(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210273636.8 (22)申请日 2022.03.19 (71)申请人 陕西省杂交油菜研究中心 地址 712100 陕西省咸阳市杨凌示范区高 干渠路西段6号 (72)发明人 张彦锋　穆建新　安然　谢长根　 郭徐鹏　黄淑华　朱彦涛　韦世豪　 董育红　关周博　范成民　宋敏　 陈娜娜　 (74)专利代理 机构 西安铭泽知识产权代理事务 所(普通合伙) 61223 专利代理师 崔瑞迎 (51)Int.Cl. C12Q 1/6895(2018.01) C12N 15/11(2006.01)A01H 1/04(2006.01) (54)发明名称 鉴别甘蓝型油菜细胞质 三系的分子标记组 及其方法和应用 (57)摘要 本发明属于分子鉴定方法领域， 涉及鉴别甘 蓝型油菜细胞质三系的分子标记组及其方法和 应用， 分子标记组包括S质、 N质、 R基因和r 基因的 分子标记， 鉴定S质和N质的分子标记的的引物为 SN‑F、 N‑R和S‑R， 鉴定R基因的分子 标记的引物为 R‑F和Rr‑R， 鉴定r基因的分子 标记的的引物为r ‑ F和Rr‑R。 本发明中的分子标记组能够准确鉴定 油菜pol CMS和陕2A细胞质雄性不育系、 保持系、 恢复系及其杂交种。 权利要求书1页 说明书5页 序列表4页 附图2页 CN 114561485 A 2022.05.31 CN 114561485 A 1.鉴别甘蓝型油菜细胞质三系的分子标记 组， 其特征在于， 所述分子标记 组包括S质、 N 质、 R基因和r基因的分子标记； 鉴定所述S质、 N质的分子标记的引物为SN ‑F、 N‑R和S‑R； 鉴定所述R基因的分子标记的引物为R ‑F和Rr‑R； 鉴定所述r基因的分子标记的引物为r ‑F和Rr‑R； 所述引物SN ‑F基因序列如SEQ  ID NO.1所示， 所述引物N ‑R基因序列如SEQ  ID NO.2所 示， 所述引物S ‑R基因序列如SEQ  ID NO.3所示； 所述引物R ‑F基因序列如SEQ  ID NO.4所示， 所述引物r ‑F基因序列如SEQ  ID NO.5所 示， 所述引物Rr ‑R基因序列如SEQ  ID NO.6所示。 2.根据权利要求1所述的鉴别甘蓝型油菜细胞质三系的分子标记组， 其特征在于， S质 基因序列如SEQ  ID NO.7所示， N质基因序列如SEQ  ID NO.8所示。 3.根据权利要求1所述的鉴别甘蓝型油菜细胞质三系的分子标记组， 其特征在于， R基 因序列如SEQ  ID NO.9所示。 4.根据权利要求1所述的鉴别甘蓝型油菜细胞质三系的分子标记 组， 其特征在于， 所述 引物r‑F和Rr‑R扩增的r条带由大小均为734bp的r1片段和r2片段混合而成， 其中， r1的序列 如SEQ ID NO.10所示， r 2的序列如SEQ  ID NO.11所示。 5.权利要求1所述的分子标记组在甘蓝型油菜细胞质三系鉴定中的应用。 6.根据权利要求5所述的分子标记组在甘蓝型油菜细胞质三系鉴定中的应用， 其特征 在于， 所述 三系为不育系、 保持系和恢复系。 7.一种应用权利要求1所述分子标记组鉴别甘蓝型油菜细胞质三系的方法， 其特征在 于， 具体过程包括如下步骤： 以油菜DNA为模板， 以SN ‑F/N‑R/S‑R， R‑F/Rr‑R和r‑F/Rr‑R三套引物分别进行扩增， 然 后进行结果判定， 结果 鉴定过程如下： 不育系的细胞质类型鉴定为S质， 扩增不出R条 带， 仅能扩增出1条 734bp的r条 带； 保持系细胞质类型鉴定为 N质， 扩增不出R条 带， 仅能扩增出1条 734bp的r条 带； 恢复系鉴定出2种细胞质类型， 一种为S质类型， 一种为N质类型， 扩增不出r条带， 仅能 扩增出1条 734bp的R条 带； 杂交种细胞质类型鉴定为S质， 能同时扩增出1条 734bp的R条 带和1条734bp的r条 带。 