(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210293025.X (22)申请日 2022.03.23 (71)申请人 中国科学院南海 海洋研究所 地址 511458 广东省广州市南沙区海 滨路 1119号 (72)发明人 胡超群　张鑫　陈廷　任春华　 罗鹏　王艳红　江晓　 (74)专利代理 机构 广州科粤专利商标代理有限 公司 44001 专利代理师 朱聪聪　刘明星 (51)Int.Cl. C12Q 1/6888(2018.01) C12Q 1/6858(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种凡纳滨对虾抗副溶血弧菌感染性状相 关SNP标记及其应用 (57)摘要 本发明公开了一种凡纳滨对虾抗副溶血弧 菌感染性状相关SNP标记及其应用， 属于水产养 殖生物技术领域。 本发明提供了一种与凡纳滨对 虾抗副溶血弧菌感染性状相关的SNP分子标记， 其特征在于， 其位于凡纳滨对虾C型凝集素基因 序列编码区(SEQIDN O.2)的416bp位点处， 突变类 型为T/T纯合型、 T/A杂合型和A /A纯合型； 当变异 位点为A/A时， 凡纳滨对虾对副溶血弧菌的抗性 能力更强。 同时提供SNP位点扩增引物， 建立凡纳 滨对虾抗弧菌性状优良品种分子标记辅助选育 体系， 能够加快选育抗菌性状优良品种的选育进 程。 权利要求书1页 说明书4页 序列表2页 附图1页 CN 114540509 A 2022.05.27 CN 114540509 A 1.一种与凡纳滨对虾抗副溶血弧菌感染性状相关的SNP分子标记， 其特征在于， 其位于 凡纳滨对虾C型凝集素基因序列编码区的416bp位点处， 突变类型为T/T纯合型、 T/A杂合型 和A/A纯合型； 所述凡纳滨 对虾C型凝集素基因序列编码区的核苷酸序列如SEQ  ID NO.2所示。 2.一种凡纳滨对虾抗副溶血弧菌性状相关的SNP标记的检测引物， 其特征在于， 包括以 下引物： LvCTL‑SNP‑F： 5’ ‑GTGAGGTCTTGCGCAAATATC‑3’， LvCTL‑SNP‑R： 5’ ‑CCTCGTGTATCTGA ATAAGGGC‑3’。 3.一种含有权利要求2所述检测引物的试剂盒。 4.权利要求1所述的SNP分子标记、 权利要求2所述的检测引物或权利要求3所述的试剂 盒在鉴定或选 育抗副溶 血弧菌凡纳滨 对虾中的应用。 5.根据权利要求4所述的应用， 其特征在于， 所述的选育抗副溶血弧菌凡纳滨对虾， 包 括以下步骤： a.从凡纳滨 对虾亲虾 游泳足提取基因 组DNA； b.利用LvCTL ‑SNP‑F和LvCTL ‑SNP‑R引物对分别PCR扩增凡纳滨 对虾个体的DNA； c.对步骤b获得的扩增产物进行测序， 确定权利 要求1所述的SNP标记的基因型， 选择A/ A纯合型的雌虾和雄虾作为亲本， 以进行抗副溶 血弧菌性状凡纳滨 对虾的选 育。 6.根据权利要求5所述的应用， 其特征在于， 所述的PCR扩增， 其PCR体系及其终浓度组 成如下： PCR  Buffer 1×、 高保真PCR酶0.02U/μL、 dNTP  Mixture各200μM、 MgCl22 mM、 LvCTL‑SNP‑F 0.2 μM、 LvCTL ‑SNP‑R 0.2 μM、 虾基因组DNA  0.25ng/ μL， 其余由无菌双蒸水补 足至25 μL。 7.根据权利要求5所述的应用， 其特征在于， 所述的PCR扩增， 其反应程序为： 95℃预变 性5分钟； 95℃变性3 0秒， 60℃退火3 0秒， 72℃延伸3 0秒， 共35个循环； 72℃再延伸6分钟。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114540509 A 2一种凡纳滨对虾 抗副溶血弧菌感 染性状相关SNP标记及其 应用 技术领域 [0001]本发明属于水产养殖生物技术领域， 具体涉及一种凡纳滨对虾抗副溶血 弧菌感染 性状相关SNP标记及其应用。 背景技术 [0002]凡纳滨对虾(Litopenaeus  vannamei)俗称南美白对虾， 是世界第一养殖对虾品 种。 在我国， 2020年我国凡纳滨对虾养殖产量18 6万多吨， 占全国对虾 年产量的86％， 虾 苗生 产量 15000多亿尾， 市场对良种的需求巨大。 除北京、 吉林、 西藏以及青海等地区没有养殖 以外， 其他省市均有养殖。 从种质层面入手， 深入发掘和利用凡纳滨对虾的抗菌种质， 对于 凡纳滨对虾养殖业的健康发展具有重要意 义。 [0003]近年来， 凡纳滨对虾病害的暴发较为频繁， 其中弧菌病是对虾养殖过程中最为常 见、 危害最大的病害。 由副溶血弧菌感染引起的 “急性肝胰腺坏死综合症(AHPND) ”对凡纳滨 对虾的养殖造成巨大的损失。 AHPND致病质粒具备垂 直传播和水平传播的能力， 使得凡纳 滨 对虾AHPND高流行和高暴发。 凡纳滨对虾  AHPND从感染到病害暴发迅速， 1～3天内病死率达 到100％， 给养殖生产造成了极大的损失。 [0004]C‑型凝集素在无脊椎动 物先天免疫系统中能够识别入侵病原微生物， 激起免疫应 答。 凝集素可以对病原 微生物进 行结合、 凝集并抑制其生长； 同时凝集素也可以与吞噬细胞 上的受体结合， 增强其吞噬作用。 有研究表明， C ‑型凝集素在凡纳 滨对虾中是重要的免疫相 关功能基因。 发明内容 [0005]为解决上述问题， 本发明提供一种与凡纳滨对虾抗副溶血弧菌感染性状相关的 SNP标记、 扩增引物及其应用， 用于凡纳滨对虾抗菌性状优良品种的辅助选育， 从而加快凡 纳滨对虾抗菌性状优良品种的选 育进程。 [0006]本发明以副溶血弧菌抗性和易感对虾的基因组为模板， 通过PCR扩增和测序来检 测凡纳滨对虾C型凝集素基因上的SNP位点的基因型。 通过关联分析确定与凡纳 滨对虾抗弧 菌性状相关的SNP标记， 并提供SNP位点扩增引物， 建立凡纳滨对虾抗弧菌性状优良品种分 子标记辅助选 育体系。 [0007]本发明第一个目的是提供一种与凡纳滨对虾抗副溶血弧菌感染性状相关的SNP分 子标记， 其位于凡纳滨对虾C型凝集素基因序列编码区的416b p位点处， 该碱基为T或A， 突变 类型为T/T纯合型、 T/A杂合型和A/A纯合型， 所述凡纳滨对虾C型凝集素基因序列编码区的 核苷酸序列如SEQ  ID NO.2所示。 [0008]本发明第二个目的是提供一种凡纳滨对虾抗副溶血弧菌性状相关的SNP标记的检 测引物， 包括以下引物： [0009]LvCTL‑SNP‑F： 5’ ‑GTGAGGTCTTGCGCAAATATC‑3’，说　明　书 1/4 页 3 CN 114540509 A 3