(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210293944.7 (22)申请日 2022.03.24 (71)申请人 上海捷诺生物科技有限公司 地址 200237 上海市徐汇区银都路218号3 号楼5层 (72)发明人 程鲁向　程天龄　董江锴　李威　 杜金凤　黄迎燕　 (74)专利代理 机构 北京北汇律师事务所 1 1711 专利代理师 李英杰 (51)Int.Cl. C12Q 1/689(2018.01) C12Q 1/70(2006.01) C12Q 1/686(2018.01) C12N 15/11(2006.01) C12R 1/01(2006.01) (54)发明名称 用于病原微生物检测的反应体系及方法和 试剂盒 (57)摘要 本发明公开一种用于病原微生物检测的反 应体系及方法和试剂盒。 该反应体系包含检测并 区分梅毒螺旋体、 纯疱疹病毒I型和单纯疱疹病 毒II型的引物对和探针， 其中引物对和探针均针 对相同酶的基因。 本发明的检测反应体系和试剂 盒能够利用荧光PCR技术在全封闭的扩增体系中 同时对梅毒螺旋体和纯疱疹病毒I型/II型进行 检测。 本发 明进一步对检测的反应体系进行了优 化， 提高样 本的分型和检出率的同时保证了样本 中所含有的病原体的稳定检出。 因此， 本发明的 反应体系及方法和试剂盒具有重要的临床意义 和流行病学意 义。 权利要求书1页 说明书13页 序列表2页 附图2页 CN 114540522 A 2022.05.27 CN 114540522 A 1.一种对性传播疾病相关病原微生物进行检测的反应体系， 其特征在于， 所述反应体 系包含检测并区分梅毒螺旋体、 纯疱疹病毒I型和单纯疱疹病毒II型的引物对和探针， 所述 引物对和探针均针对相同酶的基因。 2.根据权利要求1所述的对性传播疾病相关病原微生物进行检测的反应体系， 其特征 在于， 所述引物对包含用于扩增梅毒螺旋体的第一引物对、 用于扩增纯疱疹病毒I型和用于 扩增单纯疱疹病毒II型的第二引物对， 且所述引物的Tm值在55 ‑70℃之间和所述引物对各 自得到的扩增子在80 ‑150bp之间。 3.根据权利要求2所述的对性传播疾病相关病原微生物进行检测的反应体系， 其特征 在于， 所述探针包括与梅毒螺旋体特异 性结合的第一探针、 与纯疱疹病毒I型特异 性结合的 第二探针和与单纯疱疹病毒II型特异 性结合的第三探针， 且 所述探针各自的Tm值高于对应 的引物的Tm值。 4.根据权利要求1所述的对性传播疾病相关病原微生物进行检测的反应体系， 其特征 在于， 所述探针包 含荧光基团。 5.根据权利要求3所述的对性传播疾病相关病原微生物进行检测的反应体系， 其特征 在于， 所述第一引物对具有SEQ  ID NO:1‑2所示的序列， 所述第二引物对 具有SEQ ID NO:3‑ 4所示的序列； 所述第一探针具有SEQ  ID NO:5所示的序列， 所述第二探针具有SEQ  ID NO:6 所示的序列， 所述第三探针具有SEQ  ID NO:7所示的序列。 6.根据权利要求1所述的对性传播疾病相关病原微生物进行检测的反应体系， 其特征 在于， 进一 步包括针对人源内参基因的特异性引物和探针。 7.根据权利要求1所述的对性传播疾病相关病原微生物进行检测的反应体系， 其特征 在于， 所述相同酶为DNA聚合酶。 8.一种构建反应体系的方法， 其特征在于， 所述反应体系为根据权利要求1 ‑7任一项所 述的反应 体系， 所述方法包括使引物对和探针与缓冲液接触混合的步骤。 9.