(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210320805.9 (22)申请日 2022.03.21 (71)申请人 成都纳比微特检测技 术服务有限公 司 地址 610213 四川省成 都市天府新区万 安 镇麓山大道二段19号附1号2栋1层2 号、 3号 申请人 成都纳比生物科技有限公司 (72)发明人 张丹　袁旦一　陈冬　辜良斌　 何谦　李晓琪　余树芳　 (74)专利代理 机构 成都正德明志知识产权代理 有限公司 513 60 专利代理师 雷正 (51)Int.Cl. C12Q 1/6888(2018.01)C12Q 1/6851(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种用于检测鸡APOA1基因的引物及其检测 方法和试剂盒 (57)摘要 本发明公开了一种用于检测鸡 APOA1基因的 引物及其检测方法和试剂盒。 该引物序列如SEQ   ID NO.1和SEQ  ID NO.2所示， 具体是： APOA1 ‑F： TCCTTCTGGCAGCACGATG； (SEQ  ID NO.1)APOA1 ‑R： CCACAGCAGAGGACTCGAAC(SEQ  ID NO.2)。 本发明 设计的引物序列和相应的PCR检测方法能够快速 的检测出鸡APOA1含量， 检测灵敏度高， 特异性 好。 还能根据鸡APOA1含量来调整评价相应的日 粮的能量和蛋白含量。 权利要求书1页 说明书3页 序列表1页 附图2页 CN 114540512 A 2022.05.27 CN 114540512 A 1.一种用于检测鸡APOA1基因的引物， 其特征在于， 所述引物序列如SEQ  ID NO.1和SEQ   ID NO.2所示。 2.根据权利要求1所述的引物， 其特征在于， 所述引物序列为与鸡APOA1基因中的序列 互补的序列。 3.一种检测鸡APOA1基因的方法， 其特征在于， 以样品DNA为模板， 采用权利要求1所述 的引物进行PCR扩增， 扩增产物经酶切电泳判定结果。 4.根据权利要求3所述的方法， 其特征在于， 所述PCR反应体系包括2 ×Pro TaqHS  Probe Premix 12.5 μL、 10pmol/ μL的上、 下游引物各1μL、 模板DNA  2 μL， 最后用无菌水加至 25 μL。 5.根据权利要求3所述的方法， 其特征在于， 所述PCR程序为： 55℃15min； 95℃预变性 30s； 95℃变性10s； 6 0℃退火3 0s； 后两步进行39个 循环。 6.一种检测鸡APOA1基因的试剂盒， 其特 征在于， 包括权利要求1所述的引物。 7.根据权利要求6所述的试剂盒， 其特征在于， 所述试剂盒中还包括用于PCR反应的一 种或多种酶/试剂， 以及任选的其 他成分及用具。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114540512 A 2一种用于 检测鸡APOA1基因的引物及其检测方 法和试剂盒 技术领域 [0001]本发明属于基因检测技术领域， 具体涉及一种用于检测鸡APOA1基因的引物及其 检测方法和试剂盒。 背景技术 [0002]APOA1全称Apolipopr otein A‑I， 也称为载脂蛋白A1， 由APOA1基因编码， 分子量在 28kDa左右， 在肝脏合成产生， 构成了机体内主要的血浆高密度脂蛋白(High ‑density  Lipoprotein， HDL)组分， 作为高密度脂蛋 白主要结构成分(约占70％)， 在将胆固醇从外周 组织运至肝脏进 行代谢的胆固醇逆转运过程中发挥重要作用。 载脂蛋白是一类可与不溶于 水的脂类结合的蛋白质， 作为一种运载工具在机体循环系统和淋巴系统内不断穿梭循环， 行使运输脂类物质的重要作用。 此外， 该蛋白在病毒感染过程中， 也发挥举足轻重的作用。 例如通过临床样本调 查， 新冠病毒感染者的血液中也检测到了显著不同于健康者的APOA1 蛋白水平， 而 血清高密度脂蛋白和APOA1蛋白的水平过高， 感染新型冠状病毒的风险性也越 大。 因此， 该蛋白水平的变化可以作为新冠病毒感染的重要的预警信号， 这些也揭示了血液 中的APOA1蛋白水平可能是一种抵御病毒感染的功能蛋白， 但在禽类病毒感染过程中的鸡 APOA1蛋白变化情况以及是否发挥抵抗病毒感染的功能尚未可知， 值得众多研究人员进一 步探索。 [0003]实时荧光定量PCR技术于1996年由美国Applied  Biosystems公司推出， 由于该技 术不仅实现了P CR从定性到定量的飞跃， 而且与常规PCR相比， 它具有特异性更强、 有效解决 PCR污染问题、 自动化程度高等特点。 它通过荧光 染料或荧光标记的特异 性的探针， 对P CR产 物进行标记跟踪， 实时在 线监控反应过程， 结合相应的软件可以对产 物进行分析， 计算待测 样品模板的初始浓度， 因此利用荧光PCR法检测鸡APOA1可以有效提高检测灵敏度和特异 性。 [0004]但目前少有的文献报道的检测鸡APOA1方法较少且单一， 仅有普通PCR方法， 和考 马斯亮蓝染色法， 且检测灵敏度和特异性较低。 发明内容 [0005]针对现有技术中的上述不足， 本发明提供一种用于检测鸡APOA1基因的引物及其 检测方法和试剂盒， 可 快速检测出鸡APOA1含量， 检测灵敏度高， 特异性 好。 [0006]为实现上述目的， 本发明解决其 技术问题所采用的技 术方案是： [0007]一种用于检测鸡APOA1基因的引物， 该引物序列如SEQ  ID NO.1和SEQ  ID NO.2所 示。 具体如下： [0008]APOA1‑F： TCCTTCTGGCAGCACGATG； (SEQ  ID NO.1) [0009]APOA1‑R： CCACAGCAGAG GACTCGAAC。 (SEQ ID NO.2) [0010]进一步地， 引物序列为与鸡APOA1基因中的序列互补的序列。 [0011]一种检测鸡APOA1基因的方法， 以样品DNA为模板， 采用上述引物进行PCR扩增， 扩说　明　书 1/3 页 3 CN 114540512 A 3