8.权利要求5所述的分子标记 组在甘蓝型油菜细胞质三系鉴定 中的应用， 其特征在于， 所述分子标记组用于Po lA和陕2A细胞质三系类型杂交种的纯度鉴定 。 9.权利要求8所述的分子标记 组在甘蓝型油菜细胞质三系鉴定 中的应用， 其特征在于， 杂交种判定标准为： 检测样品中有R条带， 判定为恢复系植株， 检测样品中仅有r条带， 判定 为不育系植株， 检测样品中同时有R和r条 带， 判定为杂交种。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114561485 A 2鉴别甘蓝型油菜细胞质三系 的分子标记组及其方 法和应用 技术领域 [0001]本发明属于分子鉴定方法领域， 鉴别鉴别甘蓝型油菜细胞质三系的分子标记组及 其方法和应用。 背景技术 [0002]细胞质雄性不育系(Cytoplasmic  male sterility， CMS)是油菜杂种优势利用的 核心不育系， 开启了油菜杂交优势利用的新时代， 对于世界油菜的发展具有里程碑式的意 义。 国内外发现或创制的油菜细胞质雄性不育类型有10余种， 包含:pol  CMS、 陕2A  CMS、 ogu  CMS、 nap CMS、 Tour  CMS、 Nca CMS、 hau CMS、 菘油CMS等， 其 中陕2A CMS与pol  CMS属于同一 类型的雄性不育。 1972 年傅廷栋发现国际上第一个有实用价值的油菜雄性不育系pol  CMS。 1985李殿荣利用陕2A  CMS雄性不育系育成了世界上第一个大面积用于生产的甘蓝型三系 杂交油菜品种秦油2 号。 历经50年的持续发展， 我国油菜全面 实现了品种杂交化， 其中pol  A 和陕2A不育系对于杂交种的培育起到了至 关重要的作用， 而且今后很长时间内仍将是油菜 杂种优势利用的骨干不育系， 持续为油菜杂优利用发挥重要作用。 对于恢复系的细胞质类 型的鉴定需以恢复系做母本， 用保持系给其授粉， 若 F2代种植株全为正常可育株， 则恢复系 为N质， 若群体中有1/4的不育株， 则恢复系 为S质， 由此可见， 鉴定一个油菜材料的恢、 保关 系需要1‑3年时间， 不仅费人、 费力， 而且严重影响着新品种的培育。 因此， 开发分子标记对 于油菜新品种的培 育具有十分重要的意 义。 发明内容 [0003]本发明所要解决的技术问题在于针对现有技术的不足， 提供了鉴别甘蓝型油菜细 胞质三系的分子标记组及其方法和应用， 所述分子标记组能够快速鉴定可育细胞质N和不 育细胞质S、 育性基因R和不育基因r， 可以准确鉴定油菜pol  CMS和陕2A细胞质雄性不育系、 保持系、 恢复系及其杂交种， 不仅可应用于油菜材料的恢保关系鉴定， 同时可用作细胞质三 系杂交种的种子纯度快速鉴定 。 [0004]本发明提供了鉴别甘蓝型油菜细胞质三系的分子标记组， 所述分子标记组包括S 质、 N质， R基因和r基因的分子标记； [0005]鉴定所述S质、 N质的分子标记的引物为SN ‑F、 N‑R和S‑R； [0006]鉴定所述R基因的分子标记的引物为R ‑F和Rr‑R； [0007]鉴定所述r基因的分子标记的引物为r ‑F和Rr‑R； [0008]所述引物SN ‑F基因序列如SEQ  ID NO.1所示， 所述引物N ‑R基因序列如SEQ  ID  NO.2所示， 所述引物S ‑R基因序列如SEQ  ID NO.3所示； [0009]所述引物R ‑F基因序列如S EQ ID NO.4所示， 所述引物r ‑F基因序列如SEQ  ID NO.5 所示， 所述引物Rr ‑R基因序列如SEQ  ID NO.6所示。 [0010]进一步地， 所述引物SN ‑F、 N‑R和S‑R混合使用扩增时， S质能够扩增出基因序列如 SEQ ID NO.7所示的1287bp长度的清晰条带或能够扩增出SEQ  ID NO.7所示的1287bp、 SEQ  说　明　书 1/5 页 3 CN 114561485 A 3