(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210313395.5 (22)申请日 2022.03.28 (71)申请人 浙江省农业科 学院 地址 310021 浙江省杭州市石桥路198号 (72)发明人 王建升　沈钰森　顾宏辉　虞慧芳　 盛小光　赵振卿　 (74)专利代理 机构 成都知棋知识产权代理事务 所(普通合伙) 51325 专利代理师 马超前 (51)Int.Cl. C12Q 1/6895(2018.01) C12N 15/11(2006.01) C12Q 1/6858(2018.01) (54)发明名称 与西兰花中萝卜硫苷含量相关的SNP标记及 引物和应用 (57)摘要 本发明公开了一种与西兰花中萝卜硫苷含 量相关的SNP标记及引物和应用， 该SNP标记位为 GSL090标记和GSL104标记； 其中， GSL090的标记 位于西兰花MYB28基因BolC7t45028H的第3个外 显子中， 在西兰花HDEM参考基因组C7染色体第 48138625位置的碱基C变成G， 对应编码的氨 基酸 由组氨酸变成天冬氨酸， 使 得萝卜硫苷的含量显 著增加； 编号为GSL104的标记位于西兰花MYB28 基因BolC9t53733H的第3个外显子中， 在西兰花 HDEM参考基因组C9染色体第4986869位置的碱基 A变成G， 对应编码的氨 基酸由天冬氨酸变成甘氨 酸， 使得萝卜硫苷的含量显著增 加。 权利要求书1页 说明书6页 序列表2页 附图3页 CN 114836561 A 2022.08.02 CN 114836561 A 1.与西兰花中萝卜硫苷含量相关的SNP标记， 其特征在于， 该SNP标记位为GSL090标记 和GSL104标记； 其中， GSL090标记位于西 兰花MYB28基因BolC 7t45028H的第3个外显子中， 其 核苷酸序列为SEQ  ID NO.9， 具有C/G多态性； GSL104标记位于西兰花MYB28基因 BolC9t53733H的第3个外 显子中， 其核苷酸序列为SEQ  ID NO.10， 具有A/G多态性。 2.与西兰花中萝卜硫苷含量相关的SNP标记引 物， 其特征在于， SNP标记位为GSL090标 记和GSL104标记； 其中GSL090标记的引物的核苷酸序列如SEQ  ID NO.1‑3所示， GSL104标记 的引物的核苷酸序列如SEQ  ID NO.4‑6所示。 3.根据权利要求2所述的SNP标记引物， 其特征在于， 核苷酸序列如SEQ  ID NO.1‑2和 SEQ ID NO.4‑5所示的引物的5'端分别增 加通用接 头序列。 4.根据权利要求3所述的SNP标记引物， 其特征在于， 核苷酸序列如SEQ  ID NO.1和SEQ   ID NO.4所示的引物的5'端增加核苷酸序列如SEQ  ID NO.7所示的通用接头序列； 核苷酸序 列如SEQ ID NO.2和SEQ  ID NO.5所示的引物的5'端增加核苷酸序列如SEQ  ID NO.8所示的 通用接头序列。 5.如权利要求2 ‑4中任意一项所述的SNP标记引物的应用， 其特征在于， 该应用选自以 下任意一种： (1)在西兰花分子标记辅助育种方面的应用； (2)在西兰花改良育种中的应用； (3)在西兰花中萝卜硫苷含量 性状鉴定中的应用； (4)在研究西兰花中萝卜硫苷含量方面的应用。 6.一种筛选高萝卜硫苷含量西兰花的方法， 其特征在于， 该方法包含： 采用如权利要求 2‑4中任意一项所述的SNP标记引物对待检测西兰花通过KASP技术进行基因分型， 筛选 GSL090标记的基因型为CG且GSL104标记的基因型为AG的西兰花 为高萝卜硫苷含量西兰花。 7.根据权利要求6所述的方法， 其特征在于， 所述KASP技术， 以待检测西兰花的基因组 DNA为DNA模板， 与如权利要求2 ‑4中任意一项所述的SNP标记引物和KASP  Mastermix进行 PCR扩增。 8.