(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210305666.2 (22)申请日 2022.03.25 (71)申请人 湖南中晟全肽生 化有限公司 地址 412000 湖南省株洲市 云龙示范区云 龙大道1769号现代服务业总部园5号 栋 (72)发明人 王登　刘惠清　王新波　李义龙　 刘文革　李向群　 (74)专利代理 机构 江苏圣典律师事务所 32 237 专利代理师 肖明芳 (51)Int.Cl. C07K 14/00(2006.01) C12N 15/11(2006.01) G01N 33/58(2006.01) G01N 33/68(2006.01)G01N 21/64(2006.01) A61K 38/16(2006.01) A61P 35/00(2006.01) A61P 31/12(2006.01) (54)发明名称 抑制TIGIT与CD15 5结合的多肽 及其应用 (57)摘要 本发明公开了一系列对TIGIT与CD155结合 具有抑制作用的的多肽， 本发明应用高通量药物 筛 选 技 术 ， 从 大 型 环 肽 库中 筛 选 到 名为 PL01201001的多肽， 具有能够抑制T IGIT与CD155 结合的作用。 PL01201001是含有80个氨基酸环 肽， 通过解压缩技术得到一系列衍生的小环肽和 线性肽， 都具有抑制TIGIT与CD155结合的作用。 PL01201001及其一系列多肽能够作为TI GIT抑制 剂， 进一步开发出针对与TIGIT相关肿瘤的疾病 的多肽类新药。 权利要求书1页 说明书6页 序列表2页 附图2页 CN 115043910 A 2022.09.13 CN 115043910 A 1.一种抑制TIGIT与CD155结合的多肽， 其特征在于， 其氨基酸序列如SEQ  ID NO.1至 SEQ ID NO.5中的任意一条所示， 其中， SEQ  ID NO.1的第1个氨 基酸和第80个氨基酸通肽键 成环。 2.根据权利要求1所述的多肽， 其特征在于， 其中所述TIGIT及CD155是人TIGIT和人 CD155。 3.一种核苷酸， 其特 征在于， 其 为编码权利要求1所述的任一多肽的DNA。 4.权利要求1所述的任一多肽在制备用于治疗与TIGIT相关的肿瘤、 病毒的慢性感染的 药物中的应用。 5.一种药物组合物， 其特征在于， 包括权利要求1所述的任一多肽和药学上可接受 的载 体。 6.一种抑制TIGIT与CD155结合的多肽的筛选方法， 其特征在于， 以链霉亲和素 ‑Eu作为 荧光供体， Fc ‑Alexa Fluor647标记的山羊抗人IgG作为荧光受体， 以生物素标记TIGIT和偶 联人IgG Fc标签的CD155作为靶标蛋 白， 当TIGIT与CD155结合后， 加入荧光供体和受体， 荧 光供体链霉亲和素 ‑Eu与TIGIT上的生物素结合， 荧光受体Fc ‑Alexa Fluor647标记的山羊 抗人IgG与CD 155上的Fc  标签结合， 使得荧光供体Eu与荧光受体Alexa  Fluor647靠近发生 FRET， 然后加入待测多肽， 观察FRET信号是否减弱。 7.根据权利要求6所述的筛选方法， 其特征在于， FRET体系中， 生物素标记TIGIT的浓度 为1nM~16nM， 偶联 人IgG Fc标签的CD15 5的浓度为1nM~16nM。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115043910 A 2抑制TIGIT与C D155结合的多肽及其应用 技术领域 [0001]本发明属于生物医学技 术领域， 具体涉及TIGIT与CD15 5抑制剂的发现及其应用。 背景技术 [0002]T细胞介导的适应性免疫应答在分子层面需要两个信号， 一是T细胞受体(TCR,T   cell receptor)对抗原的识别， 即经由结合抗原呈递细胞上的主要组织相容性复合体   (MHC)的方式； 二是抗原呈递细胞上的共刺激分子作用于T细胞上的共刺激受体。 T  细胞上 的共抑制受体(又称 免疫检查点受体)则抑制通过TCR信号激发的T细胞的活化， 导致T细胞 处于失能和耐受状态(Joller  N.and Kuchroo V.K.Tim‑3,Lag‑3,and TIGIT. Curr Top  Microbiol  Immunol.2017； 410:127 –156)。 免疫检查点受体可以在三个方面调节T细胞的免 疫反应， 即直接抑制效应T细胞的活化， 促进Treg细胞的负调控功能， 以及调节抗原呈递细 胞的功能以阻止T细胞的活化(Anderson  A.C.,Joller  N.and Kuchroo  V.K.Lag‑3,Tim‑3, and TIGIT co‑inhibitory  receptors  with specialized  functions  in immune   regulati on.Immunity.2016 May 17； 44(5):989 –1004)。 [0003]生理状态下， 免疫检查点受体分子对免疫系统的平衡状态的维持有着关键的作 用， 其可以调控免疫反应的强度或持续时间的长短， 防止对正常组织的病理性损害。 免疫检 查点的基因变异和自身免疫性疾病相关联(陆思芸， 林峰， 吴炯.一种新的免疫检查点分 子—TIM‑3.生物产业技术.2017.05(9月):64 ‑68)。 在肿瘤微环境中， 免疫检查点对免疫反 应的抑制作用被放大， 导致T细胞耗能衰竭， 是肿瘤细胞逃脱免疫攻击的手段。 近年来， 免疫 检查点受体在癌症和病毒的慢性感染中作为治疗靶点越来越受到重视。 有文献报道了目前 热门和新涌现的一些免疫检查点受体分子和它们相应的配体分子(Qing  S.,Xu L.P., et.al.Novel  immune checkpoint targets:moving  beyond PD‑1and CTLA ‑4.Molecular   Cancer,2019； 18 :155)， 如PD‑1,CTLA‑4,TIM‑3,LAG‑3,TIGIT, VISTA等。 [0004]TIGIT(T cell immunoglobulin  and ITIM domain)最早是通过生物信息分析的 方法发现， 是和CD28属于同一家族的细胞表面蛋白受体分子。 TIGIT的表达局限于淋巴细 胞， 主要在激活的T细胞和NK细胞、 记忆T细胞、 部分Treg细胞以及滤泡T辅助细胞。 TIGIT和 两个配体结合： CD155(又称PVR或Necl ‑5)和CD112， 且对CD155的亲和力远高于CD112 。 TIGIT 和CD226竞争性结合CD155/CD112(T IGIT比CD226对配体  CD155/C112有超10倍的亲和 力)产 生免疫抑制信号。 [0005]TIGIT的配体CD155和CD112广泛表达于肿瘤细胞， CD226作为免疫共刺激受体促进 免疫细胞对肿瘤的细胞毒杀伤作用及抗肿瘤效应， 而TIGIT的作用则和CD226相反。 TIGIT也 被肿瘤微环境中经常存在的梭杆核酸状菌(Fusobacterium  nucleatum)所利用而阻碍免疫 保护的反应， 譬如TIGIT和此细菌的Fap2蛋白结合后抑制NK细胞的细胞毒杀伤作用。 在肿瘤 微环境中， TIGIT和PD ‑1、 TIM‑3、 LAG‑3一起高表达于功能缺失或耗竭状态的CD8+肿瘤浸润 性淋巴细胞上。 共同抑制TIGIT和PD ‑1受体， 或者共同抑制T IGIT和TIM ‑3， 则可以提高CD8+T 细胞的增生、 杀伤肿瘤细胞的炎症因子产生、 逆转CD8+T细胞的耗竭状态， 达到促进抗肿瘤说　明　书 1/6 页 3 CN 115043910 A 3