(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210311432.9 (22)申请日 2022.03.28 (71)申请人 中国科学院南海 海洋研究所 地址 511458 广东省广州市南沙区海 滨路 1119号 (72)发明人 王艳红　张鑫　陈国良　罗鹏　 刘永奎　宋宏斌　陈廷　任春华　 江晓　周腾　胡超群　徐涛　 (74)专利代理 机构 广州科粤专利商标代理有限 公司 44001 专利代理师 陈洁娣　刘明星 (51)Int.Cl. C12Q 1/6888(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种与凡纳滨对虾抗病性状相关的SNP标 记、 检测引物及其应用 (57)摘要 本发明公开了一种与凡纳滨对虾抗病性状 相关的SNP标记、 检测引物及其应用。 本发明公开 的变异位点位于凡纳滨对虾Lv LTLC1基因的编码 区， 变异位点的碱基为T， 变异位点的基因型为TT 个体时， 在弧菌感染情况下存活率较高。 本发明 还公开了用于检测该变异位点的引物组合及其 育种应用方法。 在凡纳滨对虾抗病育种工作中， 可利用本发明公开的方法对后备亲本群体或者 对选育家系进行筛选， 及早排除在弧菌感染下易 感个体， 为快速选育凡纳滨对虾 抗病优良品种奠 定基础。 权利要求书1页 说明书6页 序列表1页 附图1页 CN 114540511 A 2022.05.27 CN 114540511 A 1.一种与凡纳滨对虾抗病性状相关的SNP标记， 其特征在于， 所述的SNP标记位于SEQ   ID NO.1所示序列5'端起第1 1碱基处， 碱基为C或T。 2.一种与凡纳滨 对虾抗病性状相关的SNP标记的检测引物， 其特 征在于， 所述引物为： L‑lectin‑F： 5'‑TGTAAAACGACGGCCAGTAAAGGTAGATAAGAAGGTTGCC‑3'； L‑lectin‑R： 5'‑CAGGAAACAGCTATGAC CGTTCTCAACTTAAAACTGTTTGGT‑3'。 3.鉴别权利要求1所述的SNP标记的产品在制备凡纳滨对虾抗病能力检测的试剂中应 用。 4.权利要求1所述的SNP标记或权利要求2所述的检测引物在制备凡纳滨对虾抗病能力 检测试剂盒中的应用。 5.一种凡纳滨对虾抗病能力检测试剂盒， 其特征在于， 包含权利要求2所述的检测引 物。 6.权利要求1所述的SNP标记、 权利要求2所述的检测引物或权利要求5所述的检测试剂 盒在凡纳滨 对虾抗病能力检测中的应用。 7.根据权利 要求6所述的应用， 其特征在于， 所述的SNP标记的基因型为TT时， 凡纳滨对 虾抗病能力高。 8.权利要求1所述的SNP标记、 权利要求2所述的检测引物或权利要求5所述的检测试剂 盒在凡纳滨 对虾分子标记辅助选择育种中的应用。 9.根据权利要求8所述的应用， 其特 征在于， 是在凡纳滨 对虾抗病品种选 育中的应用。 10.一种凡纳滨 对虾抗病品种的选 育方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： a)提取待测凡纳滨 对虾基因 组DNA； b)利用权利要求2所述 的检测引物L ‑lectin‑F/L‑lectin‑R对待测凡纳滨对虾基因组 DNA进行PCR扩增； c)对扩增产物进行测序， 确定权利要求1所述的SNP标记的基因型， 选择TT基因型个体 作为后备 亲本进行凡纳滨 对虾抗病品种选 育。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114540511 A 2一种与凡纳滨对虾 抗病性状相关的SNP标记、 检测引物及其 应用 技术领域 [0001]本发明属于分子标记技术领域， 具体涉及一种与凡纳滨对虾抗病性状相关的SNP 标记、 检测引物及其应用。 背景技术 [0002]凡纳滨对虾(Litopenaeus  vannamei)是最重要的养殖对虾， 占所有养殖对虾总产 量的80％以上(FAO,2020)。 截止到2021年我国凡纳滨对虾的年苗种生产量1.56万亿尾， 年 养殖产量突破18 0万吨， 凡纳滨对虾养殖产业已成为我国渔业 发展的支柱性产业， 良种扩繁 对于凡纳滨 对虾养殖业 意义重大。 [0003]然而我国凡纳滨对虾的人工养殖长期受到以白斑综合症病毒(WSSV)为代表的多 种病毒、 以副溶血弧菌(Vibrio  parahaemolyticus)和哈氏弧菌(V.harveyi)为代表的多种 细菌和以虾肝肠胞虫(Enterocytozoon  hepatopenaei)为代表的寄生虫严重困扰。 近年来 各类疾病的暴发给养殖业带来巨大 的经济损 。 因此， 进行抗病育种 是我国凡纳滨对虾养殖 产业可持续发展的迫切需求。 [0004]凝集素作为模式识别蛋白在动物中被广泛报道。 在无脊椎动物中， 凝集素在先天 免疫反应过程中发挥重要作用， 体内的细菌清除实验结果发现LvLTLC1参与了凡纳滨对虾 的抗弧菌免疫反应， 在 对虾的內源免疫过程中发挥重要作用。 因此， 本发明针对凡纳 滨对虾 LvLTLC1 基因开发与凡纳滨对虾抗病相关 的SNP标记， 为凡纳滨对虾抗病辅助选育优良分 子标记， 以此提高凡纳滨 对虾抗病品种的选 育效率。 发明内容 [0005]本发明旨在提供一种与凡纳滨对虾抗病性状相关的LvLTLC 1基因上的S NP标记、 检 测引物及其应用。 该分子标记可应用于凡纳滨对虾抗病性状的分子标记辅助选择育种， 为 抗病性状相关的SNP变异位点提供有用信息， 从而提高凡纳滨对虾抗病优良品种的选育效 率。 [0006]为了实现上述发明目的， 本发明以攻毒之后死亡的和存活个体的凡纳滨对虾基 因 组DNA 为模板， 通过设计引物、 PCR扩增来检测这些模板和LvLTLC1基因所包含的每一个SNP 位点的基因型， 最后通过关联分析， 确 定抗病相关的SNP标记， 并提供SNP位点扩增引物， 建 立后备亲本群体或者备选家系分子选育的技术体系， 为加快凡纳 滨对虾抗病优良品种的选 育奠定基础。 [0007]本发明的第一个目的是提供一种与凡纳滨对虾抗病性状相关的SNP标记， 所述的 SNP 标记位于SEQ  ID NO.1所示序列， 自5'端起第11位碱基处， 碱基为C或T， 用Y表示(C/T)。 该变异位点的基因型与凡纳滨对虾在弧菌抗病性状显著相关。 SEQ  ID NO.1的碱基序列为：   5'‑GCCTGTTCTA(C/T)GTTAAACAGA‑3'。 [0008]本发明的第二个目的是提供一种与凡纳滨对虾抗病性状相关的SNP标记的检测引说　明　书 1/6 页 3 CN 114540511 A 3