一种用于构建权利要求1 ‑7任一项所述反应体系的试剂 盒， 其特征在于， 包括针对相 同酶的基因的引物对和探针， 用于检测并区分梅毒螺旋体、 纯疱疹病毒I型和单纯疱疹病毒 II型。 10.根据权利要求9所述的试剂 盒， 其特征在于， 进一步包括说明书， 其中记载有构建反 应体系的步骤。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114540522 A 2用于病原微生物检测的反 应体系及方 法和试剂盒 技术领域 [0001]本发明涉及分子检测与分子诊断领域， 具体地涉及用于病原微生物检测的反应体 系及方法和试剂盒。 背景技术 [0002] [0003]性传播疾病主要由相关的微生物引起。 目前的科学研究发现， 已知有  30多种细 菌、 病毒和寄生虫通过性接触方式传播。 性传播疾病常见病原体有细菌感染(淋球菌， 沙眼 衣原体， 梅毒螺旋体， 杜克雷嗜血杆菌， 肉芽肿克雷白氏杆菌等)， 病毒感染(艾滋病毒， 单纯 疱疹病毒， 人乳头瘤病毒， 乙型肝炎病毒， 巨细胞病毒等)和寄生虫(阴道毛滴虫， 白色念珠 菌等)。 [0004]带来性传播疾病的各种病原体种类众多， 造成的症状千差万别， 传播性、 发病率、 以及致病的危害程度各不相同。 这给性传播疾病的诊疗带来了诸多的挑战。 在众多的性传 播疾病导致的症状中， 有一类疾病的症状表现在局部皮肤组织的缺损、 液化、 坏死类损伤， 通常称为溃疡。 不同的病原体， 不同的病程， 细节上有所不同。 引起这类症状的病原体主要 有梅毒螺旋体(Treponema  pallidum)和单纯疱疹病毒。 其中单纯疱疹病毒  (herpes  simplex virus,HSV)按照常见发病 部位的不同又分为两种亚型， 单纯疱疹病毒I型和单纯 疱疹病毒I I型， 分别通常引起口腔疱疹和生殖器疱疹。 [0005]性传播感染所表现出来的症状非常复杂， 上述提及的梅毒螺旋体、 单纯疱疹病毒 和杜克雷嗜血杆菌感染引起的症状类似， 在临床诊断中往往需要鉴别诊断。 总体来说， 虽然 大多数生殖器溃疡都是由性传播感染引起的， 但在排除性传播感染后还应考虑一些非感染 性病因。 临床医生面临的挑战为确定生殖器溃疡 的病因， 以开始适当治疗并降低传播给他 人的风险。 然而， 确定病因可能较为复杂， 因为当前的诊断性试验具有一定局限性以及患者 可能同时存在多种感染。 [0006]目前临床上， 对于这几类疾病的诊断依赖医生的经验， 实验室诊断的手段有限， 也 导致这些疾病容易产生漏诊和误诊， 都会给就诊者及其家庭带来的身心痛苦和沉重的经济 负担。 因此， 使得 临床上对于病原体的鉴别诊断有非常重要的意义， 尤其是对于合并感染的 情况。 [0007]随着对病原体基因组研究的深入和分子生物学技术的发展， 核酸检测正在成为病 原体鉴别诊断一个强有力的工具。 目前已开 发了众多针对不同病原体基因的体外分子诊断 试剂。 例如， 中国专利申请CN1865451A公开了一种性病混合感染PCR检测试剂盒， 其包括预 处理液、 扩增管和阳性模板， 阳性模板在血液型扩增管中为含乙型肝炎病毒、 人免疫缺陷病 毒、 人乳头瘤病毒、 梅毒螺旋体、 人巨细胞病毒、 单纯疱疹病毒或其中任意组合或单种病原 体的特定基因序列的质粒载体； 在分泌液型扩增管中为含白色念珠菌、 解脲支原体、 淋球 菌、 沙眼衣原体或其中任意组合或单种 病原体的特定基因序列的质粒 载体。 [0008]再例如， 中国专利申请CN112301169A公开了一种同步检测多种生殖道感染相关的说　明　书 1/13 页 3 CN 114540522 A 3