根据权利要求7所述的方法， 其特征在于， 所述KASP  Mastermix包含： FRET  cassette 荧光引物、 ROX内参染料、 KlearTaq  DNA聚合酶、 dNTP和MgCl2。 9.含有如权利要求2 ‑4中任意一项所述的SNP标记引物的KAS P分型检测试剂盒。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114836561 A 2与西兰花 中萝卜硫苷含量相关的SNP标记及引物和应用 技术领域 [0001]本发明涉及一种S NP标记， 具体涉及一种与西兰花中萝卜硫苷含量相关的S NP标记 及引物和应用。 背景技术 [0002]西兰花中一些芥子油苷降解产生的异硫代腈酸盐具有人体有益的生物活性， 特别 是萝卜硫苷降解产生的异硫代腈酸盐即萝卜硫素， 它不仅可以降低多种癌症的发生， 如结 肠癌、 胰腺癌、 膀胱癌等， 还 可以降低心血管疾病的发生。 截至2020年初， 美国临床试验 官方 网站Clinicaltrials gov已有大量涉及萝卜硫苷或萝卜硫素的临床试验。 [0003]十字花科植物中芥子油苷的含量受基因型和环境共同决定。 MYB28是十字花科植 物中调控脂肪族芥子油 苷生物合成的关键转录因子。 目前， 我国学者周永明团队通过基因 序列多态性分析和基因表达分析， 发现油菜中A03染色体上一个与拟南芥MYB28同源基因 BnaA03g40190D， 该基因位点的变异在种 子低硫苷群体中， 可解释叶片硫苷含量30.62％的 变异。 英国科学家发现， 来自西 兰花野生种B rassica villosa中C02染色体上的BolMYB 28单 核苷酸变异导 致了高萝卜硫苷的表型， 并利用该变异获得了高萝卜硫苷品种 ‑ [0004]然而， 通过直接检测植物中萝卜硫苷组分费时费力， 育种效率低。 发明内容 [0005]本发明的目的是提供一种与西兰花中萝卜硫苷含量相关的SNP标记及引物和应 用， 解决了传统液相检测法西兰花中萝卜硫苷检测时间长的问题， 通过KAPS技术快速对西 兰花进行检测， 能够成功应用于西兰花高萝卜硫苷含量育种中。 [0006]为了达到上述目的， 本发明提供了与西兰花中萝卜硫苷含量相关的SNP标记， 该 SNP标记位为GSL090标记和GSL104标记； 其中， GSL090标记位于西兰花MYB28基因 BolC7t45028H的第3个外显子中， 其核苷酸序列为SEQ  ID NO.9， 具有G/C多态性(序列第51 位)； GSL104标记位于西兰花MYB28基因BolC9t53733H的第3个外显子中， 其核苷酸序列为 SEQ ID NO.10， 具有G/A多态性(序列第51位)。 [0007]GSL090标记的核苷酸序列(SEQ  ID NO.9)如下 所示： [0008]ATGGTCAAGAAGATAATTTGACCAACCCTCAAAATTTTCAAATATATTGTCTCGATCATCAACGCTTG TTGATGAGACT TCTTGAGACACATCG GACATAA； [0009]GSL104标记的核苷酸序列(SEQ  ID NO.10)如下 所示： [0010]CCAAACAACGTTTTACCCTGAGAATGAAATGAATACTACTTCTGATCTCGATATAGATCAGGACTACT TCTCACAT TTTCTCGAAAATTTCGGCAGAGATG。 [0011]本发明的另一目的是提供与西兰花中萝卜硫苷含量相关的S NP标记引物， S NP标记 位为GSL090标记和GSL104标记； 其中GSL090标记的引物的核苷酸序列如SEQ  ID NO.1‑3所 示， GSL104标记的引物的核苷酸序列如SEQ  ID NO.4‑6所示。 [0012]优选地， 核苷酸序列如S EQ ID NO.1‑2和SEQ ID NO.4‑5所示的引物的5'端分别增说　明　书 1/6 页 3 CN 114836561 A 3