(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210321680.1 (22)申请日 2022.03.25 (71)申请人 浙江省淡水 水产研究所 地址 313001 浙江省湖州市杭长桥 南路999 号 (72)发明人 李喜莲　高强　慎佩晶　孟纪伦　 蒋文枰　徐洋　程海华　 (74)专利代理 机构 北京东方盛凡知识产权代理 事务所(普通 合伙) 11562 专利代理师 张换君 (51)Int.Cl. C12Q 1/6888(2018.01) C12Q 1/686(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种鉴定罗氏沼虾中铁壳虾个体的引物及 其应用 (57)摘要 本发明公开了一种鉴定罗氏沼虾中铁壳虾 个体的引物及其应用， 属于SSR引物技术领域， 该 鉴定罗氏沼虾中铁壳虾个体的引物， 包括： MRMSSR‑7AF： CAACTGGTCACGCAAATCAA； MRMSSR ‑ 7AR： GAGTTCAGCCTCATACCCCA。 本发明提供一种鉴 定罗氏沼虾中铁壳虾个体的引物， 利用该引物对 罗氏沼虾肌肉组织进行检测， 便于采样， 可将检 测虾的时间提前， 甚至在虾苗阶段就可以将铁壳 虾个体检测出来， 可缩短铁壳虾的养殖时间， 节 省养殖的人力、 物力和后期投入。 权利要求书1页 说明书9页 序列表1页 附图6页 CN 114561479 A 2022.05.31 CN 114561479 A 1.一种鉴定罗氏沼虾中铁壳虾个 体的引物， 其特 征在于， 包括： MRMSSR‑7AF： CAACTGGTCACGCA AATCAA； MRMSSR‑7AR： GAGT TCAGCCTCATACCCCA。 2.一种试剂盒， 其特 征在于， 包括权利要求1所述的引物。 3.一种检测罗氏沼虾中铁壳虾个 体的方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： (1)提取待测罗氏沼虾的肌肉组织RNA； (2)对所得RNA进行cDNA反转录； (3)利用权利要求1所述的引物进行PCR扩增， 获得扩增产物； (4)对所得扩增产物进行毛细管电泳， 根据电泳条带判断待测罗氏沼虾中是否为铁壳 虾个体。 4.根据权利 要求3所述的方法， 其特征在于， 在步骤(3)中， 所述PCR扩增体系包括： DNA1 μl， 正向荧光引物(10 μM)1μl， 反向普通引物(10 μM)1μl， 10*buffer2 μl， dNTP  0.5 μl， Taq酶 0.5 μl， ddH2O 14 μl。 5.根据权利要求3所述的方法， 其特征在于， 在步骤(3)中， 所述PCR扩增反应程序 为： 95 ℃5min， 95℃30s、 62 ‑52℃30s、 72℃30s共10个循环， 95℃30s、 52℃30s、 72℃30s共25个循 环， 72℃7mi n。 6.根据权利要求3所述的方法， 其特征在于， 所述电泳条带中存在双条带说明待测罗氏 沼虾为铁壳虾个 体。 7.一种权利要求1所述的鉴定罗氏沼虾中铁壳虾个体的引物或权利要求2所述的试剂 盒在鉴定罗氏沼虾中铁壳虾个 体方面的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114561479 A 2一种鉴定罗氏沼虾 中铁壳虾个体的引物及其应用 技术领域 [0001]本发明涉及SSR引 物技术领域， 特别是涉及一种鉴定罗氏沼虾中铁壳虾个体 的引 物及其应用。 背景技术 [0002]罗氏沼虾是我国重要淡水养殖虾种， 近年来出现生长阻滞现象， 相同密度相同饲 养条件下， 生长阻滞个体平均体重远小于正常生长个体， 渔民称之为 “铁壳虾”， 近年来“铁 壳虾”现象平均发生率高达三 成以上， 严重影响经济效益。 “铁壳虾”生长缓慢的现象在苗种 繁育及大棚培育期间并不明显， 通常在大塘养殖一个多月后， 生长缓慢症状相继出现， 主要 表现为生长明显变慢， 虾壳变硬， 雌虾5公分、 雄虾6公分左右 性腺发育成熟， 雌虾抱卵、 雄虾 长出巨大的蓝 色大鳌， 此后生长 极为缓慢， 上市季节产量不及正常养殖池塘的一半， 严重影 响渔民收益， 阻碍了罗氏沼虾养殖业的健康发展。 由于长期以来缺乏罗氏沼虾 “铁壳虾”的 判断和检测方法， 渔民在购买虾 苗时无法判断后 期出现“铁壳虾”的概率， 增大了养殖风险， 因此开发一种罗氏沼虾 “铁壳虾”的检测方法迫在眉睫。 发明内容 [0003]本发明的目的是提供一种鉴定罗氏沼虾中铁壳虾个体的引物及 其应用， 以解决上 述现有技术存在的问题， 辅助渔民在购买虾 苗时对其进 行质量检测， 规避 “铁壳虾”风险， 提 高养殖收益， 同时有利于罗氏沼虾养殖业的健康可持续发展。 [0004]为实现上述目的， 本发明提供了如下 方案： [0005]本发明提供一种鉴定罗氏沼虾中铁壳虾个 体的引物， 包括： [0006]MRMSSR‑7AF： CAACTGGTCACGCA AATCAA； [0007]MRMSSR‑7AR： GAGT TCAGCCTCATACCCCA。 [0008]本发明还提供一种试剂盒， 包括如上 所述的引物。 [0009]本发明还提供一种检测罗氏沼虾中铁壳虾个 体的方法， 包括以下步骤： [0010](1)提取待测罗氏沼虾的肌肉组织RNA； [0011](2)对所得RNA进行cDNA反转录； [0012](3)利用如上 所述的引物进行PCR扩增， 获得扩增产物； [0013](4)对所得扩增产物进行毛细管电泳， 根据电泳条带判断待测罗氏沼虾中是否为 铁壳虾个 体。 [0014]进一步地， 在步骤(3)中， 所述PCR扩增体系包括： DNA1μl， 正向荧光引物(10 μM)1μ l， 反向普通引物(10 μM)1 μl， 10 *buffer 2 μl， dNTP 0.5 μl， Taq酶0.5 μl， d dH2O 14 μl。 [0015]进一步地， 在步骤(3)中， 所述PCR扩增反应程序为： 95℃  5min， 95℃  30s、 62‑52℃  30s、 72℃ 30s共10个 循环， 95℃  30s、 52℃ 30s、 72℃ 30s共25个 循环， 72℃  7min。 [0016]进一步地， 所述电泳条 带中存在 双条带说明待测罗氏沼虾为铁壳虾个 体。 [0017]本发明还提供一种如上所述的鉴定罗氏沼虾中铁壳虾个体的引物或如上所述的说　明　书 1/9 页 3 CN 114561479 A 3