩增所示核酸分子的引物， 其序列如  SEQ ID NO： 3 和SEQ ID NO： 4所示。 [0014]所述ZmPMT1qi319和ZmPMT1ye478核酸分子为如下(c 1)或(c2)或(c3)  或(c4)的D NA分 子： [0015](c1)、 SEQ ID NO： 5所示的核苷酸； 或 [0016](c2)、 SEQ ID NO： 6所示的核苷酸； 或 [0017](c3)、 编码SEQ  ID NO： 1或SEQ  ID NO： 2所示氨基酸的核苷酸； 或 [0018](c4)、 与SEQ  ID NO： 5或SEQ ID NO： 6的互补序列在严谨杂交条件能够进行杂交的说　明　书 1/4 页 3 CN 114907461 A 3