(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210310184.6 (22)申请日 2022.03.28 (71)申请人 安徽农业大 学 地址 230036 安徽省合肥市长江西路13 0号 (72)发明人 韦朝领　张操　刘升锐　陈辉　 张红秀　陶玲玲　庭玉杰　 (74)专利代理 机构 北京方圆嘉 禾知识产权代理 有限公司 1 1385 专利代理师 张秋菊 (51)Int.Cl. C12Q 1/6895(2018.01) C12Q 1/6858(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 用于鉴定凫峰1号茶树新品系的SSR分子标 记组合、 指纹图谱及其应用 (57)摘要 本发明提供了用于鉴定凫峰1号茶树新品系 的SSR分子标记组合、 指纹图谱及其应用， 属于分 子鉴定技术领域； 所述用于鉴定凫峰1号茶树新 品系的SSR分子标记组合， 包括CsL02、 CsL06、 CsL15、 CsL20、 CsL67、 CsL68和CsL69。 本发明所述 SSR分子标记组合中的SSR分子标记是茶树基因 组中比较丰富且多态性较高的微卫星类型。 基于 本发明的SSR分子标记组合设计得到的引物组合 能够从92种茶叶中准确鉴定凫峰1号， 实现了对 凫峰1号新品系的精准 鉴定。 权利要求书2页 说明书15页 序列表7页 附图2页 CN 114574622 A 2022.06.03 CN 114574622 A 1.用于鉴定凫峰1号茶树新 品系的SSR分子标记组合， 包括CsL02、 CsL06、 CsL15、 CsL20、 CsL67、 CsL68和CsL69； 所述CsL02的核苷酸序列如SEQ  ID NO.1所示； 所述CsL02标记的SSR位点5 ’端的侧翼序 列的核苷酸序列如SEQ  ID NO.2所示； 所述CsL02标记的SSR位点3 ’端的侧翼序列的核苷酸 序列如SEQ  ID NO.3所示； 所述CsL06的核苷酸序列如SEQ  ID NO.4所示； 所述CsL06标记的SSR位点5 ’端的侧翼序 列的核苷酸序列如SEQ  ID NO.5所示； 所述CsL06标记的SSR位点3 ’端的侧翼序列的核苷酸 序列如SEQ  ID NO.6所示； 所述CsL15的核苷酸序列如SEQ  ID NO.7所示； 所述CsL15标记的SSR位点5 ’端的侧翼序 列的核苷酸序列如SEQ  ID NO.8所示； 所述CsL15标记的SSR位点3 ’端的侧翼序列的核苷酸 序列如SEQ  ID NO.9所示； 所述CsL20的核苷酸序列如SEQ  ID NO.10所示； 所述CsL20标记的SSR位点5 ’端的侧翼 序列的核苷 酸序列如SEQ  ID NO.11所示； 所述CsL20标记的SSR位点3 ’端的侧翼序列的核苷 酸序列如SEQ  ID NO.12所示； 所述CsL67的核苷酸序列如SEQ  ID NO.13所示； 所述CsL67标记的SSR位点5 ’端的侧翼 序列的核苷 酸序列如SEQ  ID NO.14所示； 所述CsL67标记的SSR位点3 ’端的侧翼序列的核苷 酸序列如SEQ  ID NO.15所示； 所述CsL68的核苷酸序列如SEQ  ID NO.16所示； 所述CsL68标记的SSR位点5 ’端的侧翼 序列的核苷 酸序列如SEQ  ID NO.17所示； 所述CsL68标记的SSR位点3 ’端的侧翼序列的核苷 酸序列如SEQ  ID NO.18所示； 所述CsL69的核苷酸序列如SEQ  ID NO.19所示； 所述CsL69标记的SSR位点5 ’端的侧翼 序列的核苷 酸序列如SEQ  ID NO.20所示； 所述CsL69标记的SSR位点3 ’端的侧翼序列的核苷 酸序列如SEQ  ID NO.21所示。 2.用于检测权利要求1所述SSR分子标记组合的引物组合， 包括第一引物对、 第二引物 对、 第三引物对、 第四引物对、 第五引物对、 第六引物对、 和第七引物对； 所述第一引物对的核苷酸序列如SEQ  ID NO.22和SEQ ID NO.23所示； 所述第二引物对的核苷酸序列如SEQ  ID NO.24和SEQ  ID NO.25所示； 所述第三引物对的核苷酸序列如SEQ  ID NO.26和SEQ  ID NO.27所示； 所述第四引物对的核苷酸序列如SEQ  ID NO.28和SEQ  ID NO.29所示； 所述第五引物对的核苷酸序列如SEQ  ID NO.30和SEQ ID NO.31所示； 所述第六引物对的核苷酸序列如SEQ  ID NO.32和SEQ  ID NO.33所示； 所述第七引物对的核苷酸序列如SEQ  ID NO.34和SEQ  ID NO.35所示。 3.一种用于鉴定凫峰1号茶树 新品系的指纹图谱的构建方法， 包括以下步骤： 以已知品种的不同茶树株系、 品系或品种的基因组DNA为模版， 分别利用权利要求2所 述引物组合进行PCR扩增， 得到扩增产物， 对扩增产物进行全自动毛细管电泳， 以所述全自 动毛细管电泳的结果作为茶树样品的身份信息， 得到指纹图谱； 所述茶树的品种包括凫峰1 号。 4.权利要求1所述的SSR分子标记组合、 权利要求2所述的引物 组或者权利要求3所述构 建方法构建得到的指纹图谱在鉴定凫峰1号和/或茶树辅助育种中的应用。权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114574622 A 25.一种鉴定凫峰1号茶树 新品系的方法， 包括以下步骤： 1)提取待测茶树的基因 组DNA； 2)以所述待测茶树的基因组DNA为模板， 利用权利 要求2所述引物组合进行PCR扩增， 扩 增产物进行全自动毛细管电泳， 得到待测茶树的电泳结果； 3)将待测茶树的电泳结果和权利要求3所述构建方法构建得到的指纹图谱进行对照， 若待测茶树的条带大小和凫峰1号SSR分子标记位点完全一致， 或者在 存在差异 位点的情况 下， 待测茶树的条带大小和凫峰1号SSR分子标记 位点的差异位点数均≤2b p， 则待测茶树为 凫峰1号， 否则不为凫峰1号； 所述SSR分子标记为权利要求1中所述SSR分子标记组合中的 SSR分子标记。 6.根据权利要求5所述的方法， 其特征在于， 步骤2)中所述PCR扩增的体系以10 μl计， 包 括50ng/ μl的模板1 μl、 10 μM的上下游引物各0.5 μl、 2 ×Es Taq MasterMix(Dye)5 μl和ddH2O  3 μl。 7.根据权利要求5或6所述的方法， 其特征在于， 步骤2)中所述PCR扩增的程序为： 94℃ 预变性5mi n； 94℃变性3 0s， 50～60℃退火3 0s， 72℃延伸45s， 3 5个循环； 72℃延伸10mi n。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114574622 A 3