(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210304289.0 (22)申请日 2022.03.25 (71)申请人 江苏大学 地址 212000 江苏省镇江市学府路3 01号 (72)发明人 许文荣　王冬丽　钱晖　李荣　 张帆　邱双洋　黄晓娟　 (74)专利代理 机构 北京高沃 律师事务所 1 1569 专利代理师 苏士莹 (51)Int.Cl. C12Q 1/6886(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种用于胃癌的诊断和预后监测的血浆外 泌体circRNA标志 物及其应用 (57)摘要 本发明提供了一种用于胃癌 的诊断和预后 监测的血浆外泌体circRNA标志物及其应用， 属 于分子诊断技术领域。 本发明首次在胃癌血浆外 泌体中发现了hsa_circ_0006853并确定了其对 胃癌的诊断价值。 本发明还提供了血浆外泌体 circRNA的提取试剂盒， 能够从血浆中方便、 准确 的提取和检测外泌体circRNA， 有利于实验室和 临床对血浆外泌体中的circRNA进行分析和应 用。 通过实验验证， 本发明所述的标志物能够对 胃癌进行有效的诊断和预后监测， 并在一定程度 上能够鉴别萎缩性胃炎患者， 为临床的早期诊断 和治疗靶点提供了重要依据。 权利要求书1页 说明书6页 序列表1页 附图3页 CN 114774541 A 2022.07.22 CN 114774541 A 1.一种血浆外泌体circRNA标志物的提取试剂盒， 其特征在于， 包括提取血浆外泌体的 试剂和提取外泌体circRNA的试剂； 所述提取血浆外泌体的试剂包括ExoQiuck  Plasma prep and Exosome   precipitati on kit； 所述提取外泌体circRNA的试剂包括单独包装的： miRNe asy Serum/plasmakit、 氯仿和 无水乙醇。 2.一种利用权利要求1所述提取试剂盒提取得到的用于胃癌的诊断和预后 监测的血浆 外泌体circRNA标志物， 其特征在于， 所述血浆外泌体circRNA标志物包括hsa_circ_ 0006853， 所述hsa_circ_0 006853的核酸序列如SEQ  ID NO.1所示。 3.一种检测权利要求2所述血浆外泌体circRNA标志物的试剂在制备胃癌诊断工具中 的应用。 4.根据权利要求3所述应用， 其特征在于， 所述试剂包括针对hsa_circ_0006853设计的 特异性引物对。 5.根据权利要求4所述应用， 其特征在于， 所述特异性引 物对包括SEQ  ID NO.2所示的 上游引物和SEQ  ID NO.3所示的下游引物。 6.一种胃癌诊断试剂盒， 其特征在于， 包括SEQ  ID NO.2所示的上游引物和SEQ  ID  NO.3所示的下游引物。 7.根据权利要求6所述试剂盒， 其特 征在于， 还 包括构建qRT ‑PCR体系的其 他试剂。 8.根据权利要求6所述试剂盒， 其特 征在于， 还 包括内参基因β ‑Actin的引物对。 9.根据权利 要求8所述试剂盒， 其特征在于， 所述内参基因β ‑Actin的引物对， 上游引物 如SEQ ID NO.4所示， 下游引物如SEQ  ID NO.5所示。 10.根据权利要求6所述试剂盒， 其特 征在于， 还 包括反转录试剂。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114774541 A 2一种用于胃癌的诊断和预后监测的血浆外泌体circRNA标志 物及其应用 技术领域 [0001]本发明属于分子诊断技术领域， 具体涉及 一种用于胃癌的诊断和预后监测的血浆 外泌体circRNA标志 物及其应用。 背景技术 [0002]胃癌(Gastric  cancer， GC)是世界范围内最常见的一种恶性肿瘤， 胃癌的发生发 展是一个多因素、 多细胞、 多步骤的过程， 由于胃癌早期缺乏特异性症状， 绝大多数确诊断 病例处于晚期， 预后较差， 存在广泛的转移和高复发。 且现有的治疗方法如化疗、 放疗不仅 副作用强且易发生耐药。 因此， 进一步探寻有助于 胃癌早期诊断和预后判断且无创的相关 分子标志 物是目前亟需解决的重要问题。 [0003]环状RNA(circRNA)是一类由前体mRNA反向剪接产生的闭合环状非编码RNA分子， 随着RNA深度测序技术和生物信息学的最新进展， 已发现大量circRNA在哺乳动物细胞中表 达丰富。 而circRNA在真核生物中具有不同物种的保守性、 高稳定性、 在 组织和发育阶段特 异性表达等特点， 目前研 究证明circRNA可作为miRNA海绵， 与蛋白结合、 翻译 蛋白、 调节亲 本基因转录等功能， 并能被运输 到体液中， 具有作为 生物标志 物的巨大潜力。 [0004]外泌体(Exosome)是一类直径30～100nm的细胞外囊泡， 由多种细胞分泌， 几乎存 在于所有的体液当中， 通过其携带的蛋白质、 脂质、 核酸核代谢产 物等来发挥细胞间通讯功 能， 参与免疫应答、 病毒感染、 代谢和心血管疾病、 神经退行性疾病以及癌症进展等多种生 理和病理过程。 研究证实CircRNAs富含在外泌体中， 通过外泌体开始循环并到达受体细胞， 从而实现其各种生物学功能， circRNA作为一种稳定性较好生物标志物因其能在外泌体中 大量富集， 因此研究循环体液中外泌体circRNA标志 物对疾病的诊断具有重要意 义。 [0005]目前， 临床上现有的胃癌诊断标志物如CEA、 CA199、 CA724等缺乏特异性， 对临床真 正起到辅助诊断的肿瘤标志物少， 所以急需开发一种快速、 准确的检测血浆中外泌体 circRNA的方法。 发明内容 [0006]有鉴于此， 本发明的目的在于提供一种用于胃癌的诊断和预后监测的血浆外泌体 circRNA标志物及其应用， 所述血浆外泌体circRNA标志物能够对胃癌进行有效的诊断和预 后监测， 并在一定程度上能够鉴别萎缩性胃炎患者， 为临床的早期诊断和治疗靶点提供了 重要依据。 [0007]为了实现上述发明目的， 本发明提供以下技 术方案： [0008]本发明提供了一种血浆外泌体circRNA的提取试剂盒， 包括提取血浆外泌体的试 剂和提取外泌体circRNA的试剂； [0009]所述提取血浆外泌体的试剂包括ExoQiuck  Plasma prep and Exosome   precipitati onkit；说　明　书 1/6 页 3 CN 114774541 A 3