(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210305144.2 (22)申请日 2022.03.25 (71)申请人 中国农业科 学院北京畜牧兽医研究 所 地址 100193 北京市海淀区 圆明园西路2号 (72)发明人 储明星　赵福林　王翔宇　狄冉　 贺小云　 (74)专利代理 机构 北京高沃 律师事务所 1 1569 专利代理师 刘奇 (51)Int.Cl. C12Q 1/6888(2018.01) C12Q 1/6858(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种与绵羊胸椎数相关的SNP分子标记、 引 物组、 试剂盒及检测方法和应用 (57)摘要 本发明涉及一种与绵羊胸椎数相关的SNP分 子标记、 引物组、 试剂盒及检测方法和应用， 属于 绵羊SNP分子标记技术领域。 本发明提供了一种 与绵羊胸椎数相关的SNP分子标记， 所述SNP位点 位于绵羊第5号染色体上第40945978bp位点处； 所述SNP位点位于ABCA7基因外显子区。 基于绵羊 基因组序列信息 版本号Oar_v3.1， 该位点的碱基 存在G/A突变， 与绵羊胸椎数具有显著的相关性， 在绵羊育种过程中， 可将GA型个体选留下来， 从 而提高绵羊群 体的胸椎数。 权利要求书2页 说明书8页 序列表1页 附图1页 CN 114657261 A 2022.06.24 CN 114657261 A 1.一种与绵 羊胸椎数相关的SNP分子标记， 其特征在于， 所述SNP位点位于绵羊第5号染 色体上第40945978bp位 点处； 所述SNP位 点位于ABCA7基因外 显子区。 2.基于权利要求1所述分子标记的利用Sequenom SNP技术检测绵羊胸 椎数的引物组， 其特征在于， 包括第一引物、 第二引物和延伸引物； 所述第一引物的核苷酸 序列如SEQ  ID No.1所示； 所述第二引物的核苷酸序列如SEQ  ID No.2所示； 所述延伸引物 的核苷酸序列如SEQ  ID No.3所示。 3.基于权利要求1所述分子标记或权利要求2所述引物组的利用S equenom SNP技术检测绵羊胸椎数的试剂盒， 包括dNTPs、 Taq  DNA聚合酶、 MgCl2、 PCR反应缓冲液和 SAP酶， 其特 征在于， 还 包括权利要求2所述的引物组。 4.基于权利要求3所述试剂盒的绵羊胸椎 数的检测方法， 包括以下步骤： 1)提取待测绵羊的基因 组DNA； 2)以待测绵羊的基因组DNA为模板， 利用权利要求2所述引物 组中的第一引物和第二引 物进行PCR扩增反应， 获得PCR扩增产物； 3)用SAP酶对步骤2)获得的PCR扩增产物进行消化， 获得消化后的产物； 4)以步骤3)获得的消化后的产物为模板， 利用权利要求2所述引物组中的延伸引物进 行延伸反应， 获得延伸产物； 5)利用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱技术分析延伸产物， 确定ABCA7基因的基 因型。 5.根据权利 要求4所述的检测方法， 其特征在于， 步骤2)中， 所述PCR扩增反应的体系以 196孔PCR板+38％的试剂损耗计， 包括： 所述PCR扩增反应的反应程序为： 预变性94℃2mi n； 变性94℃20s， 退火5 6℃30s， 延伸72℃6 0s， 45个循环； 72℃保持3mi n。 6.根据权利要求4所述的检测方法， 其特征在于， 步骤3)中， 所述消化的体系以196孔 PCR板+38％的试剂损耗计， 包括：权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114657261 A 2所述消化的程序为： 37℃， 40mi n； 85℃， 5mi n。 7.根据权利 要求4所述的检测方法， 其特征在于， 步骤4)中， 所述延伸反应的体系以196 孔PCR板+38％的试剂损耗计， 包括： 所述延伸反应的程序为： 94℃30s； [94℃5s， (52℃5s， 80℃5s)]； 其中所述(52℃5s， 80℃5s)进行5个循环， 所述 [94℃5s， (52℃5s， 80℃5s)]进行40个 循环； 72℃3mi n。 8.权利要求1所述的分子标记或权利要求2所述的引物组或权利要求3或4所述的试剂 盒在绵羊育种中的应用， 所述绵羊育种包括培 育绵羊胸椎 数多的品种。 9.根据权利要求8所述的应用， 其特征在于， 所述绵羊育种过程中， 筛选基因型为GA 的 绵羊作为胸椎 数多的绵羊。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114657261 A 3