(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210294712.3 (22)申请日 2022.03.24 (71)申请人 重庆市农业科 学院 地址 400050 重庆市九龙坡区白市驿镇高 峰寺村 申请人 西南大学　重庆市梁平区良种场 (72)发明人 方波　于杰　王元伟　徐益硶　 赵倩　 (74)专利代理 机构 重庆信必达知识产权代理有 限公司 5 0286 专利代理师 刘竹 (51)Int.Cl. C12Q 1/6895(2018.01) C12Q 1/686(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种李属资源分子标记及其应用 (57)摘要 本发明涉及分子生物学技术领域， 公开了一 种李属资源分子标记及其应用， 李属资源包括大 石早生、 五月脆、 好莱坞和冰糖李， 分子标记为 DNA条形码， DNA条形码为叶绿体rbcL ‑accD基因 间隔区的序列， 还公开了应用， 分子标记用于鉴 定不同李属资源品种， 还公开了一种李属资源的 鉴定方法； 本发明利用叶绿体rbcL ‑accD基因间 隔区进行引物设计， 设计出的引物对经过PCR扩 增后产物的碱基序列差异进行鉴定， 可以直接获 得鉴定结果， 实现不同李属资源品种的快速鉴 定， 检测准确性高、 可重复性高以及鉴定时间短。 权利要求书1页 说明书5页 序列表1页 附图2页 CN 114574621 A 2022.06.03 CN 114574621 A 1.一种李属资源分子标记， 其特征在于， 所述李属资源包括大石早生、 五月脆、 好莱坞 和冰糖李， 所述分子标记为DNA条形码， DNA条形码为叶绿体rbcL ‑accD基因间隔区的序列， 为SEQ ID NO.1所示的碱基序列。 2.根据权利要求1所述的一种李属资源分子标记的应用， 其特征在于， 所述分子标记用 于鉴定不同李属资源品种， 所述分子标记利用叶绿体rbcL ‑accD基因间隔区的序列设计引 物对。 3.用于鉴定不同李属资源品种的引物对， 其特征在于， 所述引物对序列为： Flz006(上 游引物序列)： 5 ’AGGATTGAGCCGAATACAATAA  3’(SEQ ID NO.2)； Rlz006(下游引物序列)： 5 ’ AAACGCAGGATCAGGATATAAT 3’(SEQ ID NO.3)。 4.一种李属资源的鉴定方法， 其特 征在于， 包括如下步骤： (1)提取待测李属资源样品的基因 组DNA， 每 个李属资源样品各 取三份； (2)利用设计出的引物对进行PCR扩增， 对 扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳检测； (3)对扩增产物进行测序， 对测序结果比对分析后， 通过碱基序列的差异进行鉴定 。 5.根据权利 要求4所述的一种李属资源的鉴定方法， 其特征在于， 步骤(2)所述的PCR扩 增， 其反应体系为2 5 μL： DNA模板2 μL、 上游引物1 μL、 下游引物1 μL、 PCR  SuperMix(+dye)12.5 μL和ddH2O  8.5 μL； 其反应程序为： 94℃ 预变性5min； 94℃变性30s， 58℃ 退火30s， 72℃延伸 30s， 循环3 0次； 94℃变性3 0s， 50℃退火3 0s， 72℃修复延伸5mi n， 保存。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114574621 A 2一种李属资源分子标记及其应用 技术领域 [0001]本发明涉及分子生物学技 术领域， 具体一种李属资源分子标记及其应用。 背景技术 [0002]李是蔷薇科、 李属植物， 广泛分布于世界各国， 也是我国重要的传统果树之一。 李 果实富含类胡 萝卜素、 维生素和花色苷等生物活性物质， 具有 预防多种疾病的功效， 深受消 费者喜爱。 我国李属资源极其丰富， 李品种 数量繁多， 随着育种水平的提高， 大量优质地方 品种被成功选育， 我国李种质资源极其丰富， 李品种 数量繁多， 命名不科学， 同名异物或同 物异名的现象十分严重， 严重阻碍了李种质资源的开发利用。 因此， 通过系统的研究， 完善 品种资源分类， 对李种质资源的收集、 保存和利用具有十分重要的意 义。 [0003]近年来， DNA条形码对物种进行分类鉴定已经成为一种准确高效的方法， DNA条形 码技术是利用标准的、 具有足够变异的、 易扩增且相对较短的DNA片段在物种内的特异 性和 物种间的多样性而创建的一种新的生物身份识别系统， 可实现对物种的快速自动鉴定； 该 技术已被成功应用于生物物种分类和鉴定等领域， 并成为进展最迅速的学科前沿之一， 且 由于植物叶绿体基因组进化速率较快、 单性遗传等特点， 适合用来筛选植物DNA条形码以对 同类植物资源加以鉴定 。 发明内容 [0004]基于以上问题， 本发明提供一种李属资源分子标记及其应用， 本发明通过实验， 以 叶绿体基因组为基础， 筛选设计出了一对高质量的引物序列， 根据基因测序结果有效鉴定 区分四种李属资源大石早生、 五月脆、 好莱坞和冰糖李， 并通过三次重复试验及不同产地的 材料验证， 证明该引物对鉴定四种李属资源的可 行性。 [0005]为解决以上技术问题， 本发明提供了一种李属 资源分子标记， 所述李属资源包括 大石早生、 五月脆、 好莱坞和冰糖李， 所述分子标记 为DNA条形码， DNA条形码为叶绿体rbcL ‑ accD基因间隔区的序列， 其序列为SEQ  ID NO.1。 [0006]为解决以上技术问题， 本发明还提供了一种李属 资源分子标记的应用， 所述分子 标记用于鉴定不同李属资源品种， 所述分子标记利用叶绿体rbcL ‑accD基因间隔区的序列 设计引物对。 [0007]为解决以上技术问题， 本发明还提供了用于鉴定不 同李属资源品种的引 物对， 所 述引物对序列为： [0008]Flz006(上游引物序列)： 5 ’AGGATTGAGCCGAATACAATAA3 ’(SEQ ID NO.2)； Rlz006 (下游引物序列)： 5 ’AAACGCAGGATCAGGATATAAT 3’(SEQ ID NO.3)。 [0009]为解决以上技 术问题， 本发明还提供了一种李属资源的鉴定方法， 包括如下步骤： [0010](1)提取待测李属资源样品的基因 组DNA， 每 个李属资源样品各 取三份； [0011](2)利用设计出的引物对进行PCR扩增， 对 扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳检测； [0012](3)对扩增产物进行测序， 对测序结果比对分析后， 通过碱基序列的差异进行鉴说　明　书 1/5 页 3 CN 114574621 A 3